农业农村部公告第627号-1-2022 饲料中环丙氨嗪的测定

20221219发布－－20230301－－实施饲料中环丙氨嗪的测定46中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ65.120BDeterminationofcyromazineinfeeds中华人民共和国农业农村部发布农业农村部公告第627号—1—2022CCS农业农村部公告第６２７号—１—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口.本文件起草单位:河南省兽药饲料监察所.本文件主要起草人:吴宁鹏、张盼盼、韩立、彭丽、李慧素、李华岑、韩楠、史秀玲、韩俊伟、孟蕾、杨洁、袁聪、张崇威、陈阳、吴志明.Ⅰ农业农村部公告第６２７号—１—２０２２饲料中环丙氨嗪的测定１　范围本文件规定了饲料中环丙氨嗪的高效液相色谱和液相色谱Ｇ串联质谱测定方法.本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中环丙氨嗪的测定.本文件高效液相色谱法检出限为０􀆰５mg/kg,定量限为１􀆰０mg/kg;液相色谱Ｇ串联质谱法检出限为０􀆰０５mg/kg,定量限为０􀆰１mg/kg.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法GB/T２０１９５　动物饲料　试样的制备３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　高效液相色谱法４􀆰１　原理试样中的环丙氨嗪用乙腈Ｇ三氯乙酸溶液提取,经混合型阳离子交换柱净化,高效液相色谱仪测定,外标法定量.４􀆰２　试剂或材料除另有规定外,仅使用分析纯试剂.４􀆰２􀆰１　水:GB/T６６８２,一级.４􀆰２􀆰２　乙腈:色谱纯.４􀆰２􀆰３　甲醇:色谱纯.４􀆰２􀆰４　１％三氯乙酸溶液:称取三氯乙酸１􀆰０g,加水溶解并稀释至１００mL.４􀆰２􀆰５　提取液:取１％三氯乙酸溶液(４􀆰２􀆰４)１５mL,加乙腈(４􀆰２􀆰２)稀释至１００mL.４􀆰２􀆰６　０􀆰１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,加水稀释至１０００mL.４􀆰２􀆰７　５％氨水乙腈溶液:取氨水５mL,加乙腈稀释至１００mL.４􀆰２􀆰８　磷酸盐缓冲液:称取磷酸氢二钾３􀆰７２g、磷酸二氢钾６􀆰４８g,加水９３０mL溶解,混匀.４􀆰２􀆰９　流动相:磷酸盐缓冲液(４􀆰２􀆰８)＋甲醇(４􀆰２􀆰３)＋乙腈(４􀆰２􀆰２)＝９３＋５＋２.４􀆰２􀆰１０　环丙氨嗪标准储备溶液(１mg/mL):准确称取环丙氨嗪标准品(CAS号:６６２１５Ｇ２７Ｇ８,含量≥９９％)１０mg(精确至０􀆰０１mg)于１０mL容量瓶中,加甲醇(４􀆰２􀆰３)溶解并定容.－１８℃以下保存,有效期为８个月.４􀆰２􀆰１１　环丙氨嗪标准中间工作溶液(１０μg/mL):准确移取环丙氨嗪标准储备溶液(４􀆰２􀆰１０)１mL于１００mL容量瓶中,加甲醇(４􀆰２􀆰３)稀释并定容.０℃~４℃保存,有效期为３个月.４􀆰２􀆰１２　环丙氨嗪标准工作溶液:准确移取适量标准中间工作溶液(４􀆰２􀆰１１)于１０mL容量瓶中,用流动相(４􀆰２􀆰９)稀释,配制成浓度分别为０􀆰０５μg/mL、０􀆰１μg/mL、０􀆰５μg/mL、１􀆰０μg/mL、５􀆰０μg/mL、１农业农村部公告第６２７号—１—２０２２１０􀆰０μg/mL的标准系列溶液.临用现配.４􀆰２􀆰１３　混合型阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或性能相当者.４􀆰２􀆰１４　微孔滤膜:０􀆰４５μm,有机系.４􀆰３　仪器设备４􀆰３􀆰１　高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器.４􀆰３􀆰２　电子天平:感量０􀆰１mg和０􀆰０１mg.４􀆰３􀆰３　涡旋混合器.４􀆰３􀆰４　涡旋振荡器.