27《食品添加剂维生素D2》标准文本

中华人民共和国国家标准GB14755—2010中华人民共和国卫生部发布2010-12-21发布2011-02-21实施食品安全国家标准食品添加剂维生素D2（麦角钙化醇）GB14755-2010I前言本标准代替GB14755—1993《食品添加剂维生素D2》。本标准与GB14755—1993相比，主要变化如下：——增加了红外光谱鉴别；——维生素D2的测定系统适用性试验所用样品由维生素D2改为维生素D3，高效液相色谱含量测定方法由内标法改为外标法；——洋地黄皂苷试验检查麦角甾醇修改为薄层色谱法；——增加了还原性物质指标和试验方法；——增加了重金属指标和试验方法；——增加了砷指标和试验方法。本标准的附录A和附录B为规范性附录，附录C为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB14755-1993GB14755-20101食品安全国家标准食品添加剂维生素D2（麦角钙化醇）1范围本标准适用于以麦角甾醇为原料制得的食品添加剂维生素D2。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3.1化学名称9,10-开环麦角甾-5,7,10（19）,22-四烯-3β-醇3.2分子式C28H44O3.3结构式CH2HOCHCHH3CCH3CHCHCH3CH(CH3)23.4相对分子质量396.66（按2007年国际相对原子质量）4技术要求4.1感官要求：应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽无色或白色取适量样品置于清洁、干燥的试管中，在自然光线下，观察色泽和组织状态，嗅其气味。气味无臭组织状态针状结晶或结晶性粉末4.2理化指标：应符合表2的规定。GB14755-20102表2理化指标项目指标检验方法维生素D2（C28H44O）,/%98.0～103.0附录A中A.4麦角甾醇，w/%≤0.2附录A中A.5比旋光度αm(20℃,D)/〔(º)·dm2·kg-1〕+102.0～+107.0附录A中A.6质量吸收系数α（265nm）/（L/cm·g）46～49附录A中A.7还原性物质（四唑蓝显色试验），w/%≤0.002附录A中A.8砷（As）/(mg/kg)≤2附录A中A.9重金属（以Pb计）/(mg/kg)≤20附录A中A.10GB14755-20103附录A（规范性附录）检验方法A.1安全提示本标准试验方法中使用的部分试剂具有毒性或腐蚀性，按相关规定操作，使用时需小心谨慎。若溅到皮肤上应立即用水冲洗，严重者应立即治疗。在使用挥发性酸时，要在通风橱中进行。A.2一般规定本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682—2008中规定的三级水。试验方法中所用杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T602、GB/T603之规定制备。A.3鉴别试验A.3.1醋酐浓硫酸呈色试验A.3.1.1试剂和材料A.3.1.1.1三氯甲烷。A.3.1.1.2乙酸酐。A.3.1.1.3硫酸。A.3.1.2分析步骤取约0.5mg实验室样品，加5mL三氯甲烷溶解后，加0.3mL醋酐与0.1mL硫酸，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，昀后变为绿色。A.3.2红外光谱试验采用溴化钾压片法，按照GB/T6040进行试验，实验室样品的红外光谱应与对照的图谱一致（对照图谱见附录B）。A.4维生素D2的测定A.4.1方法提要用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品分离，用紫外吸收检测器检测，用外标法定量，计算样品中维生素D2的含量。A.4.2试剂和材料A.4.2.1正戊醇：色谱纯。A.4.2.2正己烷：色谱纯。A.4.2.3异辛烷：色谱纯。A.4.2.4维生素D2对照品。GB14755-20104A.4.2.5维生素D3对照品。A.4.3仪器和设备高效液相色谱仪（HPLC）。A.4.4色谱分析条件推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表A.1，维生素D3系统适用性试验高效液相色谱图参见图C.1，各组分的相对保留时间参见表C.1。