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王红宁四川大学生命科学学院动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室动物疫病防控与食品安全主要内容一、动物疫病防控与食品安全研究背景二、我们的重要研究进展为食品安全提供技术支持一、动物疫病防控与食品安全研究背景2010年我国肉类、蛋类和奶类产量将分别达到8,600万吨、3,000万吨和4,200万吨,饲料产量13,100万吨,产值3000亿元人民币，猪约900亿元(出栏6亿头),家禽约500亿元（100亿只）。四川猪总产量占全国10%,居全国第一位,家禽居全国第六位，我国畜牧业总产值占农业总产值的40%,四川已超过50%。动物疫病引起的经济损失约占总产值的20%，300亿元以上。重大食品安全事件•1988年上海，贝类，甲肝。短短一个月里，有30多万人感染，其中11人死亡。•1996年欧洲，牛肉，疯牛病。90人死于该病，欧盟在1996年财政年度向各成员国总共提供高达17.796亿美元的巨额补贴。宰杀了63.2万头牛。•1999年中国香港，禽流感，杀鸡11万只，共发现23例人类禽流感患者,其中20例为H5N1型高致病禽流感，3例为H9N2型。有7例死亡,均为H5N1型。•1999年，比利时、荷兰、法国、德国，二恶英污染导致畜禽类产品及乳制品含高浓度恶英的事件，事件造成的直接损失达3.55亿欧元，如果加上与此关联的食品工业，损失超过10亿欧元。•2000年英国、法国，口蹄疫，造成630万头动物被杀。造成直接经济损失4亿美元，间接损失超过36.5亿美元。•2004年中国，SARS暴发流行，严重威胁人民的生命，北京市消耗费用达20多亿元人民币，据估计全世界损失达300多亿美元。•2005年四川猪链球菌病，累计报告人感染猪链球菌病例204例，其中死亡38人2005年上海肯德鸡苏丹红2006年大闸蟹呋喃药物残留2006年北京鸭蛋检出苏丹红2006年多宝鱼呋喃药物残留、孔雀石绿2007年思念汤圆金黄色葡萄球菌超标2008年中国，三鹿奶粉“三聚氰胺”事件，导致数以万计的“肾结石宝宝”，引起整个乳制品行业的混乱，严重影响了国家的声誉。2008年中国香港，禽流感再袭，扑杀疫区内两个鸡场及长沙湾家禽批发市场共约九万只活鸡。2009年1月5日北京确诊一例人感染高致病性禽流感，这是2009年中国首例病例。2010美国沙门氏菌鸡蛋，2000人感染发病2011年5月份德国爆发了大规模的大肠杆菌疫情，并蔓延至欧洲以及北美地区。葫芦巴种子、销毁。2012“毒胶囊”地沟油................................................食品安全？？？？动物疫病60%微生物、寄生虫、生物毒素等生物污染违禁药物5%药物残留20%农药与兽药残留15%环境污染：无机污染物如汞、镉、铅等，有机污染物中的二恶英、多环芳烃、多氯联苯等人畜共患病禽流感，猪链球菌病、口蹄疫、乙型脑炎、包虫病对畜牧业生产和人类生活影响巨大。受到了国家的极大关注，H1NIA型流感病毒，包含有禽流感、猪流感和人流感三种流感病毒的基因片断，同时拥有亚洲猪流感和非洲猪流感病毒特征。H1N1流感病毒是禽流感和人类流感经过“洗牌效应”产生的新病毒。禽流感全世界各种家禽和野生禽类中，已分离出上千株禽流感病毒。97年出现在香港的致人感染发病甚至死亡的H5N1毒株,——1992年，新疆托里县某连官兵，食用了一头自养的病仔猪肉及内脏后，导致了以胃肠道症状为主的集体食物中毒，经证实为链球菌所致。——1995年，首例鉴定证实Ⅱ型猪链球菌在我国存在。——1998年7-8月，江苏省海安、泰兴、通州等地25人感染人猪链球菌病，14人死亡。8万多生猪发病死亡。——2000年4月，岐山县种猪繁育场仔猪流行关节炎及败血症，经实验室分离鉴定证实为Ⅱ型猪链球菌。——后来，上海、浙江、湖南、湖北、北京、广东及东北均有报道。