GB 5009.265-2021 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定

中华人民共和国国家标准GB5009.265—2021食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定2021-09-07发布2022-03-07实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局发布GB5009.265—2021Ⅰ前言本标准代替GB5009.265—2016《食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定》。本标准与GB5009.265—2016相比,主要变化如下:———将原第二法气相色谱-质谱法修订为第一法,修改了测定项目、样品前处理、气相色谱质谱条件、计算方法等;———将原第一法高效液相色谱法修订为第二法,修改了序号,简化了原理,统一了试样制备。GB5009.265—20211食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定1范围本标准第一法规定了食品中16种多环芳烃的气相色谱-质谱测定方法;第二法规定了食品中15种多环芳烃的液相色谱测定方法。本标准第一法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、动植物油脂及其制品中16种多环芳烃(苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、、5-甲基、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘)的测定;适用于婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品中4种多环芳烃(苯并[a]蒽、、苯并[b]荧蒽、苯并[a]芘)的测定。本标准第二法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、蔬菜、动植物油脂中15种多环芳烃(萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]苝)的测定。第一法气相色谱-质谱法2原理试样中多环芳烃经溶剂提取,氢氧化钾乙醇溶液皂化,固相萃取柱净化,浓缩后用气相色谱-质谱联用仪测定,同位素内标法定量。3试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。3.1.2二氯甲烷(CH2Cl2):色谱纯。3.1.3丙酮(C3H6O):色谱纯。3.1.4环己烷(C6H12):色谱纯。3.1.5正己烷(C6H14):色谱纯。3.1.6异辛烷(C8H18):色谱纯。3.1.7无水乙醇(C2H6O):色谱纯。3.1.8氨水(NH3·H2O):质量分数约25%。3.1.9无水乙醚(C4H10O)。3.1.10石油醚(C5H12O2):沸程为30℃~60℃。GB5009.265—202123.1.11氢氧化钾(KOH)。3.1.12无水硫酸钠(Na2SO4):使用前400℃下烘烤2h后放干燥器内待用。3.2试剂配制3.2.1氢氧化钾乙醇溶液(0.3mol/L):称取1.68g氢氧化钾,用100mL无水乙醇超声溶解,临用现配。3.2.2氢氧化钾乙醇溶液(1.5mol/L):称取8.40g氢氧化钾,用100mL无水乙醇超声溶解,临用现配。3.2.3环己烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将环己烷和乙酸乙酯按1∶1(体积比)混合均匀。3.2.4二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将二氯甲烷和乙酸乙酯按1∶1(体积比)混合均匀。3.2.5丙酮-异辛烷溶液(1+1):将丙酮和异辛烷按1∶1(体积比)混合均匀。3.3标准溶液3.3.1多环芳烃标准溶液多环芳烃标准溶液(含苯并[c]芴、苯并[a]蒽、环戊并[c,d]芘、、5-甲基、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[j]荧蒽、苯并[a]芘、茚并[1,2,3-c,d]芘、二苯并[a,h]蒽、苯并[g,h,i]苝、二苯并[a,l]芘、二苯并[a,e]芘、二苯并[a,i]芘、二苯并[a,h]芘,10.0μg/mL或相应浓度):经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液,-18℃下避光保存。多环芳烃CAS号见附录A。3.3.2同位素多环芳烃内标溶液同位素多环芳烃内标溶液(至少含D12-苯并[a]蒽、D12-、D12-苯并[b]荧蒽、D12-苯并[a]芘、D12-茚并[1,2,3-c,d]芘、D14-二苯并[a,h]蒽、D12-苯并[g,h,i]苝,100.0μg/mL或相应浓度),-18℃下避光保存。同位素多环芳烃内标CAS号见附录A。警告———多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质,并且致癌性随着苯环数的增加而增加。进行标准溶液配制等操作时应特别注意安全防护,应在通风柜中操作,尽量减少暴露。3.4标准使用液配制3.4.1多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL):吸取多环芳烃标准溶液(10.0μg/mL)0.50mL于10mL容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4℃下避光密封保存,保存期3个月。3.4.2多环芳烃标准使用液(100.0ng/mL):吸取多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL)2.0mL于10mL容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4℃下避光密封保存,保存期3个月。3.4.3同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL):吸取同位素多环芳烃内标溶液(100.0μg/mL)0.10mL于50mL容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4℃下避光密封保存,保存期1年。3.4.4多环芳烃标准系列工作液:取8个锥底进样瓶,分别吸取多环芳烃标准使用液(100.0ng/mL)20.0μL、40.0μL、50.0μL、80.0μL和多环芳烃标准使用液(500.0ng/mL)20.0μL、40.0μL、50.0μL、100.0μL,再各加同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL)100.0μL,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)补充体积至200μL,多环芳烃标准系列工作液浓度为10.0ng/mL、20.0ng/mL、25.