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱柱长250mm，柱内径4.6mm，硅胶色谱柱流动相正己烷-正戊醇（1000+3）流速2mL/min检测器检测波长254nmA.4.5分析步骤A.4.5.1维生素D3对照品系统适应性试验贮备液的制备称取约25mg维生素D3对照品，精确至0.0001g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烷，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，摇匀充氮密塞，避光，0℃以下保存。A.4.5.2实验室样品溶液的制备称取约25mg实验室样品，精确至0.0001g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烷，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，摇匀。量取5mL±0.05mL上述溶液，置10mL棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。A.4.5.3维生素D2对照品溶液的制备称取约25mg维生素D2对照品，精确至0.0001g，置100mL棕色容量瓶中，加80mL异辛烷，用超声处理助溶1min，避免加热，使完全溶解，再加异辛烷至刻度，量取上述溶液5mL±0.05mL，置10mL棕色容量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。A.4.5.4系统适用性试验以硅胶为填充剂的色谱柱，正己烷-正戊醇（1000+3）为流动相，检测波长254nm，流速约为2mL/min。量取维生素D3对照品贮备溶液5mL，置具塞玻璃容器中，充氮后密塞，置90℃水浴加热1h，取出迅速冷却，加正己烷5mL±0.05mL，摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支主波长分别为254nm和365nm的紫外光灯下，将石英吸收池斜放成45°，并距灯管5cm～6cm，照射5min，使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速甾醇D3。取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次，相对标准偏差应不大于2.0%，前维生素D3（与维生素D3的比保留时间为0.5）与反式维生素D3（与维生素D3的比保留时间约为0.6）以及维生素D3与速甾醇D3（与维生素D3的比保留时间约为1.1）的峰分离度均应大于1.0。A.4.5.5测定取20μL实验室样品溶液注入液相色谱仪,记录色谱图，另取维生素D2对照品溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算出供试品中维生素D2的含量。A.4.6结果计算GB14755-20105根据色谱图计算维生素D2的质量分数w1，数值以%表示，按公式(A.1)计算12112100%mAwAm×=××………………………………（A.1）式中：1m——对照品溶液中维生素D2的进样量的数值，单位为微克（μg）；2A——实验室样品溶液中维生素D2的峰面积的数值；1A——对照品溶液中维生素D2的峰面积的数值；2m——实验室样品溶液中维生素D2的进样量的数值，单位为微克（μg）。取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定的允许绝对差不大于1.5%。A.5麦角甾醇的测定A.5.1方法提要将维生素D2溶液点样于薄层板上，经展开，显色后，所得的色谱图与对照品溶液按同法所得的色谱图作对比，对维生素D2进行杂质检查。A.5.2试剂和材料A.5.2.1角鲨烷氯仿溶液：10g/L。A.5.2.2展开剂:环己烷-乙醚（1+1）。A.5.2.3维生素D2对照品。A.5.2.4麦角甾醇对照品。A.5.3分析步骤A.5.3.1对照品溶液的配制称取约50mg维生素D2对照品，精确至0.0002g，用1mL角鲨烷氯仿溶液溶解，得对照品溶液。