22《食品添加剂维生素B2》标准文本

中华人民共和国国家标准GB14752—2010中华人民共和国卫生部发布2010-12-21发布2011-02-21实施食品安全国家标准食品添加剂维生素B2（核黄素）GB14752—2010I前言本标准代替GB14752—1993《食品添加剂维生素B2（核黄素）》。本标准与GB14752—1993相比,主要变化如下：——鉴别试验增加了紫外-可见分光光度法和红外分光光度法鉴别，修改了荧光法鉴别；——砷指标由≤3mg/kg修改为≤2mg/kg。本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB14752—1993。GB14752—20101食品安全国家标准食品添加剂维生素B2(核黄素)1范围本标准适用于经化学合成法及生物发酵法制得的食品添加剂维生素B2（核黄素）。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3.1化学名称7,8-二甲基-10-[（2S,3S,4R）-2,3,4,5-四羟基戊基]-3,10-二氢苯并蝶啶-2,4-二酮3.2分子式C17H20N4O63.3结构式NNNHNOHCH3H3COOOHHHOHOHH3.4相对分子质量376.36（按2007年国际相对原子质量）4技术要求4.1感官要求：符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽橙黄色取适量样品置于清洁、干燥的白瓷盘中，在自然光线下，观察其色泽和组织状态，嗅其气味。气味微臭组织状态结晶性粉末性状约在280℃时熔融，同时分解。溶液易变质。在碱性溶液中或遇光变质更快4.2理化指标：应符合表2的规定。GB14752—20102表2理化指标项目指标检验方法维生素B2（核黄素）（以干基计），w/%98.0～102.0附录A中A.4比旋光度αm(20℃,D)/〔(º)·dm2·kg-1〕-120～-140附录A中A.5感光黄素的吸光度≤0.025附录A中A.6干燥减量，w/%≤1.5附录A中A.7灼烧残渣，w/%≤0.3附录A中A.8重金属（以Pb计）/（mg/kg）≤10附录A中A.9砷（As）/(mg/kg)≤2附录A中A.10GB14752—20103附录A（规范性附录）检验方法A.1安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，操作时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2一般规定本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682—2008中规定的三级水。未指明的溶液为水溶液。试验中所用标准滴定溶液和其他所需溶液，在未注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602、GB/T603之规定制备。A.3鉴别试验A.3.1荧光试验A.3.1.1方法原理维生素B2（核黄素）具芳香环和杂环，有长共轭结构的π→π*跃迁，具有荧光性，在酸、碱性条件下及加入各种还原剂均会使维生素B2（核黄素）转变为无荧光的物质。A.3.1.2试剂和材料A.3.1.2.1盐酸溶液：1+2。A.3.1.2.2氢氧化钠溶液：40g/L。A.3.1.2.3连二亚硫酸钠。A.3.1.3分析步骤取约1mg实验室样品，加100mL水溶解后，溶液在透射光下显淡黄绿色并有强烈的黄绿色荧光；分成二份：一份中加盐酸溶液或氢氧化钠溶液，荧光即消失；另一份中加连二亚硫酸钠少许，摇匀后，黄色即消褪，荧光亦消失。A.3.2紫外-可见吸收光谱鉴别A.3.2.1方法原理维生素B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，其紫外-可见吸收光谱中有三个吸收峰（444nm，375nm与267nm），用A444nm/A267nm及A375nm/A267nm的比值来鉴别维生素B2（核黄素）。A.3.2.2试剂和材料A.3.2.2.1冰乙酸。A.3.2.2.2乙酸钠溶液：14g/L。