SNT 5395-2022 闽楠鉴定方法

ICS65.020.01CCSB16中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5395—2022闽楠鉴定方法IdentificationofPhoebebournei(Hemsl.)Yang2022-07-07发布2023-02-01实施中华人民共和国海关总署发布学兔兔—2022*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023)编辑部:[phone]-7530中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张1.75字数52千字2023年1月第一版2023年1月第一次印刷印数1—500*书号:155175·705定价28.00元学兔兔—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国福州海关、中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国杭州海关、福建省林业科学研究院、中华人民共和国南京海关。本文件主要起草人:于文涛、陈乃中、张明哲、黄宇、林智勇、过赋文、王飞龙、吕继洲、伏建国、李小晶、李敏。ⅠSN/T5395—2022学兔兔范围本文件规定了闽楠的鉴定方法。本文件适用于闽楠的种子、植株、木材及其制品等的种类鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T14072林木种质资源保存原则与方法GB/T29894木材鉴别方法通则3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1退化雄蕊staminodium没有花药或者花药不育的雄蕊。3.2圆锥花序panicle无限花序的一种,主花轴分枝,每个分枝均为总状花序,整个花序形如圆锥。3.3横切面crosssection与树干主轴成垂直的切面为横切面。3.4径切面radialsection通过髓心与树干主轴方向平行的切面为径切面。3.5弦切面tangentialsection顺着树干主轴或木材纹理方向,不通过髓心与年轮平行或与年轮垂直的纵切面为弦切面。4基本信息中文名:闽楠,兴安楠木,竹叶楠学名:Phoebebournei(Hemsl.)Yang异名:MachilusbourneiHemsl.,Perseabournei(Hemsl.)Kosterm.,PhoebeacuminataMerr.,PhoebeblepharopusHand.-Mazz.1SN/T5395—2022学兔兔标准下载英文名:Minnan分类地位:被子植物门(Angiospermae),双子叶植物纲(Dicotyledoneae),樟目(Laurales),樟科(Lauraceae),楠属(PhoebeNees)。闽楠其他信息见附录A。5方法原理闽楠可能以植株、植株部分、木材及其制品等形式进出境,因此将闽楠的植株特征和木材特征作为其鉴定的主要依据。对于非木材及其制品,分子生物学方法可作为初筛辅助方法(按照附录B)。依据闽楠的形态特征、闽楠及近似种分种检索表(按照附录C)和分子生物学初筛辅助鉴定方法对疑似样品进行物种鉴定。6设备和试剂6.1设备及器具体视显微镜、电子天平、放大镜、解剖刀、解剖针、镊子、指形管、培养皿、白瓷盘、棉花、样品袋、标本夹、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、常规PCR仪、微量分光光度仪、电泳仪、凝胶成像系统、轮转切片机、高速冷冻离心机、生物安全柜、烘箱、高压灭菌锅、研钵、摇床、水浴锅、制冰机、纯水仪、旋涡振荡器、冰箱、冷冻混合研磨仪、微量移液器(2μL、10μL、20μL、100μL、200μL、1000μL)、离心管(2mL)、PCR反应管(0.2mL、0.5mL)。