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3附件2恩诺沙星注射液中非法添加呋塞米检查方法1适用范围1.1本方法适用于恩诺沙星注射液中非法添加呋塞米的检查。1.2用于其他兽药制剂中非法添加呋塞米检查时，需进行空白试验和检测限测定。2检查方法照高效液相色谱法（《中国兽药典》一部附录0512）测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-四氢呋喃-冰醋酸（70:30:1）为流动相；二极管阵列检测器，采集波长范围为200∼400nm，分辨率为1.2nm，记录272nm波长处的色谱图。供试品溶液中呋塞米色谱峰与相邻色谱峰的分离度应符合要求。测定法取本品1.0ml，置200ml量瓶中，用混合溶液（取冰醋酸22ml，加50%乙腈溶液至1L，摇匀）稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取呋塞米对照品适量，加混合溶液溶解并稀释制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液。取供试品溶液和对照品溶液各20µl，注入液相色谱仪，同时记录色谱图和光谱图。必要时，可调整供试品溶液或对照品溶液的浓度，使两者峰面积近似。通过与对照品溶液色谱图保留时间、光谱图的比对，确定供试品中是否含有4呋塞米。3结果判定3.1供试品溶液色谱图中如出现与呋塞米对照品峰保留时间一致的色谱峰（差异小于等于±5%），且为单一物质峰；在规定的采集波长范围内，两者紫外光谱图匹配，且最大吸收波长一致（差异小于等于±2nm），判定为检出呋塞米。3.2供试品溶液色谱图中如出现与呋塞米对照品保留时间一致的色谱峰，但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出呋塞米。4检测限本方法检测限为1.0µg/ml。