DB11T 1429-2017 动物养殖场消毒效果评价规范

ICS65.020.20B41备案号：56063-2017DB11北京市地方标准DB11/T1429—2017动物养殖场消毒效果评价规范Regulationofdisinfectanteffectevaluationoffarms2017-06-29发布2017-10-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T1429—2017I目次前言...............................................................................II1范围...............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13样品采集...........................................................................14检测...............................................................................25检测数据处理.......................................................................36检测结果判定.......................................................................4DB11/T1429—2017II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由北京市农业局提出并归口。本标准由北京市农业局组织实施。本标准起草单位：北京市兽药监察所、北京农学院、北京市动物疫病预防控制中心、北京市实验动物管理办公室。本标准主要起草人：杜继红、吕涛、刘钧、崔德凤、刘晓冬、李根平、周德刚、张永红、张小飞、马志军、任伟、刘文菊、沈红、孙志文、王亚芳、王海良、孙化一。DB11/T1429—20171动物养殖场消毒效果评价规范1范围本标准规定了动物养殖场消毒后样品采集、检测、检测数据处理和检测结果判定的方法。本标准适用于北京地区畜禽养殖场和普通级实验动物养殖场。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4789.2食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定GB/T18204.3—2013公共场所卫生检验方法第3部分：空气微生物3样品采集3.1舍内物体表面样品3.1.1时间分别于消毒处理前后15min～30min(或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样。3.1.2面积被采面积＜100cm2的取全部表面；被采面积≥100cm2的至少要取100cm2。3.1.3采样点采样区域包括舍内墙壁和设备设施（笼具、水线、料槽）。墙壁选择4点（东、南、西、北墙各1点），距地面垂直高度为0.8m～1.5m，分别位于墙壁的中央平整处，避开通风和降温设施；笼具选择4点，位于整体中央平整处；水线选择均匀分布4点，位于整体中央平整处；料槽选择4点，位于槽的外壁中央平整处。3.1.4方法将边长10cm的正方形规板用火焰灭菌后，放置于物品表面，用蘸取适量灭菌生理盐水的棉拭子在规板范围内横、竖各5次滚动涂抹取样(同一采样拭子不应在同一表面重复涂抹)，无菌操作放入装有10mL含适宜中和剂（中和剂的验证试验参见附录A）的灭菌生理盐水试管中，塞紧试管，标记并记录。3.2舍内空气样品3.2.1时间DB11/T1429—20172分别于消毒处理前和消毒处理后15～30min（或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样(消毒时要关闭畜舍门窗)。3.2.2采样点采用5点法布置测点，布置方法按GB/T18204.3—2013中附录A的规定执行，采样高度根据养殖场情况设定，地面养殖动物为地面，笼养动物高度为笼架高度的中央水平面。舍内面积不大于50m2的布置5个测点，每增加20m2增加2个测点。3.2.3方法采用空气沉降菌法检测，按GB/T18204.3—2013进行操作。