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DB11/T1432—20171ICS65.020B15备案号：56066-2017DB11北京市地方标准DB11/T1432—2017生物防治产品应用技术规程舞毒蛾核型多角体病毒TechnicalregulationsforapplyingofbiocontrolproductionLymantriadisparL.nuclearpolyhedrosisvirus2017-06-29发布2017-10-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T1432—2017I前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位：北京市西山试验林场。本标准主要起草人：梁洪柱、陈倩、宁少华、赵洪林、赵京芬、张宝增、安玉涛、蒋薇、成新新、李学燕、张博、焦进卫。DB11/T1432—20171生物防治产品应用技术规程舞毒蛾核型多角体病毒1范围本标准规定了舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒（LymantriadisparasiaticaVnukovskijNuclearPolyhedrosisVirus，简称LdNPV）制剂的制备和应用、防治效果调查等技术内容。本标准适用于北京地区利用舞毒蛾亚洲亚种幼虫的防治。2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1舞毒蛾亚洲亚种LymantriadisparasiaticaVnukovskij属鳞翅目（Lepidoptera）毒蛾科（Lymantriidae），是重要的森林害虫，其识别特征参见附录A。北京地区为亚洲亚种，该虫以幼虫为害叶片，寄主可达500余种，危害多种林木、果树等，主要危害植物种类参见附录B。2.2多角体polyhedralinclusionbody(PIB)包埋病毒粒子的包涵体，用于表示病毒制备和应用过程中的计数。2.3舞毒蛾核型多角体病毒LymantriadisparasiaticaVnukovskijnuclearpolyhedrosisvirus一种具有较高宿主特异性的昆虫病毒，属于杆状病毒科双环状DNA病毒，病毒粒子无规则地包埋在多角体中。2.4标准枝法branchsamplingmethod用于抽样调查舞毒蛾幼虫发生情况的一种方法。即低龄幼虫期，在树冠按上、中、下三个部位，东、西、南、北、中五个方位，分别随机抽取50cm长的样枝1个，调查各样枝上舞毒蛾幼虫数量。2.5阻隔法blockingmethod利用4龄以上舞毒蛾幼虫具有上下树的特性，用塑料薄膜、塑料胶带缠绕树干胸径处从而阻隔幼虫的方法，围环宽度不小于10cm。3LdNPV制剂的制备和应用3.1LdNPV制剂的制备DB11/T1432—20172LdNPV制剂的制备参见附录C。3.2防治对象舞毒蛾亚洲亚种幼虫。3.3防治适期最佳防治龄期为1～3龄幼虫。在正常年份，3月中旬舞毒蛾亚洲亚种幼虫陆续孵化，3月中旬～4月中旬为最佳防治时期；也可依据常见植物的物候期预测最佳防治时期，该虫1～3龄幼虫发生期与物候关系参见附录D。3.4使用剂量防治1～3龄期幼虫，每hm2用1.5×1012PIB，即1500mlLdNPV制剂；防治4龄以上幼虫，用量加倍，每hm2用3.0×1012PIB，即3000mlLdNPV制剂。3.5施用方法使用时，用水稀释制剂，均匀喷洒到树叶上。具体施用方法见表1。表1舞毒蛾亚洲亚种核型多角体病毒制剂施用方式及施用浓度喷雾类型地面喷雾/飞机喷雾防治1～3龄幼虫稀释倍数防治4龄以上幼虫稀释倍数常量喷雾地面喷雾1000500飞机喷雾3015低量喷雾地面喷雾10050飞机喷雾104超低容量喷雾地面喷雾41.54防治效果调查4.1调查指标检查校正虫口减退率表示防治效果。