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1酚：氯仿法基因组的提取1.取小块肌肉组织于600μlTNES中剪碎，加蛋白酶K（20mg/ml）3μl(至终浓度为100μg/ml)，于56℃3h，使组织块完全消化。2.加600μl酚：氯仿：异戊醇=25：24：1，缓慢的来回颠倒离心管10min，充分混合两相至乳浊状。3.室温12000rpm10min，取上清至新EP管。4.向上清中加等体积的氯仿：异戊醇=24：1，颠倒摇动10min。5.室温12000rpm10min，取上清至另一新EP管。6.向上清中加0.1V的NaAC（3mol/L）pH5.2，1V的异丙醇，混匀后室温静置4-5min。7.12000rpm10min，去上清（用枪吸）。8.70%乙醇洗沉淀，12000rpm5min，用枪吸出上清，轻旋后用小枪彻底吸出乙醇；凉干。9.水溶后加1μlRNase，37℃孵育30min。1mol/LTris:20mlDDW16mlTris碱2.422g浓HCl(约0.84ml)调节pH至8.0，加DDW至20ml，高压灭菌。5mol/LNaCl:20mlDDW16mlNaCl5.844g加DDW定容至20ml，分装后高压灭菌。0.5mol/LEDTA：20mlDDW16ml乙二胺四乙酸二钠3.722g用固体NaOH调节pH至8.0（约0.4g），定容至20ml，高压灭菌。10%SDS：20mlDDW16mlSDS2g(加热至68℃助溶)加入几滴浓盐酸调节pH至7.2，加DDW定容至20ml.10MUrea:1mlUrea12.012gDDW14ml定容至20ml。TE缓冲液pH8.0：20ml10mMTris-ClpH8.01mMEDTApH8.01mol/LTris-Cl200ul0.5mol/LEDTA40ul加DDW29.76ml定容至20ml。210mg/mlRNA酶：1mlRnaseA10mg(10mmol/LTris-Cl(pH7.5)、15mmol/LNaCl)1ml于100℃加热15min，缓慢冷却至室温，分装成小份保存于-20℃。1mol/LTris-Cl0.5mlDDW9.5ml定容至10ml。取1ml加5mol/LNaCl3ul。TNES：10mMTris-ClpH8.0，125mMNaCl，10mMEDTApH8.0，0.5%SDS，4MUrea。配制TNES30ml1mol/LTris-Cl300ul5mol/LNaCl750ul0.5mol/LEDTA600ul10%SDS1.5ml20MUrea12ml加DDW14.85ml定容至30ml。20mg/ml蛋白酶K：1ml蛋白酶K20mgDDW1ml称量配制均在EP管中操作。平衡的酚：经0.5mol/LTris·ClpH8.0平衡，多次抽提，使其pH在7.8以上。（购买）NaAC（3mol/L）：20mlDDW10ml无水乙酸钠4.922g用冰乙酸调pH值至5.2，补DDW至20ml，高压灭菌。3M的醋酸钠有H2O分子的作用，促进DNA沉淀，PH4.8的醋酸钠溶液降低了反应混合物中的pH值，起到中和作用，从而染色体DNA或质粒复性，并聚集成不可溶的网络状聚合物。同时高浓度的醋酸钠亦会引起蛋白质-SDS复合物和高分子量的RNA分子发生沉淀。通过离心处理，便可把网络状的DNA聚合物同变性的蛋白质-DNA及RNA等以复合物形式沉淀出来，从而使.DNA得到纯化。酚：氯仿：异戊醇：20ml平衡酚10ml氯仿9.6ml异戊醇0.4ml氯仿：异戊醇：20ml氯仿19.2ml异戊醇0.8ml3基因组DNAPCR扩增反应条件：冷启动1）94℃4min2）94℃1min3）58℃/65℃30s4）72℃2min30s5）72℃7min6）4℃5min7）16℃59min反应体系：模板：10×稀释后取1ul总体积/管50ulDDW37.75.ul10×buffer5uldNTP(2.5uM)4ul模板1ulTaq酶（5U）0.25ul引物1（50uM）1ul引物2（50uM）1ul36循环