农业农村部公告第628号-12-2022 转基因生物及其产品食用安全检测 大豆中寡糖含量的测定 液相

20221219发布－－20230301－－实施转基因生物及其产品食用安全检测大豆中寡糖含量的测定液相色谱法04中华人民共和国国家标准备案号：XXXX-XXXXＩＣＳ65.020.01BFoodsafetydetectionofgeneticallymodifiedorganismsandderivedproducts—Determinationofoligosaccharideinsoybeanbyliquidchromatography中华人民共和国农业农村部发布农业农村部公告第628号—12—2022CCS农业农村部公告第６２８号—１２—２０２２前　　言本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由中华人民共和国农业农村部提出.本文件由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口.本文件起草单位:农业农村部科技发展中心、中国疾病预防控制中心营养与健康所、安阳工学院.本文件主要起草人:卓勤、张旭冬、刘婷婷、张元臣、梁晋刚、陈曦、沈葹、张雪松、王竹、杨晓光、霍军生.Ⅰ农业农村部公告第６２８号—１２—２０２２转基因生物及其产品食用安全检测大豆中寡糖含量的测定　液相色谱法１　范围本文件规定了大豆中蔗糖、棉子糖和水苏糖３种寡糖的液相色谱检测方法.本文件适用于大豆中蔗糖、棉子糖和水苏糖３种寡糖含量的测定.２　规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法３　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.４　原理大豆中寡糖用乙腈水溶液超声提取,经离心过滤后,氨基色谱柱分离,液相色谱仪测定,以保留时间定性,外标法定量.５　试剂和材料除另有规定外,仅使用色谱纯试剂,水为符合GB/T６６８２规定的一级水.５􀆰１　乙腈(CH３CN,CAS号７５Ｇ０５Ｇ８)５􀆰２　标准品蔗糖(C１２H２２O１１,CAS号５７Ｇ５０Ｇ１);棉子糖(C１８H３２O１６,CAS号５１２Ｇ６９Ｇ６);水苏糖(C２４H４２O２１,CAS号４７０Ｇ５５Ｇ３).标准品纯度≥９８％,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.５􀆰３　乙腈水溶液(６０％,体积分数):量取乙腈６００mL,加入水４００mL,混匀.５􀆰４　标准储备溶液:准确称取蔗糖、棉子糖、水苏糖标准品各１００mg(精确到０􀆰１mg),分别用乙腈水溶液溶解,并定容至１０mL容量瓶中,得到１０􀆰０mg/mL标准储备液,置于４℃冰箱中密封储存,有效期为１个月.５􀆰５　混合标准中间液:准确吸取蔗糖标准储备液５mL、棉子糖储备液１mL和水苏糖储备液４mL于同一容器中混匀,得到浓度分别为蔗糖５􀆰０mg/mL、棉子糖１􀆰０mg/mL和水苏糖４􀆰０mg/mL的混合标准液,现用现配.５􀆰６　混合标准工作液:分别准确吸取混合标准中间液１mL、２mL、４mL、６mL、８mL、１０mL于１０mL容量瓶中,用乙腈水溶液定容至刻度,得到混合标准工作液,蔗糖浓度分别为０􀆰５mg/mL、１􀆰０mg/mL、２􀆰０mg/mL、３􀆰０mg/mL、４􀆰０mg/mL、５􀆰０mg/mL;棉子糖浓度分别为０􀆰１mg/mL、０􀆰２mg/mL、０􀆰４mg/mL、０􀆰６mg/mL、０􀆰８mg/mL、１􀆰０mg/mL;水苏糖浓度分别为０􀆰４mg/mL、０􀆰８mg/mL、１􀆰６mg/mL、２􀆰４mg/mL、３􀆰２mg/mL、４􀆰０mg/mL.现用现配.６　主要仪器和设备６􀆰１　高效液相色谱仪:配有示差折光检测器.１农业农村部公告第６２８号—１２—２０２２６􀆰２　电子天平:感量为０􀆰００１g和０􀆰０００１g.６􀆰３　涡旋振荡器.６􀆰４　离心机:转速不小于５０００r/min.６􀆰５　超声波清洗器:可加热至７５℃.６􀆰６　食物粉碎机.７　分析步骤７􀆰１　试样的制备及提取７􀆰１􀆰１　取有代表性大豆样品至少１００g,用粉碎机粉碎,通过５０目筛,充分混匀,装入洁净容器,密封,放阴凉干燥处备用.７􀆰１􀆰２　准确称取粉碎并混合均匀的试样１g(精确到０􀆰００１g)于离心管中,加入２０mL乙腈水溶液,振荡２min,放入７５℃水浴的超声波清洗器中超声提取３０min,５０００r/min室温离心１０min,上清液用０􀆰２２μm有机相滤膜过滤,待测定.７􀆰２　仪器参考条件７􀆰２􀆰１　色谱柱:氨基色谱柱,柱长１００mm,内径２􀆰１mm,粒径１􀆰７μm,或等效色谱柱.７􀆰２􀆰２　柱温:４０℃.７􀆰２􀆰３　流通池温度:３５℃.７􀆰２􀆰４　流速:０􀆰２mL/min.７􀆰２􀆰５　进样量:２μL.７􀆰２􀆰６　流动相:乙腈＋水＝６０＋４０(体积比).７􀆰３　测定７􀆰３􀆰１　标准工作曲线的制作将系列标准工作液分别注入高效液相色谱中,测定相应的峰面积.以标准工作液的浓度为横坐标,以色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线.蔗糖、棉子糖、水苏糖标准溶液色谱图见附录A中的图A􀆰１.７􀆰３􀆰２　测定将试样溶液注入高效液相色谱仪中,以保留时间定性,测得目标化合物相应的色谱峰面积,根据标准曲线得到待测样液中目标组分的浓度.待测样液中目标组分的响应值应在仪器检测的线性范围之内,超过线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行测试.试样溶液中蔗糖、棉子糖、水苏糖色谱图见图A􀆰２.８　结果计算８􀆰１　试样中蔗糖(X１)、棉子糖(X２)、水苏糖(X３)的含量分别按公式(１)计算.Xi＝Ci×V×f×１０００m×１０００(１)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:Xi———试样中大豆寡糖单一组分含量的数值,单位为克每千克(g/kg);Ci———试样中大豆寡糖单一组分浓度的数值,单位为毫克每毫升(mg/mL);V———试样提取液体积的数值,单位为毫升(mL);f———试样的稀释倍数;m———试样的质量的数值,单位为克(g).８􀆰２　试样中寡糖总含量,按公式(２)计算.X＝X１＋X２＋X３(２)􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺式中:２农业农村部公告第６２８号—１２—２０２２X———试样中大豆寡糖总含量的数值,单位为克每千克(g/kg);X１———试样中蔗糖含量的数值,单位为克每千克(g/kg);X２———试样中棉子糖含量的数值,单位为克每千克(g/kg);X３———试样中水苏糖含量的数值,单位为克每千克(g/kg).计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留３位有效数字.９　精密度在重复性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％.１０　其他蔗糖、棉子糖和水苏糖的检出限为０􀆰１g/kg,定量限为０􀆰３g/kg.３农业农村部公告第６２８号—１２—２０２２附　录　A(资料性)标准溶液与试样溶液色谱图　A􀆰１　蔗糖、棉子糖、水苏糖标准溶液色谱图见图A􀆰１.图A􀆰１　蔗糖、棉子糖、水苏糖标准溶液色谱图A􀆰２　蔗糖、棉子糖、水苏糖试样溶液色谱图见图A􀆰２.图A􀆰２　蔗糖、棉子糖、水苏糖试样溶液色谱图４