４􀆰３􀆰５　离心机:转速不低于１００００r/min.４􀆰３􀆰６　固相萃取装置.４􀆰３􀆰７　氮吹仪.４􀆰４　样品按GB/T２０１９５的规定制备试样,至少２００g,粉碎使其全部通过０􀆰４２５mm孔径的分析筛,充分混匀,装入密闭容器中,备用.４􀆰５　试验步骤４􀆰５􀆰１　提取平行做２份试验.称取试样２g(精确至０􀆰０００１g)于５０mL离心管中,准确加入提取液(４􀆰２􀆰５)１０mL,涡旋混匀,振荡提取１０min,于１００００r/min离心１０min,移取上清液至另一５０mL离心管.残渣用提取液１０mL重复提取１次,合并２次上清液,混匀,备用.４􀆰５􀆰２　净化混合型阳离子交换固相萃取柱(４􀆰２􀆰１３)依次用甲醇(４􀆰２􀆰３)、水和提取液(４􀆰２􀆰５)各３mL活化.准确移取备用液(４􀆰５􀆰１)１mL过柱,用水、甲醇(４􀆰２􀆰３)和０􀆰１mol/L盐酸溶液(４􀆰２􀆰６)各３mL依次淋洗,抽干.用５％氨水乙腈溶液(４􀆰２􀆰７)５mL洗脱,收集洗脱液,于４０℃氮吹至干.准确移取流动相(４􀆰２􀆰９)１mL溶解残余物,混匀,过微孔滤膜(４􀆰２􀆰１４),待测.４􀆰５􀆰３　测定４􀆰５􀆰３􀆰１　液相色谱参考条件色谱柱:亚乙基桥杂化颗粒键合C１８,柱长２５０mm,内径４􀆰６mm,粒径５μm,或性能相当者.柱温:３０℃.检测波长:２１４nm.流速:１􀆰０mL/min.进样量:２０μL.流动相:４􀆰２􀆰９.４􀆰５􀆰３􀆰２　标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下,分别取标准工作溶液(４􀆰２􀆰１２)和试样溶液(４􀆰５􀆰２)上机测定.在上述色谱条件下,环丙氨嗪标准溶液色谱图见附录A.４􀆰５􀆰３􀆰３　定性以保留时间定性,试样溶液中环丙氨嗪保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中环丙氨嗪的保留时间一致,其相对偏差在±２􀆰５％之内.４􀆰５􀆰３􀆰４　定量以环丙氨嗪的浓度为横坐标,以其色谱峰面积(响应值)为纵坐标,绘制标准曲线,标准曲线的相关系数应不低于０􀆰９９９.试样溶液中环丙氨嗪的响应值应在标准曲线测定的线性范围内.如超出线性范围,应将试样用流动相稀释(n倍)后,重新进样分析.单点校准时,试样溶液与标准溶液中待测物的响应值均应在仪器检测的线性范围内(相差不超过３０％).２农业农村部公告第６２７号—１—２０２２４􀆰６　试验数据处理试样中环丙氨嗪的含量以质量分数计.多点校准按公式(１)计算,单点校准按公式(２)计算.w１＝ρ×V×V２×１０００V１×m×１０００×n(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:w１———试样中环丙氨嗪含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg);ρ———从标准曲线查得的试样溶液中环丙氨嗪浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL);V———提取液总体积的数值,单位为毫升(mL);V１———净化时所用提取液体积的数值,单位为毫升(mL);V２———氮气吹干后所用复溶液体积的数值,单位为毫升(mL);m———试样质量的数值,单位为克(g);n———上机测定的试样溶液超出线性范围后,进一步稀释的倍数.w１＝A×ρs×V×V２×１０００As×V１×m×１０００×n(２)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:A———试样溶液中环丙氨嗪的色谱峰面积;As———标准溶液中环丙氨嗪的峰面积;ρs———环丙氨嗪标准溶液浓度,单位为微克每毫升(μg/mL).测定结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留３位有效数字.４􀆰７　精密度在重复性条件下,２次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的１５％.