DB5404T 0004-2023 林芝灵芝标准综合体 第2部分：菌种生产技术规程

ICS65.020.20B055404林芝市地方标准DB5404/T0004—2023林芝灵芝标准综合体第2部分：菌种生产技术规程2022-12-03发布2023-01-03实施林芝市市场监督管理局  发布学兔兔—2023I目次前言..................................................................................II1范围................................................................................12规范性引用文件......................................................................13术语和定义..........................................................................14菌种来源............................................................................15场地、设施要求......................................................................16原材料要求..........................................................................16.1原料............................................................................16.2容器............................................................................26.3培养原料........................................................................27培养基参考配方......................................................................27.1一级种..........................................................................27.2二级种和三级种..................................................................28菌种制做............................................................................28.1拌料............................................................................28.2装袋............................................................................38.3灭菌............................................................................38.4冷却、消毒、接种................................................................38.5发菌............................................................................38.6后熟培养........................................................................38.7菌丝生长速度....................................................................48.8菌种成熟标准....................................................................49入库................................................................................4学兔兔—2023II前言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是《林芝灵芝标准综合体》的第2部分，《林芝灵芝标准综合体》已经发布了以下部分：——第1部分：菌种基本要求；——第2部分：菌种生产技术规程；——第3部分：菌袋制作规程；——第4部分：栽培技术规程；——第5部分：采收存储技术规范；——第6部分：分级规范。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由林芝禹翔企业服务中心提出。本文件由林芝市市场监督管理局归口。本文件起草单位：西藏自治区产品质量监督检验所、米林县丽云药材种植有限公司、林芝禹翔企业服务中心。本文件主要起草人：何天文、洛桑卓玛、罗笑娟、龙莎莎、辛双阳、次仁卓嘎、邵强、次仁罗布、段金华、赵明。学兔兔—20231林芝灵芝标准综合体第2部分：菌种生产技术规程1范围本文件规定了林芝灵芝菌种生产的术语与定义、菌种来源、场地、设施要求、原材料要求、培养基参考配方、菌种制作、入库等。本文件适用于林芝市灵芝菌种的培育。