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GB25555－2010食品安全国家标准食品添加剂L-乳酸钙2010-12-21发布2011-02-21实施中华人民共和国国家标准中华人民共和国卫生部发布GB25555－2010I前言本标准的附录A为规范性附录。GB25555－20101食品安全国家标准食品添加剂L-乳酸钙1范围本标准适用于以发酵法生产的L-乳酸与碳酸钙（或氢氧化钙）合成制得的食品添加剂L-乳酸钙。2规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。3化学名称、分子式、结构式和相对分子质量3.1化学名称α-羟基丙酸钙3.2分子式C6H10CaO6·xH2O(x=0～5)3.3结构式3.4相对分子质量218.22（无水物）（按2007年国际相对原子质量）4技术要求4.1感官要求：应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽白色取适量实验室样品，置于清洁、干燥的玻璃培养皿中，在自然光线下，从上方及侧面观察其色泽及外观，嗅其气味。气味无异味组织状态颗粒或粉末4.2理化指标：应符合表2的规定。·（0~5）H2OGB25555－20102表2理化指标项目指标检验方法立体化学纯度（L体），%≥96.0附录A中A.4总乳酸钙（以干基计），w/%98.0～101.0附录A中A.5干燥减量，w/%22.0～27.0(五水)；15.0～20.0(三水)；5.0～8.0(一水)；≤3.0(无水)附录A中A.6水溶解试验通过试验附录A中A.7游离酸和游离碱试验通过试验附录A中A.8挥发性脂肪酸试验通过试验附录A中A.9镁及碱金属，w/%≤1.0附录A中A.10氯化物（以Cl计），w/%≤0.05附录A中A.11硫酸盐（以SO4计），w/%≤0.075附录A中A.12铁（Fe），w/%≤0.005附录A中A.13砷（As）/(mg/kg)≤2附录A中A.14铅（Pb）/(mg/kg)≤2附录A中A.15钡（Ba）试验通过试验附录A中A.16氟化物（以F计），w/%≤0.0015附录A中A.17GB25555－20103附录A（规范性附录）检验方法A.1警示试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况。操作者应采取适当的安全和防护措施。A.2一般规定除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682－2008中规定的三级水。试验方法中所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按GB/T601、GB/T602和GB/T603之规定制备。A.3鉴别试验A.3.1试剂和材料A.3.1.1硫酸。A.3.1.2高锰酸钾溶液：3.2g/L。A.3.1.3草酸铵溶液：40g/L。A.3.1.4盐酸溶液：1+3。A.3.1.5乙酸溶液：1+20。A.3.2分析步骤A.3.2.1钙盐的鉴别取约0.5g实验室样品，溶于10mL水，滴加草酸铵溶液，即产生白色沉淀。分离沉淀，加入乙酸溶液，沉淀不溶解；再加入盐酸溶液，沉淀完全溶解。A.3.2.2乳酸盐的鉴别取约0.5g实验室样品，加10mL热水溶解，滴加硫酸使其呈酸性，加高锰酸钾溶液，加热，即发出乙醛的气味。A.4立体化学纯度（L体）的测定A.4.1方法提要用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，通过色谱柱使样品溶液中L体乳酸钙和D体乳酸钙组分分离，用紫外吸收检测器检测，用面积归一化法定量，计算总乳酸钙中L体乳酸钙的含量，即为L-乳酸钙的立体化学纯度。A.4.2试剂和材料硫酸铜溶液：0.001mol/L。A.4.3仪器和设备A.4.3.1高效液相色谱系统(HPLC)A.4.3.1.1高压泵：无脉冲，能将流速保持在0.1mL/min～10.0mL/min。A.4.3.1.2定量环：5μL。GB25555－20104A.4.3.1.3紫外光检测器：可变波长。A.4.3.1.4数据处理系统：色谱工作站或数据处理机。A.4.3.2抽滤系统抽滤系统使用孔径为0.45μm的纤维素酯膜滤纸（用于流动相的预处理）。A.4.3.3过滤系统过滤系统使用孔径为0.45μm的纤维素酯膜滤纸（用于样品的预处理）。