SNT 5471-2022 西红花鉴定方法

ICS65.020.01CCSB16中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5471—2022西红花鉴定方法IdentificationofCrocussativusL.2022-07-07发布2023-02-01实施中华人民共和国海关总署发布学兔兔—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:拱北海关技术中心、海关总署国际检验检疫标准与技术法规研究中心。本文件主要起草人:张卫东、孙双艳、黄静、林伟、闫邦奇、权永兵、徐淼锋、廖力、水克娟、黄永辉、迟远丽。ⅠSN/T5471—2022学兔兔条形码检验鉴定方法。本文件适用于西红花与常见伪品的真伪鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1花柱style柱头和子房间的连接部分,也是花粉管进入子房的通道。3.2柱头stigma位于雌蕊的顶端,是接受花粉的部位,柱头成熟时为花粉萌发提供必要的物质与识别信号,一般膨大或扩展成各种形状。3.3雌雄同花monoecious雌蕊和雄蕊在同一朵花内的现象。4基本信息中文名:西红花学名:CrocussativusL.异名:C.autumnalisSmith;C.officinalis(L.)Honck.;C.officinalisvar.sativusHuds;C.ors-iniiParl;C.pendulusStokes;C.sativusvar.casbmiruanusRoyle;C.sativussubsp.orsinii(Parl.)K.Richt.;C.sativusvar.officinalisL.;C.sativusvar.orsinii(Parl.)Maw;C.setifoliusStokes;GeanthusautumnalisRaf.;SafranofficinarumMedik.分类地位:被子植物门Angiospermae,单子叶植物纲Monocotyledoneae,百合目Liliflorae,鸢尾科Iridaceae,番红花属CrocusL.。西红花(CrocussativusL.)是鸢尾科植物番红花(参见附录A)的干燥柱头,具有很强的活血化瘀、1SN/T5471—2022学兔兔标准下载凉血解毒和解郁安神的功效。市场上常见的伪品有红花(CarthamustinctoriusL.)管状花冠、菊花(Chrysanthemum×morifoliumRamat.)舌状花冠、莲(NelumbonuciferaGaertn.)的干燥雄蕊、玉米(ZeamaysL.)花柱染色制品等。5方法原理根据番红花属的内转录间隔区(internaltranscribedspacer2,ITS2)序列特征,应用DNA条形码技术对西红花进行初筛鉴定,观察西红花的形态特征进行种类鉴定。6主要仪器设备、用具和试剂6.1主要仪器设备PCR仪、电泳仪、凝胶成像分析系统、体视显微镜、生物显微镜、分析天平(感量0.1mg)、低温冷冻高速离心机、微量分光光度仪、组织研磨器、生物安全柜、冰箱。6.2主要用具移液器(1000μL、200μL、100μL、10μL、2.5μL)及配套枪头、离心管、放大镜、研钵、镊子等。