校正虫口减退率越高，表示防治效果越好。4.2调查时间制剂喷施前调查一次，喷施后第20d再调查一次。4.3调查方法DB11/T1432—20173在幼虫发生期，针对舞毒蛾危害的树木进行调查，调查表参见附录E。选择有代表性的地块设立标准地。标准地面积一般为0.2hm2。人工林每100hm2设立标准地1块，天然林每300hm2设立标准地1块。在标准地内随机选取20株树为标准株，采用标准枝法和阻隔法调查防治前后的幼虫数量。4.4计算公式虫口减退率、校正虫口减退率计算方法分别见公式（1）、（2）：虫口减退率（%）=×100……………………………（1）校正虫口减退率（%）=…………………（2）防治前活虫数防治前活虫数-防治后活虫数100-对照区虫口减退率防治区虫口减退率-对照区虫口减退率DB11/T1432—20174附录A（资料性附录）舞毒蛾亚洲亚种的形态特征A.1卵圆形，两侧稍扁，直径1.3mm；初期杏黄色，以后转为褐色；数百粒到千余粒卵产在一起，成为一卵块，上被黄褐色绒毛。A.2幼虫1龄幼虫头宽0.5mm，体黑褐色，刚毛亦长，刚毛中间具有呈泡状扩大的毛，称为“风帆”，是减轻身体重量易被风吹摇摆进行扩散的构造。2龄幼虫头宽1.0mm、黑色，体黑褐色，胴部显现出两块黄色斑纹。3龄幼虫头宽1.8mm，头黑色，胴部花纹增多。4龄幼虫头宽2.9mm，头暗褐色，出现两条黑斑纹。5龄幼虫头宽4.4mm，头黄褐色，两条黑斑纹更鲜明。老熟幼虫体长50mm～70mm，头宽6mm、黄褐色，具“八”字形灰黑色条纹；背线灰黄色，亚背线、气门上线及气门下线部位各体节均有毛瘤，共排成6纵列，背面两侧毛瘤上的刚毛短、黑褐色，气门下线一列毛瘤上的刚毛最长、灰褐色，背上两列毛瘤色泽鲜艳，前5对为蓝色，后7对为红色。A.3蛹体长19mm～34mm。红褐色或黑褐色，被有锈黄色毛丛。A.4成虫雌雄异型。雄蛾体长约16mm～21mm，翅展37mm～54mm；头部黄褐色，复眼黑色，下唇须向前伸，第2节长，第3节短；后足胫节有2对距；前翅暗褐色或褐色，有深色锯齿状横线，中室中央有1个黑褐色点，横脉上有一弯曲形黑褐色纹，前、后翅反面黄褐色。雌蛾体长22mm～30mm，翅展58mm～80mm左右；前翅黄白色，横脉明显具有“”形黑褐色斑纹一个，其他斑纹与雄蛾近似，前后翅外缘每两脉间有1个黑褐色斑点；腹部肥大，末端着生黄褐色毛丛。DB11/T1432—20175附录B（资料性附录）北京地区舞毒蛾主要危害植物种类北京地区舞毒蛾主要危害植物种类见表B.1表B.1北京地区舞毒蛾主要危害植物种类（以拉丁学名为序）寄主中文名称寄主拉丁学名复叶槭AcernegundoL.杏ArmeniacavulgarisLam.白桦BerulaplatyphyllaSuk.构树BroussonetiapapyiferaLinn.黄杨Buxussinica(Rehd.etWils)ChengexM.Cheng黄栌CotinuscoggygriaScop.山楂CrataeguspinnatifidaBunge柿DiospyroskakiL.f.银杏GinkgobilobaL.核桃JuglansregiaL.华北落叶松Larixprincipis-rupprechtiiMayr苹果属MalusMill.桑MorusalbaL.加杨PopulusXcanadensisMoench樱桃PrunuspseudocerasusLindl.李PrunussalicinaLindl.榆叶梅PrunustrilobaLindl.枫杨PterocaryastenopteraC.DC.蒙古栎QuercusmongolicaFisch.exLedeb麻栎QuercusacutissimaCarruth.柳属SalixL.蒙椴TiliamogolicaMaxim.