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第六章菌种保藏目的和管理规程原理、方法、要点菌种保藏机构菌种保藏主要内容菌种衰退？•生产菌株性状的劣化或遗传标记的丢失：1.菌落形态的改变2.生长速度缓慢3.生产能力下降4.抗不良环境能力减弱（抗噬菌体、低温等）什么原因引起菌种退化？•1.基因突变•2.连续传代•3.不良培养条件及不良保藏条件菌种退化的防止•1.减少传代次数•2.用单核细胞和单菌落移种传代•3.菌种纯化•4.采用良好培养基和培养条件•5.科学保藏第一节菌种保藏的目的和管理规程1.菌种保藏（cuclturecollection）•将微生物菌种用各种适宜的方法妥善保存，避免死亡、污染，保持其原有性状基本稳定。•目的：保持菌种的存活率、优良性能、生产能力2.菌种保藏的管理规程·符合国家相关法律法规·复核、鉴定、纯度检验、资源信息整理·菌种信息•菌种保藏方法、出入库、异地保藏备份、高致病性病原微生物和专利菌种、菌种保藏设施•定期检查纯度、生物学活性•3.菌种的生物安全性分类•一类微生物（对个体和群体危害程度高）•二类微生物（对个体危害程度高，对群体危害较高）•三类微生物（对个体危害程度中度，对群体危害较低）•四类微生物（对个体和群体危害程度低）•3.菌种的防护级别•一级生物防护•二级生物防护•三级生物防护•四级生物防护第二节菌种保藏的原理、方法及要点1.低营养2.干燥3.隔氧4.低温降低代谢速率使细胞处于休眠状态一、菌种保藏的原理二菌种保藏的方法1.斜面保藏法条件：4℃冰箱，相对湿度50%～70%保存期：1～6个月适用：细菌、放线菌或酵母菌影响因素：培养基和培养条件优点：简便、成本低，随时观察菌株性状、缺点：自发突变、染菌、菌种退化2.液体石蜡保藏法适用范围：广泛保存期：1～2个月方法：灭菌、倾注、封口、直立放置缺点：占据空间、菌种生产能力下降二菌种保藏的方法3.沙土管保藏法过筛、灭菌、干燥沙土保存期：数年适用：产孢子或形成芽孢的微生物缺点：存活率低制备菌种接种真空干燥、密封二菌种保藏的方法4.麸皮保藏法（曲法保藏）方法：灭菌、接种、干燥、低温保存适用：产孢子的霉菌和部分放线菌保存期：1年以上优点：简单、经济二菌种保藏的方法5.冷冻干燥保藏法保存期：4℃冰箱，保存5-10年适用：广泛优点：繁琐、设备技术要求高处理安瓿管制备菌悬液保护剂冷冻干燥真空封口安瓿管的保藏预冻6.液氮超低温保藏法二菌种保藏的方法保存期：-150℃～-196℃，保存15年适用：最为广泛优点：高效缺点：购置设备、费用高分装入安瓿管预冻置液氮内细胞保护剂封口二菌种保藏的方法7.甘油保藏法悬浮于灭菌的10%-15%甘油介质保存期：-20℃冰箱，保存0.5～1年超低温冰箱（-70℃）保存10年优点：简便缺点：需要设备超低温冰箱三、菌种保藏的注意事项菌种保藏前的培养无菌操作制备过程菌种的存放与使用第三节菌种保藏机构中心名称缩写所在地邮码保藏范围中国典型培养物保藏中心普通微生物菌种保藏中心农业微生物菌种保藏中心工业微生物保藏中心医学微生物菌种保藏管理中心抗生素菌种保藏管理中心兽医微生物菌种保藏中心林业微生物菌种保藏中心CCTCCCCGMCACCCCICCCMCCCACCCVCCCFCC武汉大学中国科学院微生物研究所中国科学院病毒研究所中国农业科学院土壤肥料研究所轻工部食品发酵工业研究所中国医学科学院皮肤病研究所中国药品生物制品检定所中国医学科学院医药生物技术研究所国家医药管理局四川抗生素工业研究所华北制药厂抗生素研究所农业部兽医药品监察所中国林业研究所武汉430072北京100080武汉430071北京100081北京100027南京210042北京100050北京100050成都610051石家庄050015北京100081北京100091专利菌种真菌，细菌病毒农业微生物工业微生物真菌细菌抗生素产生菌新抗生素产生菌抗生素工业生产菌种兽医微生物林业微生物小结目的和管理规程原理、方法、要点菌种保藏机构菌种保藏