A.5.3.2实验室样品溶液的配制称取约50mg维生素D2实验室样品，精确至0.0002g，用1mL角鲨烷氯仿溶液溶解，得实验室样品溶液。A.5.3.3麦角甾醇对照溶液的配制称取约5mg麦角甾醇对照品，精确至0.1mg，置于50mL容量瓶中，加角鲨烷氯仿溶液40mL溶解并稀释至刻度，摇匀。A.5.3.4显色剂的配制取1.0g三氯化锑，加20mL乙酰氯溶解。A.5.3.5测定分别取10μL对照品溶液、实验室样品溶液及麦角甾醇对照溶液，分别点于以羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，用展开剂暗处展开，晾干，用显色剂显色。实验室样品溶液与对照品溶液的主斑点Rf值及颜色应一致，实验室样品溶液的杂质斑点不得深于麦角甾醇对照溶液相应的斑点。A.6比旋光度的测定GB14755-20106A.6.1试剂和材料无水乙醇。A.6.2仪器和设备旋光仪。A.6.3分析步骤取实验室样品适量，精确至0.0002g，加无水乙醇制成1mL中约含40mg的溶液，其他按GB/T613-2007规定的方法进行。（注：在溶液配制后30min内测定）。A.6.4结果计算比旋光度аm(20℃,D)按公式(A.2)计算：()20,mCDlααρ∂°=×……………………………………………(A.2)式中：α——测得的旋光角,单位为度(°)；l——旋光管的长度,单位为分米(dm)；αρ——溶液中有效组分的质量浓度,单位为克每毫升(g/mL)。A.7质量吸收系数的测定A.7.1试剂和材料无水乙醇。A.7.2仪器和设备紫外分光光度仪。A.7.3分析步骤称取实验室样品适量，精确至0.0002g，加乙醇制成每1mL中约含10μg样品的溶液，按照GB/T9721在265nm±1nm的波长处测定吸光度A，求其质量吸收系数。A.7.4结果计算根据吸光度A计算维生素D2的质量吸收系数α，数值以(º)·dm2·kg-1表示，按公式(A.3)计算：Abααρ=×…………………………(A.3)式中：A——样品溶液的吸光度的数值；b——光路长度（即吸收池厚度）的数值，单位为厘米（cm）；αρ——实验室样品溶液的质量浓度的数值，单位为克每升（g/L）。A.8还原性物质的测定A.8.1方法原理GB14755-20107还原性物质在强碱性溶液中能将四唑蓝还原为有色甲月替（formazan），与对甲二酚无水乙醇还原物质的标准溶液颜色比较做限量检查。A.8.2试剂和材料A.8.2.1无水乙醇。A.8.2.2甲醇。A.8.2.3冰乙酸。A.8.2.4四唑蓝甲醇溶液：50mg/mL。A.8.2.5羟化四甲铵溶液：羟化四甲铵水溶液(100g/L)-无水乙醇（1+9）。A.8.2.6对甲二酚无水乙醇溶液：0.2μg/mL。A.8.3分析步骤A.8.3.1实验室样品溶液的制备称取约0.1g实验室样品，精确至0.001g，溶解于无水乙醇中，稀释至10mL，加入0.5mL四唑蓝甲醇溶液和0.5mL羟化四甲铵溶液，静置5min，加入1.0mL冰乙酸，摇匀。A.8.3.2对照溶液的制备量取10mL±0.05mL0.2μg/mL对甲二酚无水乙醇溶液，加入0.5mL四唑蓝甲醇溶液和0.5mL羟化四甲铵溶液，静置5min，加入1.0mL冰乙酸，摇匀。A.8.3.3空白溶液的制备取10mL无水乙醇，加入0.5mL四唑蓝甲醇溶液和0.5mL羟化四甲铵溶液，静置5min，加入1.0mL冰乙酸，摇匀。A.8.3.4测定在525nm波长处，用空白溶液调零，分别测定实验室样品溶液与对照溶液的吸光度，实验室样品溶液的吸光度不得大于对照溶液。A.9砷的测定取5g±0.01g实验室样品，用干灰化法处理样品。取相同量的氧化镁、硝酸镁与试样同法处理，做试剂空白试验。量取10mL±0.05mL砷标准溶液（含砷2.0μg），同法处理，制备砷限量标准。按GB/T5009.76—2003砷斑法的规定进行。A.10重金属的测定A.10.1试剂和材料A.10.1.1硝酸。A.10.1.2硫酸。A.10.1.3盐酸。A.10.1.4甘油。A.10.1.5乙酸铵。A.10.1.6硝酸铅。A.10.1.7硫代乙酰胺。A.10.1.8氨试液：400→1000。GB14755-20108A.10.1.9氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1mol/L。