榆属UlmusL.DB11/T1432—20176附录C（资料性附录）制剂制备C.1LdNPV的室内增殖C.1.1室内条件温度25℃，光照时间与黑暗时间比例为14:10，光源为白炽灯。C.1.2饲料为人工饲料。C.1.3饲养工具透明塑料养虫杯，底直径3.5cm，顶直径5.0cm，杯高5cm。C.1.4增殖方法在养虫杯内放入约200粒已消毒即将孵化的舞毒蛾卵粒，每3d更换一次新鲜饲料和养虫杯，并将幼虫分至40头/杯，待幼虫发育至3龄末时，开始喂饲带毒饲料，将1ml浓度为1.0×107PIB/ml的LdNPV液体倒入养虫杯内的人工饲料表面，阴干后待其取食，5d后更换带毒饲料，及时清理养虫杯内虫粪，防止虫体感染杂菌。待80%幼虫死亡时，收集所有幼虫，-10℃长期贮存。C.2LdNPV的提纯C.2.1LdNPV的提取将C.1.4中收集的幼虫加2倍无菌水稀释，在高速组织捣碎机上，粉碎3min后取出，先用三层纱布初步过滤，然后再用80目筛子进一步过滤，滤液用16000r/min离心机离心15min，滤液分为三层，上层清液为水，弃之；中间浅褐色沉淀为病毒粗提物，保留；底部黑色沉淀为杂质，弃之。C.2.2粗提物的测定取1g病毒粗提物稀释至1000倍，然后取1ml稀释液滴于血球计数板上，盖盖玻片，在显微镜15×40倍状态下计数，对角线取样，共取80小格，颗粒边缘不在同一小格内的不计，按公式C.1计算粗提物内PIB含量。如果粗提物含量低于1.0×1011PIB/ml，表明病毒粗提物中杂质含量过高，应加2倍无菌水混匀，重新离心提纯，除杂质，直至含量合格。每克PIB含量=平均每格颗粒体数×4000000×1000…………………………（C.1）注：1000为稀释倍数。DB11/T1432—20177C.3LdNPV制剂的配制C.3.1配制将C.2.1中含量合格的LdNPV加7%的盐水，与50%中性甘油混合，三者重量比为1:49:50，制成甘油病毒悬浮液。C.3.2LdNPV制剂的质量检测用多点抽样的方法，取1mlC.3.1中配制的甘油病毒悬浮液，按C.2.2中方法测定，LdNPV制剂中PIB含量在1.0×109PIB/ml以上，为合格。C.3.3LdNPV制剂的调制将上述甘油病毒悬浮液加无菌水调节浓度至1.0×109PIB/ml。C.4LdNPV制剂的运输和贮存C.4.1运输25℃以下，避免受热、暴晒，避免紫外线照射。C.4.2贮存密封、避光、避紫外线照射。0℃～4℃条件下保质期2年；25℃以下保质期6个月。DB11/T1432—20178附录D（资料性附录）舞毒蛾亚洲亚种1～3龄幼虫发生期与常见植物物候关系表舞毒蛾亚洲亚种1～3龄幼虫发生期与常见植物物候关系表D.1。表D.1舞毒蛾亚洲亚种1～3龄幼虫发生期与常见植物物候关系表物候植物中文名称寄主拉丁学名物候毛白杨PopulustomentosaCarr.落花期（也称落果期）榆树UlmuspumilaL.落果期紫藤Wisteriasinensisi(Sims)Sweet开花初期杏ArmeniacavulgarisLam.始花期DB11/T1432—20179附录E（资料性附录）舞毒蛾亚洲亚种幼虫调查表舞毒蛾亚洲亚种幼虫调查见表E.1。E.1舞毒蛾亚洲亚种幼虫调查表调查地点：区县（分区）乡镇（林班）村（小班）标准地面积（hm2）：代表面积（hm2）：天气：晴□阴□雨□温度（℃）：相对湿度（％）调查时间：年月日调查人：调查项目调查内容寄主植物树种：树龄（a）：平均胸径（cm）：平均树高（m）：调查株数：有虫株数：有虫株率（％）：舞毒蛾幼虫数（平均）：虫情级别：轻□中□重□立地条件海拔（m）：坡位：上□中□下□坡度：坡向：郁闭度：林下环境：物候防治情况备注................................................_________________________________