A.4.3.4微量进样针HPLC专用，50μL、100μL（或自动进样器）。A.4.4色谱分析条件推荐的色谱柱及典型操作条件见表A.1，立体化学纯度（L体）的测定典型高效液相色谱图见图A.1。保留时间：L体乳酸钙约18.5min，D体乳酸钙约23.5min（保留时间会有变动，以标准样品出峰时间为准）。其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均可使用。表A.1色谱柱和典型色谱操作条件色谱柱柱长150mm，柱内径4.6mm，以配位交换型光学活性固定相涂敷于ODS二氧化硅的填料手性色谱柱柱温（20～40）℃，控制精度±1℃流动相硫酸铜溶液流动速度/(mL/min)1.0检测器检测波长/nm254进样量/μL5（注入乳酸浓度约为0.1%），D体与L体分离度在1.0以上1——L体乳酸钙；2——D体乳酸钙。图A.1立体化学纯度（L体）测定典型高效液相色谱图A.4.5分析步骤A.4.5.1样品制备称取实验室样品约0.15g，精确至0.001g，加热水溶解后，转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用。A.4.5.2测定t/minGB25555－20105根据仪器说明书，调节仪器至表A.1所示的操作条件，待仪器稳定后即可开始测定。用微量注射器或用自动进样器进样，用色谱数据处理机或工作站处理计算结果，以面积归一化法定量。A.4.6结果计算立体化学纯度（L体）即总乳酸钙中L体乳酸钙的含量X1，数值以%表示，按式（A.1）计算：111100dAXAA=×+％………………………………（A.1）式中：Al——L体乳酸钙组分的峰面积；Ad——D体乳酸钙组分的峰面积。取两次平行测定结果的算术平均值为报告结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。A.5总乳酸钙（以干基计）的测定A.5.1方法提要在碱性条件下，以干燥减量后的试样消耗络合剂乙二胺四乙酸二钠标准滴定液的体积计算其总乳酸钙的含量，用钙试剂羧酸钠指示剂的颜色变化判断滴定的终点。A.5.2试剂和材料A.5.2.1氢氧化钠溶液：100g/L。A.5.2.2盐酸溶液：1+4。A.5.2.3乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液：c(EDTA)=0.05mol/L。A.5.2.4钙试剂羧酸钠指示剂：称取0.1g钙试剂羧酸钠盐，加10g在约110℃干燥过的氯化钠研磨，混匀。A.5.3分析步骤称取约0.3gA.6.1中干燥物A，精确至0.0002g，溶于已加有2mL盐酸溶液的50mL水中，边搅拌边滴加15mL乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液，再加5mL氢氧化钠溶液和0.1g钙试剂羧酸钠指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定液滴定至溶液呈现蓝色为终点。A.5.4结果计算总乳酸钙含量的质量分数w2,数值以%表示，按式(A.2)计算：(V/1000)cMw2=×100%…………………………(A.2)m式中：V——试料消耗乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液体积的数值,单位为毫升(mL)；c——乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液浓度的准确数值,单位为摩尔每升(mol/L)；m——试料质量的数值,单位为克(g)；M——乳酸钙（C6H10CaO6）的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）(M=218.2）取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。GB25555－20106A.6干燥减量的测定A.6.1分析步骤称取约1.5g实验室样品,精确至0.0002g,置于预先在(120±2)℃干燥至质量恒定的扁形称量瓶中,铺成3mm以下的层。在(120±2)℃的恒温干燥箱中干燥4h，置于干燥器中冷却30min称量。保留部分干燥物（此为干燥物A）用于总乳酸钙含量的测定。A.6.2结果计算干燥减量的质量分数w3，数值以%表示，按式(A.3)计算:m-m1w3=×100％………………………(A.3)m式中：m——干燥前试料质量的数值,单位为克(g)；m1——干燥后试料质量的数值,单位为克(g)。