6.2试剂除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。植物基因组提取试剂盒、超纯水、DNAMarker、琼脂糖、核酸凝胶染料、液氮、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、Taq聚合酶、10×PCR缓冲液、防虫剂、樟脑精、干燥剂、CTAB法提取试剂(按照附录B)。7实验室检验将送检的原始样品制作为待检样品,样品为植株、部分植株或标本时根据形态学方法判定,可采取分子生物学初筛辅助鉴定方法鉴定后根据形态学方法判定,记录样品信息;样品为木材及其制品时,制样方法参照GB/T29894,并根据木材构造特征判定。余样作为保存样品。8鉴定方法8.1楠属形态学特征8.1.1生活型常绿乔木或灌木。8.1.2叶叶通常聚生枝顶,互生,羽状脉。2SN/T5395—2022学兔兔花花两性;聚伞状圆锥花序或近总状花序,生于当年生枝中、下部叶腋,少为顶生;花被裂片6;相等或外轮略小,花后变革质或木质,直立;能育雄蕊9枚,三轮,花药4室,第一、二轮雄蕊的花药内向,第三轮的外向,基部或基部略上方有具柄或无柄腺体2枚,退化雄蕊三角形或箭头形;子房多为卵珠形及球形,花柱直或弯,柱头钻状或头状。8.1.4果实果卵珠形、椭圆形及球形,少为长圆形,基部为宿存花被片所包围;宿存花被片紧贴或松散或先端外倾,但不反卷或极少略反卷;果梗不增粗或明显增粗。8.1.5种子藏于内果皮内,胚弯曲,子叶肥厚。8.2闽楠植株形态特征(见图D.1和图D.2)8.2.1茎树干通直,分枝少;老的树皮灰白色,新的树皮带黄褐色。小枝有毛或近无毛。8.2.2叶叶革质或厚革质,披针形或倒披针形,长7cm~15cm,宽2cm~4cm,先端渐尖或长渐尖,基部渐狭或楔形,上面发亮,下面有短柔毛,脉上被伸展长柔毛,有时具缘毛,中脉上面下陷,侧脉每边10条~14条,上面平坦或下陷,下面突起,横脉及小脉多而密,在下面结成十分明显的网格状;叶柄长5mm~20mm。8.2.3花序花序生于新枝中、下部,被毛,长3cm~10cm,通常3个~4个,为紧缩不开展的圆锥花序,最下部分枝长2cm~2.5cm;花被片卵形,长约4mm,宽约3mm,两面被短柔毛;第一、二轮花丝疏被柔毛,第三轮密被长柔毛,基部的腺体近无柄,退化雄蕊三角形,具柄,有长柔毛;子房近球形,与花柱无毛,或上半部与花柱疏被柔毛,柱头帽状。8.2.4果实核果,果椭圆形或长圆形,长1.1cm~1.5cm,直径6mm~7mm;宿存花被片被毛,紧贴,内果皮黄色、黄褐色或黑色。8.2.5种子由内果皮包被,卵状椭圆形,种皮薄,子叶大,平凸状,紧抱,胚近盾形,胚芽发达,长10mm~13mm,宽5mm~6mm,重0.2g~0.35g。8.3闽楠木材特征(参见图D.3)8.3.1总则闽楠木材呈浅黄微绿色,心边材区别不明显,材表光泽较弱,有微芳香气味,纹理较直,构造细腻均匀;生长轮略明显,多呈椭圆形,相邻生长轮间宽度略均匀,每厘米1轮~3轮。3SN/T5395—2022学兔兔横切面闽楠木材横切面上管孔呈星散状排列,大小近一致,分布均匀,为散孔材,管孔内偶见侵填体,木射线肉眼下明显,为中等木射线。8.3.3径切面闽楠木材径切面射线斑纹明显,轴向薄壁组织为傍管型,环管状,稀疏状,偶见翼状;部分细胞腔内具树胶,薄壁细胞端壁节状加厚不明显。8.3.4弦切面闽楠木材弦切面纹理呈典型波浪状,部分木纤维及导管色泽光亮,呈“金丝”状。8.4分子生物学初筛辅助鉴定闽楠分子生物学初筛辅助鉴定方法按照附录B执行。9结果判定样品为植株、植株部分时,经分子生物学初筛辅助鉴定方法判定为楠属植物后,以果实、种子、叶等特征为依据,符合8.2及附录C中闽楠特征的可鉴定为闽楠;木材样品符合8.3中闽楠木材特征的,可鉴定为闽楠。