SNT 5481-2022 进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法 液相色谱-质谱质谱法

ICS65.020.30CCSB41中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T5481—2022进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法液相色谱-质谱/质谱法DeterminationofGentamycininedibleanimalandfeedsforimportandexport—LC-MS/MS2022-07-07发布2023-02-01实施中华人民共和国海关总署发布学兔兔—2020《标准化工作导则第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国成都海关。本文件主要起草人:于刚、谭志、李永丽、何开蓉、俞凌云、肖宇、林华、李丹丹。ⅠSN/T5481—2022学兔兔标准下载进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法液相色谱-质谱/质谱法1范围本文件规定了食用动物、饲料中庆大霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于进出口工作中牛、猪、羊、鸡的血清,牛、猪、羊的尿液和猪饲料中庆大霉素的检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4试剂和材料除另有说明外,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇:色谱纯。4.2乙腈:色谱纯。4.3三氯乙酸:优级纯。4.4七氟丁酸(Heptafluorobutyricacid,HFBA):HPLC级。4.5甲酸:色谱纯。4.6标准物质:庆大霉素硫酸盐(C19H39N5O7·H2SO4),含量高于99.0%。4.7标准储备溶液:1.0mg/mL。称取4.6所述标准物质适量,用水配成1.0mg/mL的标准储备溶液于塑料容量瓶中,2℃~8℃保存。4.8标准工作溶液(10.0μg/mL):吸取4.7所述各标准储备溶液1mL于100mL塑料容量瓶中,用水定容至刻度,2℃~8℃保存。4.9三氯乙酸溶液(5%):称取三氯乙酸10.0g,用水200mL溶解(常温下保存2个月)。4.10七氟丁酸(HFBA)水溶液(500mmol/L):准确量取12.8mL七氟丁酸,用水稀释至200mL(4℃避光保存,有效期1个月)。4.11七氟丁酸(HFBA)水溶液(50mmol/L):准确量取4.10中七氟丁酸溶液10mL,用水稀释至100mL(4℃避光保存,有效期1个月)。4.12七氟丁酸(HFBA)水溶液(5mmol/L):准确量取4.11中七氟丁酸溶液10mL,用水稀释至100mL(4℃避光保存,有效期1个月)。4.13七氟丁酸(HFBA)水溶液(10mmol/L):准确量取50mmol/L七氟丁酸溶液10mL,用水稀释1SN/T5481—2022学兔兔。4.14HLB固相萃取柱(60mg/3mL)。4.150.22μm水相滤膜。5仪器设备5.1液相色谱串联质谱仪:配有电喷雾离子源。5.2天平:感量分别为0.01g和0.0001g。5.3氮吹浓缩仪。5.4高速冷冻离心机(最高转速可达15000r/min)。5.5固相萃取装置。6样品的采集与保存6.1血样的采集采集动物血样约10mL,待自然凝固后分离血清,分装于聚四氟乙烯材质小管,加盖密封。6.2尿样的采集采集动物尿样约10mL,12000r/min离心10min后,上清液分装于聚四氟乙烯材质小管,加盖密封。6.3饲料试样采集饲料样品约500g。在实验室粉碎混匀,四分法至约20g后分装于小塑料袋,密封。6.4试样的保存将分装后的血清、尿样于-20℃保存,饲料样品于4℃保存。7测定步骤7.1提取7.1.1血清和尿样试样称取约2g血清或尿样(精确至0.01g)于50mL离心管中,加入3mL三氯乙酸溶液(4.9),涡旋振荡1min,在4℃下10000r/min离心5min,取上清液置于15mL离心管中。用2mL三氯乙酸溶液重复提取1次,合并提取液,加2mL七氟丁酸(HFBA)水溶液(4.11),混匀,备用。7.1.2饲料试样称取约2g试样(精确至0.01g),加入5mL三氯乙酸溶液(4.9),涡旋振荡3min,在4℃下以10000r/min离心5min,取上清液层置于15mL塑料离心管中。用5mL三氯乙酸溶液(4.9)重复提取1次,合并提取液,加2mL七氟丁酸(HFBA)水溶液(4.11),混匀,备用。7.2净化固相萃取柱(HLB)(4.14)依次用甲醇、水、七氟丁酸(HFBA)水溶液(4.12)各3mL活化,取备用2SN/T5481—2022学兔兔标准下载液上柱,用水5mL淋洗,甲醇3mL洗脱,收集洗脱液于塑料离心管中,置于40℃水浴中轻微氮气流吹干,用七氟丁酸(HFBA)水溶液(4.12)1.0mL溶解残渣,经0.22μm滤膜过滤后,待测。7.3基质工作曲线的配制取空白试样(不含有庆大霉素的动物生物样品或饲料),按7.1和7.2进行提取净化,获得基质提取液。分别吸取适量标准工作溶液(4.8),依次加入相应试剂瓶中,用基质提取液定容至1.0mL,获得0.05mg/L、0.2mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L和5.0mg/L的系列基质标准工作溶液。7.4测定条件7.4.1液相色谱-质谱参考条件7.4.1.1色谱柱:C18,3μm,2.1×100mm,或相当者。