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T191包装储运图示标志GB/T4456包装用聚乙烯吹塑薄膜GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB/T12728食用菌术语GB5749生活饮用水卫生标准NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1742食用菌菌种通用技术要求NY5099无公害食品食用菌栽培基质安全技术要求3术语和定义GB/T12728界定的以及下列术语和定义适用于本文件。4菌种来源林芝灵芝以国家地理标志保护产品林芝灵芝产地范围内的林芝市巴宜区、米林县、工布江达县、波密县、察隅县、朗县、墨脱县共7个县（区）现辖行政区域为中心，采集的野生白肉灵芝（Ganodermaleucocontextum）驯化培育的菌种。5场地、设施要求应符合NY/T528的要求。6原材料要求6.1原料6.1.1栽培袋符合GB/T4456的要求。6.1.2培养基原料应符合NY5099的要求。学兔兔—202326.1.3栽培基配制用水应符合GB5749的规定。6.1.4一级种需经出菇试验确认农艺性状和商品性状等种性合格。6.2容器6.2.1一级种使用18mm×180mm或20mm×200mm的玻璃试管或培养皿。6.2.2二级种、三级种使用750mL或以下，耐121℃-126℃及以上高温高压的无色或近无色的、瓶口直径≤4cm的玻璃瓶或近透明的耐高温塑料瓶，或（13cm～17cm）×（26cm～33cm）耐121℃-126℃高温高压的聚丙烯塑料袋，各类容器都应使用能满足滤菌和透气要求的无纺布塑料盖。6.3培养原料6.3.1化学试剂类要使用化学纯或以上级别的试剂。6.3.2生物制剂和天然材料类材料要新鲜，无虫、无螨、无霉、洁净、干燥。7培养基参考配方7.1一级种以1000mL计：a)木屑PDA培养基马铃薯（去皮、切块或片）200g，杂木屑20g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。b)PDA培养基马铃薯（去皮、切块或片）200g，葡萄糖20g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。c)综合PDA（CPDA）培养基马铃薯（去皮、切块或片）200g，葡萄糖20g，蛋白胨2g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，琼脂20g，维生素B110mg，水1000mL，pH自然。7.2二级种和三级种以100g干料计：a)玉米（小麦、高粱）98g，轻质碳酸钙1g，硫酸钙1g。高粱（或玉米、小麦）浸泡12h-24h时，煮熟至掰开无白心，沥去多余水分，晾干表面水分，混合轻质碳酸钙和硫酸钙拌匀，pH自然。b)杂木屑77g，麸皮17g，玉米粉3g，轻质碳酸钙2g，硫酸钙1g，加水至培养料含水量60%，pH自然。c)玉米芯颗粒77g，麸皮17g，玉米粉3g，轻质碳酸钙2g，硫酸钙1g，加水至培养料含水量60%，pH自然。8菌种制做工艺流程备料→拌料→装袋→灭菌→冷却→接种→培养。8.1拌料将培养基按本规范第7章的配方比例称取，拌匀，并掌握好PH值。代料以用手紧握培养料成团，松开后龟裂，手掌有微量水迹为准（含水量60%～65%）。学兔兔—202338.2装袋用长33cm、宽17cm、厚0.05mm塑料菌袋。采用机械或手工装袋。压实填至袋口约4/5处，用菌种套环封袋口。8.3灭菌8.3.1常压灭菌灭菌锅加温达到100℃（海拔3000m左右的地方，压力达到0.04MPa时）保持12h～16h，停火2h后将料袋出锅。8.3.2高压灭菌排气2次,待冷气排净,压力达到0.105MPa～0.15MPa，温度121℃～126℃时保持15min～30min或20min，自然冷却至压力表到“0”时打开放气阀，打开炉门，待冷却至可以搬动时，将培养基袋取出。8.4冷却、消毒、接种8.4.1冷却料袋放置在接种室内，自然冷却至常温。8.4.2消毒接种场所准备好后，选用2%～3%来苏儿水溶液喷雾消毒，或选用国家卫生部和农业部规定的无公害药剂进行熏蒸消毒。8.4.3接种菌种符合NY/T528的要求,种菌龄30d～35d。17cm×33cm规格的菌种，每袋接20个～30个料袋。8.5发菌8.5.1菌袋摆放菌室前，用3%来苏尔水溶液对发菌室内空间喷雾消毒，然后将菌袋摆放在培养架上，或墙式叠堆在地面上，摆放方式和摆放密度依发菌室温度确定。8.5.2环境控制发菌温度控制在20℃～25℃，空气相对湿度保持50%～60%；菌丝封面后开始通风；发菌室需遮光，即“暗光培养，宜黑勿亮”。8.5.3发菌管理发菌15d左右进行一次全面检查，发现污染的及时清理，同时将菌袋上下、内外位置调换；菌袋间温度低于20℃，通过加温提高发菌室温度，促进菌丝生长。当袋内菌丝长至菌袋五分之四后，发菌室内再次喷洒3%来苏尔消毒。8.6后熟培养菌丝长满菌袋后，要后熟10d～30d。温度（18±2）℃，空气相对湿度40%～60%。学兔兔—202348.7菌丝生长速度8.7.1一级种在PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）培养基上，在避光、适温（25±1）℃条件下，菌丝长速为（8.2±1.1）mm/d，菌丝长满斜面的时间为8d～10d。8.7.2二级种在适宜培养基上、适宜培养容器里（以使用15cm×28cm聚丙烯塑料菌种袋、装量300g干料每袋为例），在避光、适温（25±1）℃条件下，菌丝长速为（8.0±0.8）mm/d，菌丝长满容器的时间为23d～30d。8.7.3三级种在适宜培养基上、适宜培养容器里（以使用17cm×33cm聚丙烯塑料菌种袋、装量400g干料每袋为例），在避光、适温（25±1）℃条件下，菌丝长速为（6