BJS 201712 食用油脂中脂肪酸的综合检测法

1带格式的:边框:底端:(无框线)附件3食用油脂中脂肪酸的综合检测法BJS2017121范围本方法适用于食用植物油（花生油、大豆油、玉米油、植物调和油、橄榄油、葵花籽油、芥花油、菜籽油、香油、棕榈油等）是否存在异常的检测及识别。2方法原理将样品甲酯化，采用气相色谱-串联质谱内标法定量测定13种脂肪酸甲酯含量，再根据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，对异常样品进一步排查确认。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。3.1试剂3.1.1正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.3无水硫酸钠（Na2SO4）：分析纯。3.1.4氢氧化钠（NaOH）：分析纯。3.1.5三氟化硼甲醇溶液：50%。3.2溶液配制3.2.1含2%氢氧化钠的甲醇溶液：准确称取2g氢氧化钠（3.1.4）于烧杯中，加入甲醇（3.1.2），超声至氢氧化钠完全溶解，移入100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。3.2.215%的三氟化硼甲醇溶液：取50%三氟化硼甲醇溶液（3.1.5）30mL，缓慢加入到装有70mL甲醇（3.1.2）的烧杯中，用玻璃棒搅拌均匀。3.3标准物质3.3.1十一碳酸甘油三酯（C36H68O6，CAS：13552-80-2）标准品，纯度98%。3.3.2十一碳酸甲酯（C12H24O2，CAS：1731-86-8）标准品，纯度99%。3.3.337种脂肪酸甲酯混合标准溶液标准品，各组分浓度参考附录A。3.4标准溶液配制3.4.1十一碳酸甘油三酯内标溶液（1000mg/L）称取0.10g（精确至0.0001g）十一碳酸甘油三酯，加入50mL甲醇溶解，移入100mL容量瓶中，以甲醇定容，制成储备液。储备液于-20℃可冷藏保存三个月。使用时以甲醇稀释成50mg/L的中间液，现用现配。3.4.2十一碳酸甲酯内标溶液（1000mg/L）2带格式的:边框:底端:(无框线)称取0.10g（精确至0.0001g）十一碳酸甲酯，加入50mL正己烷溶解，移入100mL容量瓶中，以正己烷定容，制成储备液。储备液于-20℃可冷藏保存三个月。使用时以正己烷稀释成50mg/L的中间液，现用现配。3.4.337种脂肪酸甲酯标准溶液将脂肪酸甲酯混合标准溶液从安瓿瓶中完全转移至10mL容量瓶中，用正己烷定容，于-20℃冷藏可保存一周。根据需要稀释成适当浓度的含5.00mg/L十一碳酸甲酯内标的标准工作溶液，现用现配。4仪器与设备4.1气相色谱-质谱联用仪（GC/MS）。4.2恒温水浴：（40℃～100℃）±1℃。4.3分析天平：感量0.1mg。4.4涡旋振荡器。4.5烘箱。5分析步骤5.1样品前处理称取样品0.1g（精确至0.1mg）于250mL烧瓶中，加入50mg/L十一碳酸甘油三酯内标1mL（相当于50μg），加入含2%氢氧化钠的甲醇溶液（3.2.1）8mL，混合摇匀，连接回流冷凝器并在80℃水浴上回流，直至油滴消失；从回流冷凝器上端加入15%三氟化硼甲醇溶液（3.2.2）7mL，继续回流2min；用去离子水冲洗回流冷凝器，继续加热1min；从水浴上取下烧瓶，迅速冷却至室温，准确加入10mL正己烷，振摇2min，吸取上层正己烷相，使其通过无水硫酸钠吸水后，过0.22μm的有机相滤膜，待GC/MS检测。5.2仪器条件a.色谱柱：毛细管色谱柱（DB-23，60m×0.25mm×0.25μm），或性能相当者。b.载气：高纯氦气。c.载气流量：1.0mL/min。d.进样口温度：270℃。e.程序升温：初始温度60℃持续3.0min；60℃～160℃，升温速率15℃/min；保持0min；160℃～210℃，升温速率8℃/min；保持0min；210℃～230℃，升温速率3.15℃/min；保持10min。f.进样方式：分流进样，分流比5∶1。g.进样体积：1.0μL。h.离子源：EI，70eV。i.离子源温度：230℃。j.四极杆温度：150℃。k.接口温度：270℃。3带格式的:边框:底端:(无框线)l.定量分析为选择离子扫描（SIM），14种脂肪酸甲酯的保留时间、定性及定量离子见表1。表114种脂肪酸甲酯的保留时间、定性离子和定量离子序号脂肪酸甲酯定量离子(m/z)定性离子(m/z)保留时间(min)1C6:07487、99、598.342C8:07487、127、5910.443C10:07487、14312.234C11:0（内标）7487、200、14313.085C12:07487、143、18313.946C13:07487、143、18514.797C14:07487、143、19915.668C14:1n57487、166、20816.069C15:07487、143、21316.5310C16:1n77487、194、23617.8111C17:07487、143、28418.4212C18:2n6t6781、95、29420.0313C20:3n67967、9520.7914C20:4n67991、67、10523.625.3结果计算按下式（1）计算样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计）：mVcX……………………………………(1)式中：X—样品中脂肪酸的含量（以脂肪酸甲酯计），单位为毫克每千克（mg/kg）c—样品溶液中脂肪酸甲酯的浓度，单位为微克每毫升（µg/mL）V—样品溶液定容体积，单位为毫升（mL）m—样品称取的质量，单位为克（g）计算结果保留三位有效数字。6结果判定依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否存在异常，判定异常时提示油脂中可能存在反复高温处理并经高度精炼获得的异常油脂。判定依据见表2。