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0ng/mL、125.0ng/mL、250.0ng/mL,内标为100.0ng/mL,临用现配。GB5009.265—202134仪器和设备4.1气相色谱-四极杆质谱联用仪(GC-MS):配电子轰击离子源(EI源)。4.2电子天平:感量为0.01g、0.001g。4.3高速粉碎机。4.4均质器。4.5恒温水浴装置。4.6超声波清洗器。4.7氮吹仪。4.8高速离心机:转速≥10000r/min。4.9涡旋振荡器。4.10精密移液器。4.11固相萃取小柱(苯乙烯二乙烯基苯聚合物)或等效净化柱:6mL,300mg。5分析步骤5.1样品前处理5.1.1试样制备5.1.1.1粮食及其制品取样品200g~500g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出100g左右,装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后-18℃下冷冻保存,供检测用。5.1.1.2肉及其制品、水产及其制品、蔬菜取样品200g~500g,将其可食部分先切碎,经均质器充分搅碎,取100g左右装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后-18℃下冷冻保存,供检测用。5.1.1.3动植物油脂及制品取散装动植物油脂及制品100g~200g,装于洁净样品瓶中,密封标识后放阴凉处保存,供检测用。定型包装动植物油脂贴标签放阴凉处保存,供检测用。5.1.1.4婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品取需粉碎样品200g~500g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出100g左右,装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后4℃下冷藏保存,供检测用。不需粉碎的婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品贴标签放阴凉处保存,供检测用。5.1.2试样提取5.1.2.1粮食及其制品称取试样5g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL)振荡混合后静置30min,加入5g无水硫酸钠、20mL环己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1),涡旋提取1min,超声提取15min,以10000r/min离心3min,吸取上清液至15mL预称重的离心GB5009.265—20214管中(精确至0.01g),45℃水浴下氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.01g),置于另一15mL具塞离心管中待皂化。5.1.2.2肉及其制品、水产及其制品称取试样5g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL)振荡混合后静置30min,加入20g无水硫酸钠,用金属角匙搅拌分散,加入20mL环己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1),涡旋提取1min,进一步超声提取15min,10000r/min离心3min,吸取上清液至15mL预称重的离心管中,45℃水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.01g),置于另一15mL具塞离心管中待皂化。5.1.2.3动植物油脂及制品称取试样0.5g~1g(精确至0.001g),置于15mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL),待皂化。5.1.2.4婴幼儿配方乳粉称取试样2g(精确至0.001g),置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL),加10mL水,涡旋溶解,加2mL氨水充分混匀,在65℃±5℃水浴中放置10min,取出冷却至室温。加入10mL无水乙醇,缓慢混匀,加入8mL无水乙醚,漩涡振荡5min,再加入8mL石油醚,漩涡振荡5min,10000r/min离心5min,吸出上层有机相至15mL预称重的离心管中,45℃水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。5.1.2.5婴幼儿辅助食品称取2g(精确至0.001g)试样,置于50mL具塞离心管中,加入100μL同位素多环芳烃内标使用液(200.0ng/mL),加10mL水、10mL无水乙醇,涡旋溶解,加入8mL无水乙醚,漩涡振荡5min,再加入8mL石油醚,漩涡振荡5min,以10000r/min离心5min,吸出上层有机相至15mL预称重的离心管中,45℃水浴中用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.01g),提取物待皂化。5.1.3皂化5.1.3.1提取物质量小于或等于0.2g(精确至0.01g),加5mL0.3mol/L氢氧化钾乙醇溶液,涡旋混匀,室温放置5min,加4mL水、5mL正己烷,涡旋提取2min,10000r/min离心2min,上层正己烷提取液待净化。5.1.3.2提取物质量在0.2g~1g(精确至0.01g)之间,加入5mL1.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液,加盖涡旋混匀,放置70℃±2℃水浴中进行皂化3min。皂化完成取出用自来水冷却至室温,加4mL水、5mL正己烷,涡旋提取2min,以10000r/min离心2min,上层正己烷提取液待净化。5.1.3.3动植物油试样中加入5mL1.5mol/L氢氧化钾乙醇溶液(固体油脂试样先放置50℃水浴融化后加入),加盖涡旋混匀,放置70℃±2℃水浴中进行皂化3min。皂化完成取出用自来水冷却至室温,加4mL水、5mL正己烷,涡旋提取2min,10000r/min离心2min,上层正己烷提取液待净化。注:苯并[c]芴对碱不稳定,测定苯并[c]芴时,皂化时间视油脂质量而定,以1g提取物皂化3min按比例折算。5.1.4净化在固相萃取小柱上加1g左右无水硫酸钠,依次用3mL二氯甲烷、3mL正己烷淋洗活化柱子,活GB5009.265—20215化结束后吸取全部正己烷提取液转移到固相萃取柱上,流速控制在1.0mL/min左右,待提取液全部通过填料层后,先用5mL正己烷淋洗除杂,再用5mL二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1)洗脱,收集洗脱液于10mL锥底玻璃试管内。