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书书书中华人民共和国国家标准犌犅１８８８６．３２１—２０２１食品安全国家标准食品添加剂 索马甜２０２１０２２２发布２０２１０８２２实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局发布书书书犌犅１８８６．３２１—２０２１１ 食品安全国家标准食品添加剂 索马甜１ 范围本标准适用于利用水提取法从非洲竹竽（犜犺犪狌犿犪狋狅犮狅犮犮狌狊犱犪狀犻犲犾犾犻犻）成熟果实假种皮中分离获得的食品添加剂索马甜。２ 相对分子质量索马甜Ⅰ：２２２０９（按２０１８年国际相对原子质量）索马甜Ⅱ：２２２９３（按２０１８年国际相对原子质量）３ 技术要求３．１ 感官要求感官要求应符合表１的规定。表１ 感官要求项 目要 求检验方法色泽奶黄色至棕色滋味和气味具有强烈甜味以及典型气味状态粉状，无正常视力可见外来杂质取适量试样置于洁净、干燥的白瓷盘中，在自然光线下观察其色泽和状态３．２ 理化指标理化指标应符合表２的规定。表２ 理化指标项 目指 标检验方法含量（以干基计），狑／％≥９３．０附录Ａ中Ａ．３总氮（以干基计），狑／％≥１５．１ＧＢ５００９．５干燥减量，狑／％≤９．０ＧＢ５００９．３直接干燥法ａ比吸收率１１．５～１３．０附录Ａ中Ａ．４吸光度≤０．２附录Ａ中Ａ．５碳水化合物（以干基计），狑／％≤３．０附录Ａ中Ａ．６硫酸盐灰分（以干基计），狑／％≤２．０附录Ａ中Ａ．７犌犅１８８６．３２１—２０２１２ 表２（续）项 目指 标检验方法ｐＨ（１％溶液）２．５～４．０ＧＢ５００９．２３７铝（Ａｌ）／（ｍｇ／ｋｇ）≤１００ＧＢ５００９．１８２铅（Ｐｂ）／（ｍｇ／ｋｇ）≤３．０ＧＢ５００９．７５或５００９．１２砷（以Ａｓ计）／（ｍｇ／ｋｇ）≤３．０ＧＢ５００９．７６或５００９．１１ ａ干燥温度和时间分别为１０５℃和４ｈ。３．３ 微生物指标微生物指标应符合表３的规定。表３ 微生物指标项 目指 标检测方法菌落总数／（ＣＦＵ／ｇ）≤１０００ＧＢ４７８９．２大肠菌群／（ＭＰＮ／ｇ）≤３．０ＧＢ４７８９．３犌犅１８８６．３２１—２０２１３ 附 录 犃检验方法犃．１ 一般规定本标准所用试剂和水在未注明其他要求时，均指分析纯试剂和ＧＢ／Ｔ６６８２规定的三级水。试验中所用标准溶液、杂质测定用标准溶液、制剂和制品在未注明其他要求时，均按ＧＢ／Ｔ６０１、ＧＢ／Ｔ６０２、ＧＢ／Ｔ６０３的规定制备。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。犃．２ 鉴别试验犃．２．１ 可溶性鉴定易溶于水，不溶于丙酮。犃．２．２ 茚三酮试验在５ｍＬ０．１％的样品溶液中，加入１ｍＬ新配制的茚三酮溶液（２００ｍｇ茚三酮溶解于水，定容至１００ｍＬ），产生蓝色。犃．２．３ 液相色谱试验在含量测定的液相色谱图上，供试样溶液的主峰与对照品溶液的主峰保留时间应一致。犃．３ 含量（以干基计）的测定犃．３．１ 测定原理索马甜为蛋白质类化合物，在２７９ｎｍ处具有紫外吸收光谱特征吸收峰，试样用水溶解，采用液相色谱分离，紫外检测器检测，外标法定量。犃．３．２ 试剂和材料犃．３．２．１ 水：一级水。犃．３．２．２ 乙酸铵。犃．３．２．３ 氯化钠。犃．３．２．４ 氢氧化钠。犃．３．２．５ 索马甜标准品：ＣＡＳ编号５３８５０３４３，纯度≥９９．０％。犃．３．３ 仪器和设备高效液相色谱仪，配紫外检测器或等效检测器。犃．３．４ 色谱分析条件犃．３．４．１ 色谱柱：以ＩＥＣＳＰ８５０００的钠离子分析柱，７５ｍｍ×８．０ｍｍ。或等效色谱柱。犃．３．４．２ 流动相：称取２９．２５ｇ氯化钠，１．５４ｇ乙酸铵溶解于１Ｌ水中，５ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠溶液调节ｐＨ犌犅１８８６．３２１—２０２１４ 至１０．０。犃．３．４．３ 流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ。犃．３．４．４ 柱温：３５℃。犃．３．４．５ 进样量：２０μＬ。