A.3.2.2.3实验室样品溶液：避光操作。取约0.075g实验室样品，精确至0.001g，置烧杯中，加1mL冰乙酸与75mL水，加热溶解后，加水稀释，冷却至室温，移置500mL棕色容量瓶中，再加水稀释至GB14752—20104刻度，摇匀；精密量取10mL，置100mL棕色容量瓶中，加7mL乙酸钠溶液，并用水稀释至刻度，摇匀。A.3.2.3仪器和设备A.3.2.3.1紫外-可见分光光度仪。A.3.2.3.2石英池（1cm）。A.3.2.4分析步骤取实验室样品溶液扫描，在波长444nm±1nm、375nm±1nm与267nm±1nm处有昀大吸收，并测定吸光度（A），计算A375nm/A267nm的比值为0.31～0.33和A444nm/A267nm的比值为0.36～0.39。A.3.3红外光吸收图谱鉴别A.3.3.1试剂和材料溴化钾：光谱纯，干燥品。A.3.3.2分析步骤在红外灯下进行，以防止吸潮。将实验室样品和溴化钾粉末置入玛瑙乳钵中研匀，装入压片模具制备样片并进行扫描。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（附录B）一致。A.4维生素B2的测定A.4.1方法原理维生素B2（核黄素）具苯环结构，有多个共轭双键，在波长444nm处有昀大吸收，将样品溶液于该波长处测定吸光度，以百分吸光系数（1%1cmE）计算即得其质量分数。A.4.2试剂和材料A.4.2.1冰乙酸。A.4.2.2乙酸钠溶液：14g/L。A.4.3仪器和设备同A.3.2.3。A.4.4分析步骤取实验室样品溶液（A.3.2.2.3），在波长444nm±1nm处，以水为空白对照，测定吸光度（A）。A.4.5结果计算维生素B2（核黄素）的质量分数w1，数值以%表示，按公式（A.1）计算：125000100%323(1)100Awmw×=×××−×……………………………………（A.1）式中：5000——实验室样品稀释体积，单位为毫升（mL）；323——维生素B2（核黄素）的百分吸光系数（1%1cmE）；A——实验室样品溶液(A.3.2.2.3)的吸光度数值；m——实验室样品质量的数值，单位为克（g）；2w——A.7测得的干燥减量的数值，%。两次平行测定结果的绝对差值不大于1.5%。GB14752—20105A.5比旋光度的测定A.5.1方法原理维生素B2（核黄素）的核糖醇侧链2,3,4-位有三个不对称碳原子，具有旋光活性，在碱性条件下，呈左旋光性，以此检查样品的比旋度。A.5.2试剂和材料A.5.2.1二硝基苯肼试液：取1.5g2,4-二硝基苯肼，加20mL硫酸溶液（1+1），溶解后，加水使成100mL，过滤。A.5.2.2无醛乙醇：取2.5g乙酸铅，置具塞锥形瓶中，加5mL水溶解后，加1000mL乙醇，摇匀，缓缓加25mL乙醇制氢氧化钾溶液（1→5），放置1h，强力振摇后，静置12h，倾取上清液，蒸馏即得。检查：取25mL无醛乙醇，置锥形瓶中，加75mL二硝基苯肼试液，置水浴上加热回流24h，蒸去乙醇，加200mL硫酸溶液（2→100），放置24h后，应无结晶析出。A.5.2.3盐酸标准滴定溶液：c（HCl）=0.1mol/L。A.5.2.4无碳酸盐氢氧化钾溶液：取20g氢氧化钾，加100mL无醛乙醇，放置过夜后，吸取上清液，加无醛乙醇稀释成0.1mol/L的溶液，用0.1mol/L盐酸标准滴定溶液标定后，再精密量取18mL，加新沸过的冷水至100mL，摇匀。A.5.2.5实验室样品溶液：称取约0.25g实验室样品，精确至0.0001g，加无碳酸盐氢氧化钾溶液溶解并定量稀释制成每1mL中约含维生素B2（核黄素）5mg的溶液，摇匀。A.5.3仪器和设备A.5.3.1旋光仪。A.5.3.2旋光测定管。A.5.4分析步骤取实验室样品溶液，按GB/T613测定。A.5.5结果计算维生素B2（核黄素）的比旋光度mα（20℃，D）按公式(A.2)计算：()20C,Dmlαααρ°=…………………………………………(A.2)式中：α——测得的旋光角,单位为度(°)；l——旋光管的长度,单位为分米(dm)；αρ——溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g/mL)。