6.3主要试剂十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)、Tris饱和酚、三氯甲烷、异戊醇、异丙醇、75%乙醇、95%乙醇、蛋白酶K(20mmol/μL)、RNaseA、液氮、TE缓冲液、10×PCR缓冲液、氯化镁(25mmol/L)、dNTP(10mmol/L)、Taq酶(5U/μL)、引物、琼脂糖、DNA分子量标记和电泳缓冲液。除另有规定外,所有试剂均为分析纯,试验用水应符合GB/T6682中相关规定。7鉴定方法7.1形态学鉴定通过肉眼、放大镜和体视显微镜观察西红花的形态特征,依据西红花形态特征(参见附录B)进行种类鉴定。7.2分子生物学检测7.2.1DNA提取西红花DNA提取方法按附录C执行。7.2.2PCR检测西红花PCR检测应设置空白核酸提取对照和空白扩增对照,每个样品设置两个平行反应,具体方式按照GB/T19495.2中相关规定进行。具体操作按附录D执行,西红花与常见伪品ITS2序列信息参见附录E。2SN/T5471—2022学兔兔性状鉴别特征本品为鸢尾科植物番红花的干燥柱头,松散线状,三分枝,长约3cm,表面暗红色,上部较宽而略扁平,顶端边缘显不整齐的齿状,内侧有一短裂隙,下端有时残留一小段黄色花柱。体轻,质松软,无油润光泽,干燥后质脆易断。气特异,微有刺激性,味微苦。将柱头投入水中则膨胀,可见橙黄色成直线下降,并逐渐扩散,水被染成黄色。无沉淀,柱头呈喇叭状,有短缝。在短时间内用针拨之不破碎。8.2显微鉴别特征显微镜下柱头碎片由长方形薄壁细胞组成,排列紧密,内含色素物质。柱头上缘的薄壁细胞呈长条形,密集成绒毛状,长至100μm。外表皮细胞壁突起呈乳头状。花柱碎片为长方形薄壁细胞,排列紧密。细胞中含有小型草酸钙方晶或簇晶。导管多为环纹,细小,直径7.5μm~15μm,存在于花柱或柱头组织碎片内,亦可见螺纹导管。花粉粒呈圆球形,直径约100μm,外壁近于光滑,内含颗粒状物质。萌发孔难察见。8.3西红花与常见伪品的区别西红花与常见伪品的区别参见附录B。9结果判定9.1形态学结果判定送检样品符合第8章所描述的形态鉴定特征的,判定为西红花。9.2分子生物学结果判定送检样品ITS2基因序列结果与西红花基因序列相似性最高,最大相似度在99%以上,且形态学特征符合第8章描述的形态鉴定特征的,判定为西红花。送检样品ITS2基因序列结果与西红花基因序列相似性低于99%,判定为非西红花。10样品保存和处理样品应在低温的条件下保存,保存期为1年,以备复验。保存期满后,样品经灭活后妥善处理。3SN/T5471—2022学兔兔(资料性)番红花的形态鉴定特征A.1基本生物学特性多年生草本。A.2植株形态特征A.2.1茎鳞茎扁圆球形,直径约3cm,外被褐色膜质鳞叶。A.2.2叶叶均基生,9枚~15枚,窄条形,长15cm~20cm,宽2mm~3mm,边缘反卷,生细毛,基部有4片~5片宽卵形、鞘状鳞片。A.2.3花花茎甚短,不伸出地面;花1朵~2朵,顶生呈半开状,雌雄同花,淡蓝色、红紫色或白色,有香味,直径2.5cm~3cm;花被裂片6,2轮排列,倒卵形,淡紫色,花被筒细管状,长4cm~6cm;雄蕊3枚,直立,长2.5cm,花药黄色,顶端尖,基部箭形;雌蕊1枚,花柱橙红色,长约4cm,顶端3深裂,分枝弯曲而下垂,柱头略膨大呈喇叭状,较雄蕊长,顶端边缘有不整齐的锯齿,一侧具一裂隙。A.2.4蒴果蒴果椭圆形,长约3cm,具3钝棱;种子多数,圆球形,种皮革质。A.3形态特征图番红花植株、花、雄蕊和柱头形态特征见图A.1。