TCAMDI 009.3-2023 无菌医疗器械初包装洁净度 第3部分：微生物总数估计试验方法

团体标准T/CAMDI009.3—2023无菌医疗器械初包装洁净度第3部分：微生物总数估计试验方法Cleanlinessofprimarypackageforsterilemedicaldevice–Part3：Testmethodsforestimatingthetotalnumberofmicroorganisms2023-04-20实施中国医疗器械行业协会发布2023-04-20发布ICS11.080.030CCSC31T/CAMDI009.3-2023I目次前言.................................................................................II引言................................................................................III1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14原理...............................................................................25仪器和设备.........................................................................26取样...............................................................................37测试前准备.........................................................................38试验步骤...........................................................................49计数方法...........................................................................610复检方法..........................................................................611微生物总数估计的方法验证..........................................................6附录A（规范性）回收率F...............................................................7附录B（资料性）生物负载技术的验证.....................................................9参考文献.............................................................................11T/CAMDI009.3-2023II前言本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是T/CAMDI009系列标准的第3部分，T/CAMDI009系列标准已经发布了以下几个部分：——第1部分：微粒污染试验方法气体吹脱法；——第2部分：微粒污染试验方法液体洗脱法；——第3部分：微生物总数估计试验方法；——第10部分：污染限量。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本部分的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国医疗器械行业协会医用高分子制品专业分会提出。本文件由中国医疗器械行业协会医用高分子制品专业分会标准化技术委员会归口。本文件起草单位：安徽和美瑞医用包装材料有限公司、威海德生技术检测有限公司、南微医学科技股份有限公司、上海建中医疗器械包装股份有限公司、振德医疗股份用品有限公司、苏州方位无菌包装有限公司、江西省医疗器械检测中心、河南驼人贝斯特医疗器械有限公司、山东中保康医疗器具有限公司、成都市新津事丰医疗器械有限公司。本文件主要起草人：闫宁、宋蕾、李宁、汪友琼、蒋水姣、方伯宁、丁琦、华俊娟、巩家富、田兴龙。本文件于2023年4月首次发行。T/CAMDI009.3-2023III引言无菌医疗器械的初包装是无菌医疗器械的组成部分，因此其洁净度直接影响无菌医疗器械的洁净度。这就要求初包装要在足够洁净的条件下生产。对于某些特殊器械的初包装，可能要求在与无菌医疗器械同等洁净度的生产环境下生产或进行末道清洗。评价无菌医疗器械的初包装的洁净度可从以下几个方面进行：——微粒污染；——生物负载；注：初包装材料自身脱落的材料颗粒物质（常称为“落絮”），这也被视为无菌医疗器械的微粒污染源。T/CAMDI009系列标准旨在对无菌医疗器械的初包装的洁净度给出相关评价和控制规范。随着科学发展和技术进步，相关评价试验方法和技术指标将不断得到改进和完善，本系列标准也将进行适时修改和补充。T/CAMDI009.3的本文件用于评价无菌医疗器械初包装的生物负载的污染水平。该方法包括样品的选择和收集、试样洗脱和擦拭、薄膜过滤、移入培养基、培养、对培养的样本进行计数和定性、数据解释等内容。T/CAMDI009.3-20231无菌医疗器械初包装洁净度第3部分：微生物总数估计的试验方法1范围本文件描述了无菌医疗器械初包装和/或初包装材料上的微生物总数估计的测定方法。本文件适用于无菌医疗器械初包装和/或初包装材料上的微生物总数估计的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定。GB15979一次性使用卫生用品卫生标准。GB/T19973.1医疗器械的灭菌微生物学方法第1部分产品上微生物总数的测定。《中华人民共和国药典》2020年版。