A.6感光黄素的测定A.6.1方法提要维生素B2（核黄素）几乎不溶于三氯甲烷，杂质感光黄素溶于三氯甲烷，在440nm处有紫外吸收，因此用三氯甲烷提取感光黄素，排除维生素B2（核黄素）的干扰后，在此波长处测定，作限量检查。但维生素B2（核黄素）在乙醇中稍有溶解，为克服测定时的干扰，所以必须使用无醇三氯GB14752—20106甲烷。A.6.2试剂和材料A.6.2.1无水硫酸钠。A.6.2.2无醇三氯甲烷：取500mL三氯甲烷，用水洗涤3次，每次50mL，分取三氯甲烷层，用无水硫酸钠干燥12h以上，用脱脂棉过滤，蒸馏，即得。临用前配制。A.6.3仪器和设备A.6.3.1紫外-可见分光光度仪。A.6.3.2石英池（1cm）。A.6.4分析步骤A.6.4.1实验室样品溶液的制备：称取约0.025g实验室样品，精确至0.0001g，加10mL无醇三氯甲烷，振摇5min，过滤。A.6.4.2测定取实验室样品溶液，在波长440nm处，以无醇三氯甲烷为空白，测定吸光度（A）。A.7干燥减量的测定A.7.1仪器和设备A.7.1.1扁形称量瓶。A.7.1.2恒温干燥箱。A.7.2分析步骤称取约0.5g实验室样品，精确至0.0001g，置于105℃±2℃干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不可超过5mm，105℃±2℃干燥至恒重。A.7.3结果计算维生素B2（核黄素）干燥减量的质量分数2w，数值以%表示，按公式（A.3）计算：122100%mmwm−=×………………………………………………（A.3）式中：1m——干燥前实验室样品和称量瓶的总质量数值,单位为克（g）；2m——干燥后实验室样品和称量瓶的总质量数值,单位为克（g）；m——实验室样品的质量数值,单位为克（g）。取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.05%。A.8灼烧残渣的测定A.8.1方法原理样品加硫酸经灼烧后所留的硫酸盐，用重量法测定。A.8.2试剂和材料硫酸。A.8.3仪器和设备A.8.3.1瓷坩埚。A.8.3.2高温炉。GB14752—20107A.8.4分析步骤称取约1.0g实验室样品，精确至0.0001g，置于已在550℃±50℃灼烧至恒重的瓷坩埚中，用小火缓缓加热至完全炭化，冷却至室温后，加1mL硫酸使湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽后，移入高温炉中，在550℃±50℃灼烧至恒重。A.8.5结果计算维生素B2（核黄素）灼烧残渣的质量分数3w，数值以%表示，按公式（A.4）计算：343100%mmwm−=×……………………………………………（A.4）式中：3m——残渣和坩埚的总质量数值,单位为克（g）；4m——坩埚的质量数值,单位为克（g）；m——实验室样品的质量数值,单位为克（g）。取平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.02%。A.9重金属的测定A.9.1方法原理样品中杂质金属在酸性（pH3.5）条件下，与硫化氢或硫化钠试液显色。样品与标准铅溶液同法测定，以此检查其限度。A.9.2试剂和材料A.9.2.1硝酸。A.9.2.2硫酸。A.9.2.3盐酸。A.9.2.4甘油。A.9.2.5乙酸铵。A.9.2.6硝酸铅。A.9.2.7硫代乙酰胺。A.9.2.8氨试液：400→1000。A.9.2.9氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1mol/L。A.9.2.10盐酸溶液：c（HCl）=2mol/L。A.9.2.11盐酸溶液：c（HCl）=7mol/L。A.9.2.12氨水溶液：c（NH3·H2O）=5mol/L。A.9.2.13酚酞指示液：10g/L乙醇溶液。A.9.2.14乙酸盐缓冲液（pH3.5）：取25g乙酸铵，加水25mL溶解后，加38mL7mol/L盐酸溶液，用2mol/L盐酸溶液或氨水溶液准确调节pH至3.5（pH