５　液相色谱Ｇ串联质谱法５􀆰１　原理试样中的环丙氨嗪用乙腈Ｇ三氯乙酸溶液提取,经混合型阳离子交换柱净化,液相色谱Ｇ串联质谱仪测定,基质匹配标准曲线校正,外标法定量.５􀆰２　试剂或材料除另有规定外,仅使用分析纯试剂.５􀆰２􀆰１　水:GB/T６６８２,一级.５􀆰２􀆰２　乙腈:色谱纯.５􀆰２􀆰３　甲醇:色谱纯.５􀆰２􀆰４　１％三氯乙酸溶液:称取三氯乙酸１􀆰０g,加水溶解并稀释至１００mL.５􀆰２􀆰５　提取液:取１％三氯乙酸溶液(５􀆰２􀆰４)１５mL,加乙腈(５􀆰２􀆰２)稀释至１００mL.５􀆰２􀆰６　０􀆰１mol/L盐酸溶液:取盐酸９mL,加水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰７　５％氨水乙腈溶液:取氨水５mL,加乙腈(５􀆰２􀆰２)稀释至１００mL.５􀆰２􀆰８　０􀆰１％甲酸溶液:取甲酸１mL,加水稀释至１０００mL.５􀆰２􀆰９　０􀆰１％甲酸乙腈溶液:取乙腈(５􀆰２􀆰２)５mL,加０􀆰１％甲酸溶液(５􀆰２􀆰８)稀释至１００mL.５􀆰２􀆰１０　环丙氨嗪标准储备溶液(１mg/mL):准确称取环丙氨嗪对照品(CAS号:６６２１５Ｇ２７Ｇ８,含量≥９９％)１０mg(精确至０􀆰０１mg)于１０mL容量瓶中,用甲醇(５􀆰２􀆰３)溶解并定容.－１８℃以下保存,有效期为８个月.５􀆰２􀆰１１　环丙氨嗪标准中间工作溶液(１０μg/mL):准确移取环丙氨嗪标准储备溶液(５􀆰２􀆰１０)１mL于１００mL容量瓶中,用甲醇(５􀆰２􀆰３)稀释并定容.０℃~４℃保存,有效期为３个月.５􀆰２􀆰１２　环丙氨嗪标准工作溶液:准确移取适量标准中间工作溶液(５􀆰２􀆰１１)于１０mL容量瓶中,用０􀆰１％甲酸乙腈溶液(５􀆰２􀆰９)稀释,配制成浓度分别为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、２００ng/mL３农业农村部公告第６２７号—１—２０２２和５００ng/mL的标准系列溶液.临用现配.５􀆰２􀆰１３　混合型阳离子交换固相萃取柱:６０mg/３mL,或性能相当者.５􀆰２􀆰１４　微孔滤膜:０􀆰２２μm,有机系.５􀆰３　仪器设备５􀆰３􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配电喷雾离子源.５􀆰３􀆰２　电子天平:感量０􀆰１mg和０􀆰０１mg.５􀆰３􀆰３　涡旋混合器.５􀆰３􀆰４　涡旋振荡器.５􀆰３􀆰５　离心机:转速不低于１００００r/min.５􀆰３􀆰６　固相萃取装置.５􀆰３􀆰７　氮吹仪.５􀆰４　样品按GB/T２０１９５的规定制备试样,至少２００g,粉碎使其全部通过０􀆰４２５mm孔径的分析筛,充分混匀,装入密闭容器中,备用.选取类型相同,均匀一致、且在待测物保留时间处,仪器响应值小于方法定量限３０％的饲料样品,作为空白样品.５􀆰５　试验步骤５􀆰５􀆰１　提取平行做２份试验.称取试样２g(精确至０􀆰０００１g)于５０mL离心管中,准确加入提取液(５􀆰２􀆰５)１０mL,涡旋混匀,振荡提取１０min,于１００００r/min离心１０min,移取上清液至另一５０mL离心管.残渣用提取液１０mL重复提取１次,合并２次上清液,混匀,备用.５􀆰５􀆰２　净化混合型阳离子交换固相萃取柱(５􀆰２􀆰１３)依次用甲醇(５􀆰２􀆰３)、水和提取液(５􀆰２􀆰５)各３mL活化.准确移取备用液(５􀆰５􀆰１)２mL过柱,用水、甲醇(５􀆰２􀆰３)和０􀆰１mol/L盐酸溶液(５􀆰２􀆰６)各３mL依次淋洗,抽干.用５％氨水乙腈溶液(５􀆰２􀆰７)５mL洗脱,收集洗脱液,于４０℃氮吹至干.准确移取０􀆰１％甲酸乙腈溶液(５􀆰２􀆰９)１mL溶解残余物,混匀,过微孔滤膜(５􀆰２􀆰１４),待测.５􀆰５􀆰３　基质匹配标准溶液的制备取５􀆰４空白试样,按５􀆰５􀆰１和５􀆰５􀆰２处理得到氮气吹干的空白基质,分别准确移取环丙氨嗪工作溶液(５􀆰２􀆰１２)各１􀆰０mL溶解残余物,配制成浓度分别为１０ng/mL、２０ng/mL、５０ng/mL、１００ng/mL、２００ng/mL