3术语和定义GB/T19973.1-2015界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1生物负载bioburden一件产品和/或包装上或其中存活的微生物总数。［ISO/TS11139:2006,定义2.2］3.2培养条件cultureconditions促进微生物复苏、生长和/或繁殖所采用的培养基和培养方式。注：培养方法可包括温度、时间和其他规定用于培养的条件。［ISO/TS11139:2006,定义2.10］3.3生物负载水平bioburdenlevel100cm2被测试样的表面上含有微生物的总数即微生物总数（cfu）×100/被测试样的表面积（cm2）。3.4回收率FrecoveryefficiencyT/CAMDI009.3-20232用某一特定技术从产品上采集和/或培养微生物能力的测量。4原理4.1一般微生物污染评估技术的主要流程图如下：4.2原理本文件依据以上流程采样处理后，采取清洗或擦拭的方法处理试样，用孔径不大于0.45μm的滤膜，将来自试样的洗脱液过滤后转接至培养基上在规定温度和时间培养,培养结束后，肉眼或仪器计数滤膜上微生物菌落数，最终评估初包装生物负载的污染程度。5仪器和设备5.1设备5.1.1微生物限度仪（薄膜过滤器）5.1.2压力蒸汽灭菌器5.1.3磁力加热搅拌器5.1.4超净工作台5.1.5生物安全柜5.1.6分析天平5.1.7恒温培养箱T/CAMDI009.3-202335.1.8生化恒温培养箱（霉菌培养箱）5.1.9干燥箱5.1.10电热恒温水浴锅5.1.11pH计5.1.12菌落计数器等5.2器具烧杯、量筒、三角瓶(带硅胶塞)、试管(带硅胶塞)、酒精灯、手术剪刀、培养皿、刻度吸管、无菌镊子、无菌剪刀、放大镜等。5.3试剂胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、0.9%无菌氯化钠溶液、0.1%无菌蛋白胨水溶液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。6取样6.1抽样取决于许多因素，但首要条件是样本必须尽可能代表无菌医疗器械初包装生产过程和与医疗器械直接接触的部位。6.2尽可能使用整个的产品进行生物负载评估，有些初包装太大，如外科手术衣或外部引流配件的初包装，测试时不能装入实验室的玻璃器皿内，测试使用的部位应能最大限度代表整个产品的生物负载。6.3抽取的样品应保存在洁净包装袋内（洁净包装袋的生产环境应不低于样品的生产环境）。6.4如果需要分割样品，应在净化工作台或层流罩下进行，以免污染样品。6.5最少取样数量：于同一批号中至少抽取12个样品，1/4样品用于测试，1/4样品用于留样，另1/2样品（可就地封存）必要时用于复检。6.6供试品的最少检验量：洗脱表面积应不小于100cm2。注：当按6.5条取样，样品数量不能满足供试品的最少检验量要求时，应适当增加取样数量。6.7供试液应在制备后2小时内完成测试，如不能完成测试，应重新制备试液测试。7测试前准备7.1培养基的制备7.1.1胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）制备7.1.1.1按胰酪大豆胨琼脂培养基产品说明书进行配制、灭菌，灭菌结束后摇匀，冷却后分装在洁净的无菌培养皿内，制备好的培养基若不及时使用，应置于无菌密闭容器中，在2〜25°C、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。7.1.1.2自制的培养基按以下方法配制：胰酪胨15.0g，琼脂15.0g，大豆木瓜蛋白酶水解物5.0g，水1000mL，氯化钠5.0g。除琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25°C的pH值为7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，摇匀，分装，灭菌。7.1.1.3亦可直接使用一次性即用型培养基。7.1.2沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）制备T/CAMDI009.3-202347.1.2.1按沙氏葡萄糖琼脂培养基产品说明书进行配制、灭菌，灭菌结束后摇匀，冷却后分装在洁净的培养皿内，制备好的培养基若不及时使用，应置于无菌密闭容器中，在2〜25°C、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。7.1.2.2自制的培养基按以下方法配制：动物组织胃蛋白酶水解物琼脂15.0g，胰酪胨等量混合物10.0g，水1000mL，葡萄糖40.0g，除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH使灭菌后在25°C的pH值为5.6±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。7.1.2.3亦可直接使用商业化预制培养基。7.2洗脱液的制备7.2.10.9%无菌氯化钠溶液称取氯化钠9g于1000mL纯净水中（可按比例增加或减少配制量），搅拌溶解后，分装于容器中，装量不得超过容器容量的2/3，盖上硅胶塞，包好，配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。7.2.20.1%无菌蛋白胨溶液取蛋白胨1.0g，加水1000mL，微温溶解，必要时滤过使澄清，调pH值至7.1±0.2，按7.2.1要求分装，灭菌。7.2.3pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液取磷酸二氢钾3.56g，无水磷酸氢二钠5.77g，氯化钠4.30g，蛋白胨l.00g，加水1000mL，微温溶解，必要时滤过使澄清，按7.2.1要求分装，灭菌。注：可采用上述任何一种配方配制洗脱液，洗脱液配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。根据供试品的特性，也可选用其他经验证的适宜溶液作为洗脱液，如需要，可在上述洗脱液的灭菌前或灭菌后加入表面活性剂或中和剂等。7.3无菌滤膜准备准备独