犃．３．４．６ 检测波长：２７９ｎｍ。犃．３．５ 分析步骤犃．３．５．１ 标准溶液的制备标准储备溶液配制：准确称取索马甜标准品０．０５ｇ，精确至０．０００１ｇ，用水定容至５０ｍＬ容量瓶中。标准工作溶液配制：分别移取０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．４ｍＬ、０．５ｍＬ、１．０ｍＬ标准储备液至１０ｍＬ容量瓶中，用水定容，配制成１０．０μｇ／ｍＬ、２０．０μｇ／ｍＬ、４０．０μｇ／ｍＬ、５０．０μｇ／ｍＬ、１００．０μｇ／ｍＬ系列混合标准溶液。犃．３．５．２ 试样溶液的制备准确称量０．１ｇ干燥减重后的试样，精确至０．０００１ｇ，用水定容至１００ｍＬ容量瓶中，根据实际浓度适当稀释至标准曲线线性范围内。犃．３．５．３ 测定在参考色谱条件下，分别注入系列标准溶液、试样溶液进行测定，按外标法用系列标准溶液作校正表。各组分的参考保留时间和色谱图见附录Ｂ。犃．３．６ 结果计算索马甜含量的质量分数狑１按式（Ａ．１）计算。狑１＝犮×犞犿×１０００×１０００×犳×１００％…………………………（Ａ．１） 式中：犮 ———待测液中索马甜的浓度，单位为微克每毫升（μｇ／ｍＬ）；犞———试样溶液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样的质量，单位为克（ｇ）；１０００———换算因子；犳———稀释倍数。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得索马甜的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的５％。犃．４ 比吸收率的测定犃．４．１ 测定原理在最大波长（典型波长为２７９ｎｍ）处进行分光光度法检测。犃．４．２ 试剂和材料犃．４．２．１ 盐酸。犌犅１８８６．３２１—２０２１５ 犃．４．２．２ 水（相当于ＧＢ／Ｔ６６８２中的二级水）。犃．４．３ 仪器和设备犃．４．３．１ 双光束紫外／可见分光光度。犃．４．３．２ 光路为１０ｍｍ的石英比色皿。犃．４．３．３ 容量瓶。犃．４．３．４ 移液管。犃．４．３．５ 分析天平，感量为０．１ｍｇ。犃．４．３．６ 巴氏移液管。犃．４．３．７ ｐＨ计。犃．４．４ 分析步骤犃．４．４．１ 试样溶液的制备用水做空白液，盐酸调ｐＨ至２．５。此溶液为ｐＨ２．５空白溶液。精确称取约０．５ｇ试样于５０ｍＬ容量瓶中，用ｐＨ２．５空白溶液溶解，定容至５０ｍＬ。取５ｍＬ该索马甜试样溶液于１００ｍＬ容量瓶中，用ｐＨ２．５空白溶液定容至１００ｍＬ。犃．４．４．２ 测定分光光度计预热１０ｍｉｎ，将空白样品置于样品比色皿和参比比色皿中，在２５０ｎｍ～３００ｎｍ对分光光度计进行背景校正。将空白液从样品比色皿中倒出，用少量稀释过的索马甜溶液冲洗比色皿，之后加入稀释过的索马甜样品溶液，在２７９ｎｍ处的主峰处读取吸光度数据。犃．４．５ 结果计算比吸收率以犛计，按式（Ａ．２）和式（Ａ．３）计算。犛＝犆×２０×１００（１００－犠）×ＷＣＦ…………………………（Ａ．２） 其中ＷＣＦ＝犠Ｔ０．５…………………………（Ａ．３） 式中：犆———０．０５％索马甜吸收率；２０———索马甜试样溶液稀释倍数；１００———换算因子；犠———索马甜的水分含量（％）；ＷＣＦ———重量校正因子；犠Ｔ———实际使用的索马甜试样的质量，单位为克（ｇ）；０．５———理论上使用的索马甜试样的质量，单位为克（ｇ）。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的０．２％。犌犅１８８６．３２１—２０２１６ 犃．５ 吸光度的测定犃．５．１ 试剂和材料犃．５．１．１ 盐酸。犃．５．１．２ 水（相当于ＧＢ／Ｔ６６８２中的二级水）。犃．５．２ 仪器和设备犃．５．２．１ 双光束紫外／可见分光光度计。犃．５．２．２ 光路长为１０ｍｍ的石英比色皿。犃．５．２．３ ５０ｍＬ容量瓶。犃．５．２．４ 分析天平，感量为０．１ｍｇ。犃．５．２．５ 巴氏移液管。犃．５．２．６ ｐＨ计。犃．５．３ 分析步骤犃．５．３．１ 试样溶液的制备精确称取约０．