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中华人民共和国专业标准熟料N型蛋白试验SBT10320-19997（试行）DetectionofN-typeprotein━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━本方法适用于酿造酱油半成品熟料中N型蛋白的测定。用N型试验可衡量原料中蛋白质蒸熟程度,评判蒸料的质量。1仲裁法1.1设备与消化率测定法同ZBX66032—87。1.2试剂及溶液1.2.1酶液:与消化率测定法同ZBX66032—87。1.2.2pH7.2磷酸盐缓冲液:与消化率测定法同,见ZBX66032—87。1.2.3氯化钠:分析纯。1.3操作1.3.1熟料浆制备:与消化率测定法同(ZBX66032—87)。1.3.2水解:精确称取熟料浆6g左右(精确到0.2mg)于150mL锥形瓶中,再加入酶液75mL,氯化钠20g,pH7.2缓冲液20mL,摇匀,在瓶口塞上橡皮塞后,置于恒温水浴锅中,45℃保温24h(或48h)。1.3.3过滤:水解结束后,过滤或离心分离。清液在沸水浴中加热至90℃。用冷水急速冷却,再过滤或离心分离。1.3.4比色:吸取上述清液2mL于试管中,再加入蒸馏水10mL,把试管置沸水浴中加热5min,立刻在冷水中急速冷却。试管中出现混浊或沉淀,N型为阳性。若要定量分析,可用浊度计或比色计测定,并用未煮沸的上清液作空白对照。2近似法2.1设备及试剂:和仲裁法相同。2.2操作2.2.1熟料浆制备:与消化率测定法同(ZBX66032—87)。2.2.2水解:与消化率测定法同(ZBX66032—87)。2.2.3加盐:N型试验可和消化率测定同时做。水解结束后,在锥形瓶中加入氯化钠20g,摇匀,使氯化钠溶解。冷却后定容至100mL,过滤或离心分离后,用于消化率测定(ZBX66032—87)。2.2.4过滤:把余下的约一半水解液振摇20min,再过滤或离心分离。清液在沸水浴中加热至90℃,再用冷水急速冷却,再过滤或离心分离。2.2.5吸取第二次过滤或离心的清液2mL于试管中,再加入蒸馏水10mL,置试管于沸水浴中加热5min,立刻在冷水中急速冷却。试管中出现混浊或沉淀,N型为阳性。━━━━━━━━━附加说明:本标准由商业部副食品局提出。本标准由上海市酿造科学研究所起草。本标准主要起草人须凤高。━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━中华人民共和国商业部1987-11-20批准1988-07-01实施