7.4.1.2流速:0.3mL/min。7.4.1.3柱温箱温度:35℃。7.4.1.4进样量:5μL。7.4.1.5流动相:10mmol/LHFBA水溶液(A)和乙腈(B)。梯度洗脱条件见表1。表1梯度洗脱条件时间/min流动相A/%流动相B/%0.090103.010906.010906.5901010.090107.4.1.6离子源:电喷雾离子源。7.4.1.7扫描方式:正离子扫描。7.4.1.8检测方式:多反应监测。7.4.1.9电喷雾电压:5500V。7.4.1.10气帘气压力:20psi。7.4.1.11辅助气压力:GAS1,60psi;GAS2,60psi。7.4.1.12离子源温度:550℃。7.4.1.13定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量,见表2。表2庆大霉素定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量被测物名称离子对/(m/z)去簇电压/V碰撞能量/eV庆大霉素(C1)478.4/157.15022478.4/322.2a5041a为定量离子。7.4.2测定7.4.2.1定性测定在相同试验条件下,样品溶液中的被测物的保留时间与基质标准工作溶液中被测物的保留时间比3SN/T5481—2022学兔兔标准下载值,偏差在±2.5%之内。待测样品溶液中,被测物中各定性离子相对丰度与浓度接近的基质标准工作溶液中被测物的各定性离子相对丰度的比值,若偏差不超过表3规定的范围,则可判定为样品中存在庆大霉素。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差单位为%相对离子丰度5020~5010~20≤10允许的最大偏差±20±25±30±507.4.2.2定量测定在相同的仪器工作条件下,以基质标准溶液中被测组分峰面积为纵坐标,以对应的标准溶液浓度(mg/L)为横坐标,绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量,应使样品溶液中庆大霉素的响应值在仪器测定的线性范围内。在上述色谱和质谱条件下,庆大霉素(组分C1)的提取离子色谱图见附录A。7.5空白试验除不加试样溶液外,均按上述操作步骤进行。8结果计算庆大霉素的含量用色谱数据处理软件外标法计算或按式(1)计算:X=A×Cs×VAs×W…………………………(1)式中:X———试料中庆大霉素残留量,单位为毫克每千克(mg/kg);A———试样溶液中庆大霉素的峰面积;Cs———标准工作液中庆大霉素的浓度,单位为毫克每升(mg/L);V———溶解残余物所得试样溶液体积,单位为毫升(mL);As———标准工作液中庆大霉素的峰面积;W———样品质量,单位为克(g)。9检测限、定量限、回收率和精密度9.1检测限和定量限本方法对血清、尿样和猪饲料中庆大霉素的检测限为0.025mg/kg,定量限为0.05mg/kg。9.2回收率和精密度牛、猪、羊和鸡血清,牛、猪、羊尿液和猪饲料中庆大霉素类药物的添加回收率和精密度见附录B。4SN/T5481—2022学兔兔(资料性)多重反应监测(MRM)色谱图图A.1庆大霉素标准溶液多重反应监测(MRM)色谱图5SN/T5481—2022学兔兔(资料性)庆大霉素添加实验回收率和精密度数据B.1牛血清和尿样中添加回收率和精密度表B.1牛血清和尿样中添加回收率和精密度名称添加浓度μg/kg牛血清牛尿液回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10072.3~92.010.170.9~98.46.120070.6~98.59.275.9~96.09.550080~99.15.186~96.06.6B.2猪血清和尿样中添加回收率和精密度表B.2猪血清和尿样中添加回收率和精密度名称添加浓度μg/kg猪尿液猪血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10074.2~88.612.470~90.213.420075.8~9611.678.6~10111.150077~989.376.7~9810.3B.3羊血清和尿样中添加回收率和精密度表B.3羊血清和尿样中添加回收率和精密度名称添加浓度μg/kg羊尿液羊血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10077.4~97.86.279.6~86.89.420079~955.177.2~926.450082.5~97.57.081~95.57.06SN/T5481—2022学兔兔猪饲料鸡血清回收率/%精密度/%回收率/%精密度/%庆大霉素10079.6~102.86.279.4~100.88.420078.2~92.25.177.8~928.350082.5~94.67.081~93.56.07SN/T5481—2022学兔兔—1845T/NS中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食用动物、饲料中庆大霉素检测方法液相色谱-质谱/质谱法SN/T5481—2022*中国海关出版社有限公司出版发行北京市朝阳区东四环南路甲1号(100023)编辑部:[phone]-7530网址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张0.75字数18千字2023年1月第一版2023年1月第一次印刷印数1—500*书号:155175·856定价12.00元学兔兔标准下载