常见限制性内切酶识别序列(酶切位点)

TheTypeIIrestrictionsystemstypicallycontainindividualrestrictionenzymesandmodificationenzymesencodedbyseparategenes.TheTypeIIrestrictionenzymestypicallyrecognizespecificDNAsequencesandcleaveatconstantpositionsatorclosetothatsequencetoproduce5-phosphatesand3-hydroxyls.UsuallytheyrequireMg2+ionsasacofactor,althoughsomehavemoreexoticrequirements.Themethyltransferasesusuallyrecognizethesamesequencealthoughsomearemorepromiscuous.ThreetypesofDNAmethyltransferaseshavebeenfoundaspartofTypeIIR-MsystemsformingeitherC5-methylcytosine,N4-methylcytosineorN6-methyladenine.ApaI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GGGCC^C3'BamHI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^GATCC3'BglII（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'A^GATCT3'EcoRI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^AATTC3'HindIII（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'A^AGCTT3'KpnI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GGTAC^C3'NcoI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'C^CATGG3'NdeI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'CA^TATG3'NheI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^CTAGC3'NotI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GC^GGCCGC3'SacI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GAGCT^C3'SalI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'G^TCGAC3'SphI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'GCATG^C3'XbaI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'T^CTAGA3'XhoI（类型：TypeIIrestrictionenzyme）识别序列：5'C^TCGAG3'当然，上面总结的这些肯定不全，要查找更多内切酶的识别序列，你还可以选择下面几种方法：1.查你所使用的内切酶的公司的目录或者网站；NEB网站上提供的识别序列图表下载2.用软件如：PrimerPremier5.0或Bioedit等，这些软件均提供了内切酶识别序列的信息；3.推荐到NEB的REBASE数据库去查（网址：）当你设计好引物，添加上了内切酶识别序列，下一步或许是添加保护碱基了，可以参考：NEB公司网站提供的保护碱基参考表下载NEB公司网站上关于设计PCR引物保护碱基的参考双酶切buffer的选择（MBI、罗氏、NEB、Promega、Takara）这里再给大家推荐一种新的不需要连接反应的分子克隆方法，优点包括：①设计引物不必考虑选择什么酶切位点；②不必考虑保护碱基的问题；③不必每次都选择合适的酶来酶切质粒制备载体；④而且不需要DNA连接酶；⑤假阳性几率低（因为没有连接反应这一步，载体自连的问题没有了）。另外，还有一个经济问题：如果一次性制备一批载体（小提一次质粒约80μL），并将之线性化（可双酶切亦可单酶切），然后每次做分子克隆实验时用一点，大约可以做约40次转化，管上一年没问题，呵呵。