3.3场区道路样品（硬化道路或土路）3.3.1时间分别于消毒处理前和消毒处理后15～30min（或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样。3.3.2采样点采样区域为养殖场主干道，选择均匀分布4点，位于道路中央平整处。3.3.3方法硬化道路样品采集方法同3.1.4；土路为用灭菌不锈钢勺铲取道路表面土样20g～30g,装于含适宜中和剂（中和剂的验证试验见附录A）的灭菌容器内，盖好，标记并记录。4检测4.1消毒前后样品检测4.1.1舍内物体表面用力震荡采样试管10～15次或用漩涡混合器混匀样品，使样品中的细菌洗入灭菌生理盐水中，用灭菌吸管或加样器吸取0.5mL，加入装有4.5mL灭菌生理盐水的试管中，10倍系列倍比稀释，每个稀释度分别取0.5mL混合液于灭菌平皿，用倾注法倒入培养基，36℃±1℃培养48h进行细菌计数。每个稀释度均需作平行样，计算样品平均菌落数。细菌计数采用平板计数法，按GB4789.2的规定操作。4.1.2舍内空气将采样平皿置36℃±1℃培养48h进行细菌计数，按GB/T18204.3—2013计算舍内空气平均菌落数。4.1.3场区道路4.1.3.1硬路按4.1.1检测。4.1.3.2土路DB11/T1429—20173无菌称取混合后土样10g，放入100mL灭菌生理盐水中，用力震荡，混匀，静置片刻，待泥沙下沉后，取上清液作10倍系列倍比稀释。根据土壤中含菌情况，选择3个适宜稀释度，每个稀释度分别取0.5mL混合液于灭菌平皿，用倾注法倒入培养基，36℃±1℃培养48h进行细菌计数。每个稀释度均需作平行样，计算样品平均菌落数。4.2对照试验4.2.1空白对照将未用的同批培养基置36℃±1℃培养48h，若有菌生长，说明所用培养基有污染，试验无效，更换后重新进行。4.2.2阴性对照取0.5mL稀释液（即灭菌生理盐水）放入灭菌平皿中，用倾注法倒入培养基，36℃±1℃培养48h，若有菌生长，说明所用稀释液有污染，试验无效，更换后重新进行。4.2.3阳性对照4.2.3.1标准菌检测使用标准菌为金黄色葡萄球菌（ATCC6583）和大肠杆菌（ATCC25922）。4.2.3.2方法取过夜培养的标准菌悬液，10-7稀释后取0.5mL稀释液放入灭菌平皿中，用倾注法倒入培养基，36℃±1℃培养48h，细菌计数约为50cfu/皿，表明标准菌状态良好，所用培养基适用性好。5检测数据处理5.1杀菌率的计算平板计数方法见GB4789.2，以全部采样点的平均菌落数作为样品平均菌落数，根据消毒前后样品平均菌落数计算杀菌率，见公式(1)，以杀菌率评价消毒效果。因现场试验环境条件变化较多，难以统一，无法测定准确的自然沉降率，故不考虑自然衰亡因素。%100010´-=NNNR………………………………(1)式中：R——杀菌率；N0——消毒前样品平均菌落数；N1——消毒后样品平均菌落数。示例：某鸡舍，消毒前采样，舍内墙壁上的平均菌落数为99cfu/100m2。用某消毒剂喷雾消毒30min后采样，菌落数减至10cfu/100m2。则该消毒剂处理30min后，舍内墙壁上自然菌的杀菌率可按下法计算：%9.89%100991099=´-=RDB11/T1429—201745.2数据选择范围按GB4789.2规定进行。6检测结果判定动物养殖场依据平均杀菌率判定消毒效果的方法见表1。表1动物养殖场消毒效果评价表评价等级平均杀菌率（%）舍内物体舍内空气厂区道路优＞90.0＞90.0＞90.0良85.0～90.085.0～90.085.0～90.0合格80.0～84.080.0～84.080.0～84.0不合格＜80.0＜80.0＜80.0注：表内为有动物舍的判定标准；除特殊要求外，无动物舍的判定标准，舍内空气平均杀菌率≥90.0%为合格。DB11/T1429—20175AA附录A（资料性附录）中和剂验证试验A.1.1中和剂验证试验方法通过设定下列实验来确定所选的中和剂是否合适（见表A.1）。表A.1中和剂验证试验方法试验组别说明问题1.（消毒剂+菌液）+中和剂证明中和剂能否中和残留消毒剂的抑菌作用2.中和剂+菌液证明中和剂有无抑菌作用3.（消毒剂+中和剂）+菌液证明消毒剂与中和剂的反应产物有无抑菌作用4.消毒剂+菌液证明消毒剂在试验浓度下是否有杀菌或抑菌作用5.菌液证明菌种与培养基是否适宜6.未接种的培养基证明培养基是否污染A.1.2试验原则A.1.2.1该项试验所用试验标准菌应为消毒试验选用菌株中抗力最弱者。A.1.2.2所用试剂、培养基及其他材料都应一致。A.1.2.3应以消毒剂未用中和剂中和时的最低有效浓度作为试验浓度。_________________________________