DB11T 1186-2015 枣疯病综合防治技术规程

ICS65.020.20B16备案号：45803-2015DB11北京市地方标准DB11/T1186-2015枣疯病综合防治技术规程TechnicalcodeofpracticeforcontrolofJujubewitches’broom2015-04-30发布2015-08-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T1186-2015I目次前言................................................................................II1范围..............................................................................12规范性引用文件.....................................................................13术语和定义.........................................................................14病树的分级.........................................................................15防治措施..........................................................................15.1检疫措施.......................................................................15.2建园要求与品种选择.............................................................25.3枣园环境治理...................................................................25.4栽培管理措施...................................................................25.5病树清理.......................................................................25.6防治媒介昆虫...................................................................25.7疯枝清理.......................................................................25.8换头改造.......................................................................25.9输液治疗.......................................................................2附录A（资料性附录）枣疯病识别特征..................................................3附录B（资料性附录）枣疯病病树分级..................................................4附录C（资料性附录）枣疯病植原体PCR检测和检验方法..................................5附录D（资料性附录）常见传病叶蝉的生物学特性........................................7附录E（资料性附录）输液治疗防治枣疯病方法..........................................8参考文献............................................................................10DB11/T1186-2015II前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由北京市园林绿化局提出并归口。本标准由北京市园林绿化局组织实施。本标准起草单位：北京市林业保护站。本标准参与起草单位：中国林业科学研究院、北京流村王园果园。本标准主要起草人：王合、陶万强、刘曦、田国忠、袁菲、潘彦平、任争光、郝少东、冯术快、李志朋、王峰、李杰、赵连祥。DB11/T1186-20151枣疯病综合防治技术规程1范围本标准规定了枣疯病的病情分级和综合防治技术。本标准适用于北京地区枣疯病的防治。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其昀新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB4285农药安全使用标准GB/T8321.8-2007农药合理使用准则（八）GB/T8321.9-2009农药合理使用准则（九）3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1植原体phytoplasma原称类菌原体(mycoplasma-likeorganism,MLO)，为单细胞原核生物，无细胞壁，寄生在植物韧皮部筛管中和介体昆虫体内。3.2枣疯病Jujubewitches’broom是一种植原体引起的维管束系统病害，以枝叶丛生、花器返祖为主要症状，严重时可导致枣树死亡。注：识别特征参见附录A。4病树的分级分级标准参见附录B。5防治措施5.1检疫措施DB11/T1186-201525.1.1加强枣树苗木、接穗的调运检疫，接穗、砧木、苗木等繁殖材料携带植原体检测和检验方法参见附录C。5.1.2发现带病接穗、砧木、苗木等植物繁殖材料应及时销毁，不得引入新枣园或已建立的无病枣园，防止枣疯病扩散蔓延。