——2005年四川资阳发生猪链球菌疫情，死亡生猪近千头，205人感染、37人死亡。猪链球菌病防治措施1、不屠宰、不加工、不经营、不售购、不食用，病死猪肉。2、根据当地猪病流行的主要菌株，选择针对性的菌苗，猪链球菌Ⅱ型灭活苗。半月内注两次，保护期4个月。3、抗生素青霉素、金霉素、红霉素、先锋霉素等有效,可以根据药敏实验选择敏感药物。4、用5～10％石灰乳，1～2％烧碱，1%有效氯，0.5%过氧乙酸等进行喷洒或擦拭消毒。口蹄疫病毒粒子空气、污染物空气污染物口蹄疫病毒传播乙型脑炎传播包虫病传播•2010年5月开始，美国2000多人感染沙门氏菌，药物治疗效果不好，FDA最终确定是因为食用了感染沙门氏菌的鸡蛋引起的，美国召回5.5亿枚问题鸡蛋，造成了严重的经济损失，和不良社会影响。•沙门氏菌的感染和耐药性问题受到关注！食品安全保障措施1、建立统一、高效的食品安全管理机构。进一步调整食品安全监管体制，理顺和明晰各部门监管职能。在目前食品安全分段监管的基础上，进一步压缩监管部门数量，合并监管职能。按照“从田野到餐桌”的食物链再造食品安全管理流程，组建相对独立的食品安全机构，实行项目制与全流程管理模式。对从原材料、生产、包装、标识到流通、销售的每一个节点进行控制，建立食品安全每个环节的记录、追踪体系，确保产品质量可控性及责任的可追溯性。2、《食品安全法》、多部法律、法规相互补充来对食品安全的不同方面进行规范管理。3、切实强化企业的主体责任，国家应尽快制定全国统一的食品卫生、产品质量和安全标准及全国统一检验方法的标准。4、加强食品生产全过程的安全控制技术研究与示范推广四川大学动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室一、病毒基因工程疫苗研究二、动物源细菌耐药性研究进展三、不同品种猪肠道微生物多样性研究进展四、动物病原流行病学调查研究五、抗病的地方特有品种资源研究六、食品生产过程安全控制技术研究•国家“863”高科技发展计划重大课题项目“家禽重要病毒病基因工程疫苗研究和创制”•国家自然科学基金：禽冠状病毒（IBV）H120，M41、SAIBK株反向遗传操作和毒力相关基因研究一、病毒基因工程疫苗研究国家科学技术进步奖申报材料主要完成人：主要完成单位：王红宁等四川大学、重庆大学、天津瑞普生物技术股份有限公司、洛阳惠中兽药有限公司、中国农业大学、四川农业大学猪鸡病原细菌耐药性研究及其在安全高效新兽药研制中的应用二、动物源细菌耐药性研究进展通过对猪鸡病原细菌耐药基因研究发现了6种新耐药基因（注册48条）创新基因芯片等5种分子检测方法研制耐药快速多重PCR检测试剂盒5个建立了14万条耐药数据库实现检测的准确、快速和传播评价创新点1揭示了我国规模化猪鸡养殖场病原菌感染及耐药性变化基本规律制定了“猪鸡安全用药规范”等地方标准3个为新兽药研制和使用提供了科学依据创新点2创新点3基于耐药性检测方法和变化规律开发了系列产品动物专用抗生素原料药3个抗生素新制剂4个非抗生素免疫增强剂4种新型消毒剂1种解决抗生素人畜共用、产品工艺落后、生物利用率低和产品药物残留等问题肠道微生物特点种类繁多，数量庞大：约有30个属500多种，近1014个活细菌功能复杂：促进新陈代谢、免疫激活、生长发育等80%以上为厌氧菌，多数不可培养三、不同品种猪肠道微生物多样性研究进展Eckburg等(2005)，Gill等(2006)，Ley等(2008)，Neish等(2009)等相继在《Science》上发表了有关于人肠道微生物多样性及功能研究的成果。•1、猪肠道微生物DNA提取方法研究•2、DGGE、16SrDNA克隆文库及DNA指纹图谱分析对相同条件下荣昌猪（纯系，B系，CB系）、长白、杜洛克猪肠道微生物多样性研究•3、DGGE、16SrDNA克隆文库及DNA指纹图谱分析对相同饲养条件下8个不同品种猪肠道微生物DNA指纹图谱及多样性分析•4、DGGE、16SrDNA克隆文库及DNA指纹图谱分析对不同海拔藏猪肠道菌多样性研究研究内容大部分荣昌猪肠道细菌为不可培养的细菌种类，且约50%的克隆序列与GenBank中已有序列的相似性小于97%，表明这些序列相对应于一个新的或未识别的菌种或属。