５ｇ试样于５０ｍＬ容量瓶中，用适量的ｐＨ２．５空白溶液溶解，定容至５０ｍＬ。犃．５．３．２ 测定分光光度计预热１０ｍｉｎ，将ｐＨ２．５空白溶液置于样品比色皿和参比比色皿中，在３００ｎｍ～６００ｎｍ对分光光度计进行背景校正。将ｐＨ２．５空白溶液从样品比色皿中倒出，用少量试样溶液冲洗比色皿，之后加入试样溶液，在４２０ｎｍ处读取分光光度计吸光数值（犃４２０）。犃．５．４ 结果计算吸光度以犆计，按式（Ａ．４）计算。犆（犈１％１０ｍｍ，４２０ｎｍ）＝犃×１００（１００－犠）×ＷＣＦ……………………（Ａ．４） 式中：犃 ———波长４２０ｎｍ处１％索马甜样品的吸光度值；１００———换算因子；犠———索马甜的水分含量，％；ＷＣＦ———重量校正因子，按式（Ａ．３）计算。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的０．２％。犃．６ 碳水化合物的测定犃．６．１ 试剂和材料犃．６．１．１ 硫酸（８６％，体积比）：量取８７．８ｍＬ９８％浓硫酸缓慢加入至１２．２ｍＬ水中，待冷却后混匀。犃．６．１．２ Ｌ半胱氨酸盐酸一水合物水溶液（３０ｇ／Ｌ）。犃．６．１．３ 盐酸。犌犅１８８６．３２１—２０２１７ 犃．６．１．４ 半胱氨酸硫酸试剂：取０．５ｍＬＬ半胱氨酸盐酸一水合物水溶液与２５ｍＬ８６％硫酸溶液在１００ｍＬ锥形烧瓶中混合，冰浴中冷却（使用前配制）。犃．６．２ 仪器和设备犃．６．２．１ 双光束紫外／可见分光光度计。犃．６．２．２ 光路长为１０ｍｍ的１ｍＬ一次性塑料半微量比色皿。犃．６．２．３ ７５ｍｍ×１０ｍｍ一次性试管。犃．６．２．４ 旋涡混合机。犃．６．２．５ 电热恒温水浴锅。犃．６．２．６ １ｍＬ可调移液器。犃．６．２．７ 分析天平，感量为０．１ｍｇ。犃．６．２．８ 巴氏移液管。犃．６．２．９ ｐＨ计。犃．６．３ 分析步骤犃．６．３．１ 试样溶液的制备精确称取约０．２ｇ试样于１００ｍＬ容量瓶中，用适量的ｐＨ２．５空白溶液溶解，定容至１００ｍＬ。取０．２ｍＬ试样溶液于试管内，制备一套４个索马甜试样。取０．２ｍＬｐＨ２．５空白溶液制备一套空白液。用吸管向空白和试样中各加１．２ｍＬ半胱氨酸硫酸试剂，用旋涡混合机彻底混匀，在冰中放置２ｍｉｎ后移至室温放置３ｍｉｎ，之后浸入沸水中３ｍｉｎ。空白液和试样溶液在冰中冷却５ｍｉｎ。犃．６．３．２ 测定调整波长至４１２ｎｍ，分光光度计预热１０ｍｉｎ。将空白液置于样品比色皿和参比比色皿对分光光度计调零，拿出含空白液的样品比色皿，放置含试样溶液的比色皿，读取吸光度数值（犈４１２）。重复检测每套试样取平均值。犃．６．３．３ 标准曲线的制备用０．２ｍＬ的１０ｍｇ／ｍＬ～１００ｍｇ／ｍＬ的葡萄糖溶液按上述方法检测，制备标准曲线。犃．６．４ 结果计算根据标准曲线，按式（Ａ．５）计算碳水化合物含量狑３（以葡萄糖计）。狑３＝犮×犞犿×１０００×１００％…………………………（Ａ．５） 式中：犮 ———从标准曲线上查得的样液中葡萄糖的浓度，单位为毫克每毫升（ｍｇ／ｍＬ）；犞———定容后样液的体积，单位为毫升（ｍＬ）；犿———试样的质量，单位为克（ｇ）；１０００———换算因子。该结果未对样品进行水分含量校正，如报告“以干品计”，则必须进行相应的校正。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不大于算术平均值的０．２％。犌犅１８８６．３２１—２０２１８ 犃．７ 硫酸灰分的测定犃．７．１ 试剂和材料硫酸。犃．７．２ 仪器和设备犃．７．２．１ 铂坩埚。犃．７．２．２ 干燥器。犃．７．２．３ 坩埚钳。犃．７．３ 分析步骤精确称取约１．０ｇ试样于已预先灼烧、冷却并称重的铂坩埚内，每个试样分３份检测。向每个坩埚内加入约４０滴硫酸。将坩埚置于处于低温的高温炉内，在４ｈ～５ｈ内逐渐升温至５５０℃±１０℃，在该温度范围维持约５ｈ。取出坩埚，待冷却后向残留物中再加入５滴硫酸。炉温降至１００℃以下时，再将坩埚置于炉内，在３ｈ～４ｈ内缓慢升温至５５０℃左右，维持１ｈ。将坩埚取出置于干燥器内，冷却后重新称量。犃．７．４ 结果计算硫酸灰分含量以狑４计，按式（Ａ．６）计算。狑４＝犿Ａ犿×