5.2建园要求与品种选择5.2.1宜在没有发生枣疯病的地区建园，在栽培枣和酸枣发病严重区建园时可选用抗病、耐病品种，如星光、黑腰子枣、唐星、阜星、嘎嘎枣、尜尜枣、葫芦枣、骏枣、壶瓶枣、洪赵小枣、月光等品种。慎用易感病品种，如梨枣、冬枣、泡泡红枣、金丝小枣、赞皇大枣等。5.2.2宜在无病区用健康酸枣种子培育实生苗和建优良品种采穗圃；有条件的应推广应用脱毒苗；在病区建采穗圃，应在防虫网室内。5.3枣园环境治理5.3.1枣园周边不宜栽植松、柏、桑等植物，不宜在枣园内间作芝麻、月季花等媒介昆虫的嗜食植物。5.3.2枣树发芽前和生长期间应及时清除桑、榆等其他植物和杂草。5.3.3彻底刨除枣园周围已经染病的酸枣。5.4栽培管理措施因地制宜，合理施用有机肥，增施磷钾肥；适度修剪，提高树体通透性和光照强度；控制结果数量，保持健康树势。5.5病树清理5.5.1对于新建枣园或无病树枣园，发现病株，应及时清除。5.5.2对于发病率较高，且品种抗病性较低的枣园，发现病株，应及时刨除并补栽抗病性强的品种，古树名木除外。5.5.3刨除病树后的树坑应晾晒，待残根风干后再进行补植。5.6防治媒介昆虫主要媒介昆虫的形态特征和发生规律参见附录D；可选用内吸性、触杀性的杀虫剂；使用方法按照GB/T8321.8、GB/T8321.9和GB4285执行。5.7疯枝清理对于发病较轻（Ⅱ级以下，含Ⅱ级）枣树的疯枝、带病根蘖，应立即清除。疯枝清理的原则是“疯小枝去大枝”，即从疯枝的上一级次枝条基部去除，不留桩。5.8换头改造对于发病较重（Ⅲ级以上，含Ⅲ级）且有保存价值的病树，利用星光、黑腰子等抗病品种进行多头高接。高接时间一般在4月中下旬~5月下旬。高接部位宜低不宜高，并及时清除砧木萌蘖。5.9输液治疗对于发病较轻（Ⅱ级以下，含Ⅱ级）枣树和古树名木等有保留价值的病树，可进行树干输液（滴注）治疗。治疗时间为枣树展叶后至开花前1周。输液治疗方法参见附录表E.1，药剂使用量参见附录表E.2。DB11/T1186-20153AA附录A（资料性附录）枣疯病识别特征A.1地上部分被害植株出现叶片变小，枝叶丛生、纤细、小叶黄化等。多出现在新生的枣头上。花器症状表现为花器退化，花梗明显延长，是正常花梗的3～6倍，萼片、花瓣、雄蕊发育成小叶，雌蕊发育成小枝。枝叶症状表现为1年生发育枝的主芽和多年生发育枝上的隐芽非正常萌发，一年多次萌生出细小枝叶，病枝纤细，节间缩短，形成“丛状枝”。果实症状表现为大小不一，果面着色不匀，凸凹不平，凸起部位呈红色，凹陷部位呈绿色，果肉疏松，失去食用价值。A.2地下部分根部发病后，萌生的根蘖也呈稠密的丛枝状，长到30cm左右便停止生长继而枯死。病根发病初期皮呈褐色，后期形成点发性溃疡斑，昀终死亡。DB11/T1186-20154BB附录B（资料性附录）枣疯病病树分级枣疯病病树分级见表B.1。表B.1枣疯病病树分级表病级表现症状0无疯枝。Ⅰ仅有1~2个小病枝，其他枝条外观正常。Ⅱ病枝占总枝量的1/4以下，其他枝条外观正常。Ⅲ病枝占总枝量的1/4~1/2以下，其他枝条外观正常。Ⅳ病枝占总枝量的1/2~3/4以下，但尚有枝条外观正常。Ⅴ病枝占总枝量的3/4以上（含），病枝遍布全树，基本无正常枝条。DB11/T1186-20155CC附录C（资料性附录）枣疯病植原体PCR检测和检验方法C.1枣树和植原体总DNA提取方法C.1.1CTAB碱裂解法CTAB碱裂解法总DNA提取方法如下：a）取枣树树皮、叶柄、叶脉、根等含韧皮部组织，用液氮研磨成粉末状。b）称取0.1g于2mL离心管中,加入800μL65℃预热的CTAB提取液（2%CTAB、100mMTris-HClpH8.0、1.4MNaCl、20mMEDTA、0.2%β-巯基乙醇），65℃水浴1h（期间轻轻混匀几次）。c）加入等体积酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）抽提，12000rpm离心10min，取上清液至离心管。d）加入等体积氯仿轻轻混匀，12000rpm离心10min，取上清液至离心管。e）加入等体积异丙醇轻轻混匀。f）将混匀的液体转入DNA吸附柱CB3（吸附柱容积为700μL左右，可分次加入离心）中，12000rpm离心30sec，弃掉废液。g）向吸附柱CB3中加入700μL70%乙醇，12000rpm离心30sec，弃掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中，然后重复洗脱步骤。h）吸附柱CB3放入收集管中，12000rpm离心2min，倒掉废液。将吸附柱CB3放入1.5mL离K心管并于室温开盖放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇。i）向吸附膜的中央部位悬空滴加100μL1×TE，室温放置2min~5min，12000rpm离心2min，将溶液收集到离心管中，-20℃保存备用。C.1.2试剂盒法可直接用商品化植物基因组DNA快速提取试剂盒提取。C.2枣疯植原体的PCR检测验证C.2.1引物以植原体16SrRNA基因保守序列设计引物对R16mF2/R2（R16mF2:5'-CATGCAAGTCGAACGGA-3'，R16mR2:5'-CTTAACCCCAATCATCGA-3'）和R16F2/R2（R16F2:5'-ACGACTGCTAAGACTGG-3’,R1:5'-TGACGGGCGGTGACAAACCCCG-3'）进行直接PCR或Nested-PCR。a）直接PCR反应体系(50μL)：1μL~5μL模板DNA，1μL10mMdNTP，5μL10×PCRbuffer，1μL~4μL引物(R16mF2/R16mR2)，加0.5uLTaq酶，加蒸馏水至50uL。扩增条件：94℃变性5min；94℃，45s;52℃，30s;72℃,90s；扩增30个～35个循环，然后72℃，10min。b）Nested-PCR：取直接PCR产物稀释40倍后取1uL作DNA模板，引物为R16F2/R2，其它条件同直接PCR。C.2.2扩增产物用1%琼脂糖凝胶电泳，然后于紫外灯下检查1.2kb（Neste