取两次平行测定结果的算术平均值为报告结果。两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。A.7水溶解试验A.7.1试剂和材料A.7.1.1硝酸溶液：1+2。A.7.1.2糊精溶液：20g/L。A.7.1.3硝酸银溶液：17g/L。A.7.1.4浊度标准溶液：含氯（Cl）0.01mg/mL。量取c(HCl)=0.1mol/L盐酸标准溶液14.1mL，置于50mL容量瓶中，加水稀释至刻度。量取该溶液10.00mL，置于1000mL容量瓶中，加水稀释至刻度。A.7.2分析步骤称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，置于25mL比色管中，加20mL水，在水浴上加热溶解，作为试验溶液；取另一只比色管，加入（0.20±0.02)mL浊度标准溶液，加水至20mL，加1mL硝酸溶液、0.2mL糊精溶液和1mL硝酸银溶液，摇匀，避光放置15min，作为标准比浊溶液。在无阳光直射情况下，目视轴向及侧面观察，试验溶液的浊度不得大于标准比浊溶液的浊度。A.8游离酸和游离碱试验A.8.1试剂和材料A.8.1.1氢氧化钠标准溶液：c(NaOH)=0.1mol/L。A.8.1.2酚酞指示液：10g/L。A.8.2分析步骤称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，溶于20mL无二氧化碳的水，加3滴酚酞指示液，不应有粉红色产生；加0.5mL氢氧化钠标准溶液，应呈粉红色。A.9挥发性脂肪酸试验GB25555－20107称取约0.5g实验室样品，精确至0.01g，置于干燥蒸发皿中，加1mL硫酸，搅拌，在水浴上加热，不应有脂肪酸气味逸出。A.10镁及碱金属含量的测定A.10.1方法提要样品中的钙在酸性条件下与草酸生成难溶的草酸钙沉淀，过滤，滤液中的镁及碱金属和硫酸加热生成硫酸盐，再过滤，滤液蒸干，灼烧后定量。A.10.2试剂和材料A.10.2.1盐酸。A.10.2.2硫酸。A.10.2.3氨水。A.10.2.4草酸溶液：150g/L。A.10.2.5甲基红指示液：1g/L。A.10.3分析步骤称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，加水40mL，再加1mL盐酸，煮沸1min，迅速加40mL草酸溶液和2滴甲基红指示液，用氨水中和至溶液刚好呈黄色，冷却至室温。移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，放置4h或过夜。用干燥滤纸过滤，取50mL澄清滤液，置于预先于（800±25）℃干燥至质量恒定的坩埚中，加0.5mL硫酸，在水浴上蒸发至近干，在电炉上加热至硫酸蒸气逸尽，于（800±25）℃灼烧至质量恒定。残渣质量不得大于5.0mg。A.11氯化物的测定按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录ⅧA的规定进行。称取0.1g实验室样品，精确至0.001g，其所呈浊度不得大于标准比浊溶液。量取（5±0.02)mL氯化物（Cl）标准溶液（0.01mg/mL）制备标准比浊溶液。A.12硫酸盐的测定按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录BⅧ的规定进行。称取试样0.20g，精确至0.001g，其所呈浊度不得大于标准比浊溶液。量取（1.5±0.02)mL硫酸盐（SO4）标准溶液（0.1mg/mL）制备标准比浊溶液。A.13铁的测定按《中华人民共和国药典》2005年版二部附录GⅧ的规定进行。称取0.5g实验室样品，精确至0.01g，加25mL水，置于水浴中加热溶解，冷却后为试验溶液，其所呈颜色不得深于标准比色溶液。量取（2.5±0.02)mL铁（Fe）标准溶液（0.01mg/mL）制备标准比色溶液。A.14砷的测定按GB/T5009.76砷斑法进行。测定时称取1.0g实验室样品，精确至0.01g，加10mL热水溶解。限量标准液的配制：用移液管移取2.00mL砷（AS）标准溶液（相当于0.002mgAs），与试样同时同样处理。GB25555－20108A.15铅的测定按GB/T5009.75“限量试验”进行。样品处理为：称取3.0g试样，