a)植株与生境注:图片引自李光敏、罗俊图A.1番红花植株、花、雄蕊和柱头形态特征4SN/T5471—2022学兔兔)植株c)花图A.1番红花植株、花、雄蕊和柱头形态特征(续)5SN/T5471—2022学兔兔)雄蕊e)柱头图A.1番红花植株、花、雄蕊和柱头形态特征(续)6SN/T5471—2022学兔兔(资料性)西红花与常见伪品的鉴别B.1西红花与常见伪品的鉴别特征西红花与常见伪品的鉴别见表B.1。表B.1西红花与常见伪品的鉴别学名品名性状鉴别特征显微鉴别特征CrocussativusL.西红花本品为鸢尾科植物番红花的干燥柱头,松散线状,三分枝,长约3cm,表面暗红色,上部较宽而略扁平,顶端边缘显不整齐的齿状,内侧有一短裂隙,下端有时残留一小段黄色花柱。体轻,质松软,无油润光泽,干燥后质脆易断。气特异,微有刺激性,味微苦。将柱头投入水中则膨胀,可见橙黄色成直线下降,并逐渐扩散,水被染成黄色。无沉淀,柱头呈喇叭状,有短缝。在短时间内用针拨之不破碎显微镜下柱头碎片由长方形薄壁细胞组成,排列紧密,内含色素物质。柱头上缘的薄壁细胞呈长条形,密集成绒毛状,长至100μm。外表皮细胞壁突起呈乳头状。花柱碎片为长方形薄壁细胞,排列紧密。细胞中含有小型草酸钙方晶或簇晶。导管多为环纹,细小,直径7.5μm~15μm,存在于花柱或柱头组织碎片内,亦可见螺纹导管。花粉粒呈圆球形,直径约100μm,外壁近于光滑,内含颗粒状物质。萌发孔难察见CarthamustinctoriusL.红花本品为菊科植物红花不带子房的管状花冠,长约1cm~2cm,表面红黄色或红色;花冠筒细长,先端5裂,裂片呈狭条形,长5mm~8mm;雄蕊5枚,花药聚合成筒状,黄白色;柱头长圆柱型,顶端微分叉。质柔软,微有香气,味微苦。粉末呈橙红色用显微镜观察花各部均有分泌管分布,分泌管由分泌细胞单列纵向连接而成,细胞内充满淡黄色至红棕色物,分泌细胞直径5μm~40μm。花粉粒圆球形或椭圆形,直径64μm~80μm,外壁有短刺及疣状雕纹,萌发孔3个。花冠顶端细胞分化成乳头状绒毛,柱头表皮细胞分化成圆锥形末端较尖的单细胞毛Chrysanthemum×morifoliumRamat.菊花本品系由菊科植物菊花的舌状花冠染色加工而成,呈线状,长约1.5cm,表面暗红色,花冠上端平展呈扁舌状,基部圆筒状,内部藏有先端2裂的柱头。微有油润光泽,气微香。取样品置纸上可留下油渍,少许放于水中,水面出现油滴,水被染成红棕色针状物展开可见舌状花7SN/T5471—2022学兔兔西红花与常见伪品的鉴别(续)学名品名性状鉴别特征显微鉴别特征ZeamaysL.玉米本品由禾本科植物玉米的花柱染色加工而成,呈线状,长约1cm~3cm,表面呈红色或砖红色,略扁平,边缘具毛且稀疏,微有油润光泽,放置纸上,稍后纸上可见留下油渍。浸泡于水中,无橙黄色直线下降,水面出现油滴,水被染成红色,花柱不显喇叭状通过放大镜观察可见花柱、花丝以及花药,气微臭NelumbonuciferaGaertn.莲本品为睡莲科植物莲的干燥雄蕊,呈松散线状,表面淡黄色或棕黄色,花药长1cm~1.5cm,直径0.5mm左右,含较多花粉粒,呈螺旋状扭曲,花丝略扁呈丝状,稍弯曲,长1cm~1.6cm,气微香,味微涩。取本品少许投入水中,无橙黄色直线下降,但水被染成红色,可见雄蕊呈细丝状,不呈喇叭状在显微镜下观察为粉末呈红色,花粉粒近球形,极面观为3裂圆形,3沟,具沟膜,上有粗颗粒,外壁较厚。花丝外壁外侧有孔头状角质层B.2西红花与常见伪品的鉴别特征图西红花与常见伪品的鉴别特征见图B.1~图B.4。图B.1西红花8SN/T5471—2022学兔兔红花管状花注:图片引自图B.3玉米花柱9SN/T5471—2022学兔兔标准下载注:图片引自图B.4莲雄蕊01SN/T5471—2022学兔兔标准