梭菌属(Clostridia)是荣昌猪肠道的绝对优势菌，其次是Bacilli和Lactobacillales；这些细菌都为肠道益生菌，对肠道中潜在有害菌具有控制作用。在同一生存环境和相同饲料条件下，荣昌猪不同品系（纯系，B系，CB系）肠道微生物具有明显的差异，猪肠道微生物区系具有明显的品种特异性。小结1.在同一生存环境和相同饲料条件下，8个不同品种猪（成华猪、大约克、杜洛克、长白、PIC、托佩克、内江猪和藏猪）粪样菌群结构和多样性具有明显的差异，猪肠道微生物区系具有明显的品种特异性。2.部分DGGE图谱条带的序列比对和系统发育分析表明，8个不同品种和不同海拔猪的肠道菌群主要由厚壁菌门（Firmieutes)、拟杆菌门（Baeteroidetes)、变形菌门（Proteobaeteria）和螺旋体门（Spirochaetes）组成；其中，不可培养菌是猪肠道的主要微生物。小结小结•生活在理塘（4100m）、稻城（3700m）、甘孜（3400m）、炉霍（3200m）、乡城（2900m）、康定（2600m）、得荣（2400m）和成都（400m）不同海拔藏猪肠道微生物组成和丰度存在明显的差异，说明藏猪肠道微生物的结构及丰度受高原环境的影响。•饲养条件、海拔等对肠道微生物的结构组成起到次要作用，但会引起肠道优势微生物物种的变化。同一品种在不同饲养条件下条带差异较小。•猪肠道微生物组成主要由猪的遗传因素即猪的品种决定；不同品种之间组成差异明显。技术路线实验猪分组抗生素的投用样品采集细菌计数耐药性动态监测材料方法规模化猪场健康猪群药物组（头孢噻呋钠、丁胺卡那霉素，乳酸环丙沙星），对照组新鲜猪粪便样品，采样时间表平板计数琼脂（PCA），Pfrier肠球菌选择培养基，伊红美兰琼脂可培养指标菌的纯化与PCR鉴定样品预处理抗生素的MICs测定投药与停药周期抗生素使用后猪肠道菌变化研究•1.通过对可培养指标菌计数,分析了3种抗生素（头孢噻呋钠、丁胺卡那霉素和乳酸环丙沙星）使用对细菌菌数量的影响，其中头孢噻呋钠使用后猪肠球菌数量显著增高。•2.耐药性研究表明规模化猪场使用头孢噻呋钠、丁胺卡那霉素和乳酸环丙沙星进行治疗和预防时，连续用药最好应控制在3天以内，超过3天就能引起高水平耐药产生。另外，耐药性的恢复逆转很慢，猪场在投药后需经过一个月时间才能再次使用同种药物进行治疗，否则很可能继续加重该种药物耐药性，降低治疗效果。小结四、动物病原流行病学调查研究序号课题项目名称课题来源承担单位年限1口蹄疫流行病学及免疫监控技术研究国家科技攻关课题四川大学2005-20082野生动物的禽流感病毒生态学研究国家科技攻关课题四川大学2005-20083禽流感免疫效果监测及抗病毒分子免疫增强剂研究成都市科技攻关四川大学2005-2008五、抗病的地方特有品种资源研究根据四川和西南地区特点，对天然有抗病性的地方品种资源开展抗病性基础研究国家蛋鸡产业技术体系岗位科学家项目六、食品生产过程安全控制技术研究四川生猪产业链项目四川蛋鸡产业链项目结语一、动物疫病防控与食品安全研究意义重大重要研究进展为食品安全提供新的技术支持一、病毒基因工程疫苗研究二、动物源细菌耐药性研究进展三、不同品种猪肠道微生物多样性研究进展四、动物病原流行病学调查研究五、抗病的地方特有品种资源研究六、食品生产过程安全控制技术研究四川大学生命科学学院副院长中国畜牧兽医学会禽病学分会副理事长中国农业部蛋鸡产业体系岗位科学家中国农业部兽药评审委员会委员中国畜牧兽医学会动物传染病学分会常务理事动物疫病防控与食品安全四川省重点实验室主任王红宁博士教授博士生导师地址：成都市望江路29号,四川大学生命科学学院610064电话：86-28-85471599(O),15908103008传真：86-28-85471599(O)E-mail：whongning@163.com谢谢！