10样品保存鉴定为闽楠的样品应加以标识,注明编号、中文名称、学名、来源、进(出)境日期、鉴定人、鉴定时间,经手人签字后妥善保存。4SN/T5395—2022学兔兔(资料性)闽楠其他资料A.1保护地位闽楠为国务院1999年公布的《国家重点保护野生植物名录(第一批)》中的Ⅱ级重点保护野生植物,为中国珍贵的用材树种。A.2经济价值闽楠树干高大通直,木材芳香耐久,淡黄色,有香气,材质致密坚韧,不易反翘开裂,加工容易,削面光滑,纹理美观,为上等建筑、高级家具、雕刻工艺、造船等的优良木材。A.3地理分布闽楠为中国特有植物,分布于福建、江西、广东、广西、湖南、湖北及贵州。A.4生长环境闽楠多生于海拔1000m以下的亚热带常绿阔叶林中。5SN/T5395—2022学兔兔(规范性)闽楠分子生物学初筛辅助鉴定方法B.1样品的处理将需要提取DNA的闽楠植物材料(新鲜植物组织100mg,硅胶干燥的植物组织为10mg)放入2mL的离心管中,每个管内加2粒钢珠,加液氮后使用冷冻混合研磨仪研磨3min(30r/s)。B.2核酸的制备B.2.1试剂采用商品化的植物基因组提取试剂盒或采用改良的CTAB法提取植物基因组总DNA。CTAB提取液:CTAB20g/L,氯化钠1.4mol/L,Tris0.1mol/L(pH8.0),EDTA0.02mol/L(pH8.0),高压灭菌备用。三氯甲烷∶异戊醇(体积分数):24∶1。50×TAE缓冲液:242gTris,57.1mL冰乙酸,100mL0.5mol/LEDTA(pH8.0),充分溶解混匀后,加水定容至1L,高压灭菌备用。10×加样缓冲液:0.25%溴酚蓝,40%蔗糖。B.2.2提取步骤取新鲜组织0.1g或者硅胶干燥的组织0.03g,加入2mL离心管,再加入已预热至65℃的600μLCTAB提取液,充分振荡混匀;65℃水浴30min,不时颠倒混匀;10000r/min离心5min,取上清,等体积三氯甲烷、异戊醇(三氯甲烷∶异戊醇=24∶1)抽提一次;取上清,再加入等体积异丙醇,4℃沉淀10min以上,然后12000r/m离心10min,弃上清;70%乙醇洗涤1次~2次,晾干后,加入20μLTE缓冲液溶解沉淀,保存于-20℃冰箱冷冻备用。PCR级DNA溶液的OD260/OD280比值应为1.7~1.9。B.3DNA条形码片段扩增利用ITS片段的通用引物进行ITS片段扩增,引物序列、反应程序和反应体系见表B.1~表B.3。表B.1ITS引物序列引物引物序列ForwardITS5GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGGReverseITS4TCCTCCGCTTATTGATATGC6SN/T5395—2022学兔兔反应程序步骤反应温度/℃时间循环数预变性945min—变性9430s退火5630s延伸72300s35延伸7210min—表B.3PCR反应体系成分储备液浓度50μL反应体系加样体积/μLdNTP混合物(各10mmol/mL)2.5mmol/L4.010×PCR缓冲液(含Mg2+)—5.0ITS5引物10pmol/μL2.0ITS4引物10pmol/μL2.0Taq酶5U/μL0.5DNA模板0.3μg/μL~6μg/μL2.0ddH2O—补至50μL注:要设置阳性对照,空白对照(以ddH2O代替DNA样品),每个样品重复2次。可用商品化的PCRPremix。B.4PCR产物的检测取PCR产物5μL,1.5%琼脂糖凝胶电泳,核酸凝胶染料染色,在凝胶成像系统观察、拍照。B.5测序与序列处理取剩余的PCR扩增产物45μL,经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离,目的片段使用DNA产物纯化试剂盒纯化并双向测序。测序引物与PCR扩增引物相同。测序结果利用序列拼接软件进行拼接编辑,对比峰图,判断序列方向,去除测序引物序列,两端测序质量Q