4带格式的:边框:底端:(无框线)表2依据脂肪酸甲酯含量判定油脂是否异常化合物判定依据（mg/kg）C6:0x30，油脂可能存在异常，若确认不是棕榈油(1)，可判定为异常油脂样品C8:0x120，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(4)，且确认不是葵花籽油(1)，可判定为异常油脂样品C10:0x100，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，且确认不是芥花油和菜籽油(1)，可判定为异常油脂样品C12:0400x130，油脂可能存在异常，若排除棕榈油和菜籽油干扰(2)，且确认不是芥花油和香油(1)，可判定为异常油脂样品x400，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品C13:0x10，可判定为异常油脂样品C14:0x1200，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品C14:1n5x10，可判定为异常油脂样品C15:0600x240，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，且确认不是芥花油和菜籽油(1)，可判定为异常油脂样品x600，油脂可能存在异常，若排除棕榈油干扰(2)，可判定为异常油脂样品C16:1n7x2000，油脂可能存在异常，若排除芥花油、菜籽油、橄榄油和棕榈油干扰(1～2)，可判定为异常油脂样品C17:0x1800，油脂可能存在异常，若排除橄榄油干扰(1)，可判定为异常油脂样品C18:2n6tx800，可判定为异常油脂样品C20:3n6450x220，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰(2)，可判定为异常油脂样品x450，可判定为异常油脂样品C20:4n6120x36，油脂可能存在异常，若排除菜籽油干扰(2)，可判定为异常油脂样品x120，可判定为异常油脂样品注：(1)确认不是干扰油的方法：采用气相色谱法测定样品中37种脂肪酸含量，根据37种脂肪酸含量分布结合附录C进行确认，检测方法参考GB5009.168-2016。(2)排除棕榈油、菜籽油干扰的方法：参考表3。表3排除干扰油的方法化合物方法说明（mg/kg）C8:0x(样品中肉豆蔻酸C14:0的含量×0.04)，可排除棕榈油干扰C10:0x(样品中肉豆蔻酸C14:0的含量×0.072)，可排除棕榈油干扰5带格式的:边框:底端:(无框线)C12:0x(样品中肉豆蔻酸C14:0的含量×1.00)，可排除棕榈油干扰x(样品中芥酸C22:1n9的含量×0.08)，可排除菜籽油干扰C15:0x(样品中肉豆蔻酸C14:0的含量×0.12)，可排除棕榈油干扰C20:3n6x(样品中芥酸C22:1n9的含量×0.15)，可排除菜籽油干扰C20:4n6x(样品中芥酸C22:1n9的含量×0.04)，可排除菜籽油干扰C14:0/C12:0比值x20，可排除棕榈油干扰7质量控制7.1方法空白以十一碳酸甘油三酯为空白，进行脂肪酸过程空白对照。7.2质控样品7.2.1以正常食用植物油（纯大豆油、菜籽油、花生油）做对照，每批样品处理过程均以这三种作为阴性对照。7.2.2以已确定为“异常油脂”的样品作阳性对照，同时以不同稀释度进行对照。7.3质谱仪的质量数校正采用仪器自动调谐PFTBA进行质量数校正。6带格式的:边框:底端:(无框线)附录A脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度表A脂肪酸甲酯混合标准溶液各组分浓度序号组分中文名称组分英文名称CASNo.简称纯度浓度/(mg/mL)1丁酸甲酯Methylbutyrate623-42-7C4:099.90.4022己酸甲酯Methylhexanoate106-70-7C6:099.70.3993辛酸甲酯Methyloctanoate111-11-5C8:099.90.3994癸酸甲酯Methyldecanoate(caprate)110-42-9C10:099.90.3995十一碳酸甲酯Methylundecanoate1731-86-8C11:099.50.1996十二碳酸甲酯Methyllaurate111-82-0C12:099.80.3987十三碳酸甲酯Methyltridecanoate1731-88-0C13:099.40.1998十四碳酸甲酯Methylmyristate124-10-7C14:099.70.4009顺-9-十四碳一烯酸甲酯Myristoleicacidmethylester56219-06-8C14:1n599.90.20210十五酸甲酯Methylpentadecanoate7132-64-1C15:099.60.2007带格式的:边框:底端:(无框线)11顺-10-十五烯酸甲酯Cis-10-pentadecenoicacidmethylester90176-52-6C15:1n599.00.19712十六碳酸甲酯Methylpalmitate112-39-0C16:099.90.59813顺-9-十六碳一烯酸甲酯Methylpalmitoleate1120-25-8C16:1n799.70.19914十七碳酸甲酯Methylheptadecanoate1731-92-6C17:099.90.20115顺-10-十一烯酸甲酯Cis-10-heptadecenoicacidmethylester75190-82-8C17:1n799.90.20016十八碳酸甲酯Methylstearate112-61-8C18:099.90.39917反-9-十八碳一烯酸甲酯Trans-9-elaidicmethylester1937-62-8C18:1n9t96.90.19418顺-9-十八碳一烯酸甲酯Cis-9-oleicmethylester112-62-9C18:1n9c99.90.39919反，反-9,12-十八碳二烯酸甲酯Linolelaidicacidmethylester2566-97-4C18:2n6t99.90.20020顺，顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯Methyllinoleate112-63-0C18:2n6c99.90.20021二十碳酸甲酯Methylarachidate1120-28-1C20:099.90.40122顺，顺，顺-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯GAMMA-linolenicacidmethylester16326-32-2C18