正交试验法优选产乳颗粒的提取工艺

Jul.2008,Volume5,No.7(SerialNo.44)美中医学JournalofUS-ChinaMedicalScience,ISSN1548-6648,USA21正交试验法优选产乳颗粒的提取工艺冯俭，钟怡，刘颖，张梦云，张煜华（成都中医药大学附属医院药剂科，四川成都610072）摘要：目的优选产乳颗粒的最佳提取工艺。方法通过正交试验法，以浸膏收得率、总皂苷和总多糖含量为考察指标，筛选提取工艺。结果最佳提取工艺为药材加8倍量水，提取3次，每次1h。结论所选工艺稳定性好，科学合理。关键词：产乳颗粒；正交试验；最佳提取工艺OptimizationoftheextractiveprocessofChanrugranulebyorthogonaldesignFENGJian,ZHONGYi,LIUYing,ZHANGMeng-yun,ZHANGYu-huaAbstract:ObjectiveToinvestigatetheoptimalwaterextractiveprocessesforChanrugranule.MethodsTheextractiveprocedureofChanrugranulewasscreenedwithorthogonaltest,accordingtotheextractiverate,contentsofthetotalsaponinsandcontentsofthetotalpolysaccharide.ResultsTheoptimalprocesswasperformedby1hourextractionforthreetimes,with8-foldvolumeofwater.ConclusionTheprocessisstable,scientificandreasonable.Keywords:Chanrugranule;orthogonaldesign;extractiveprocess【作者简介】冯俭（1963－），男，硕士，成都中医药大学附属医院药剂科主任药师；研究方向：中药新药开发和有效成分筛选。产乳颗粒由王不留行、桔梗、麦冬等药组成，具有疏肝解郁、益气养血、通络下乳功效，用于产后缺乳症，临床疗效明显。本文采用正交试验法，以浸膏收得率、总皂苷含量和总多糖含量为考察指标，对提取工艺进行了优选。1.实验部分1.1仪器与试药721紫外-可见分光光度计；SartoriusBP211D型电子分析天平；LXJ-III型离心机。葡萄糖对照品购自中国药品生物制品检定所；其余试剂均为分析醇。药材（市售）经鉴定均符合《中国药典》标准。1.2方法1.2.1正交试验设计根据文献报道和预实验，采用正交实验法，以提取次数（A）、加水量（B）及提取时间（C）为考察因素，各取3个水平，进行L9（34）正交试验（表1）。考察指标为浸膏收得率、总多糖含量（COTTP）、总皂苷含量（COTTS），分别各占20分、50分、30分，进行综合评分（CE）筛选最佳提取工艺。表1正交试验因素水平表FactorsLevelsA(extractingtimes)B(water)/timesC(extractingtime)/h1180.52210133121.51.2.2药材提取工艺按实验设计方案，称取处方量药材，分别按表2的条件提取，提取液浓缩后，定容至100ml，得供试液。分别取供试液测定浸膏收得率、总多糖含量和总皂苷含量。1.2.3浸膏收得率的测定精密量取供试液20ml，倾入已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中放置0.5h，取出立即称重，计算浸膏收得率。正交试验法优选产乳颗粒的提取工艺221.2.4总皂苷的含量测定精密量取供试液20ml，置圆底烧瓶中，加入水饱和正丁醇回流提取两次（40ml，40ml），每次1h，合并两次正丁醇液，挥干正丁醇，于80℃烘箱中干燥3h，取出，置干燥器中放置0.5h，取出立刻称重，计算总皂苷含量[1]。1.2.5总多糖的含量测定[2]精密称取于60℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品10.0mg，置100ml量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，得0.1mg•ml-1的对照品溶液。另精密量取供试液20ml，加入95%乙醇，搅拌均匀，使含醇量达85%[3]，于冰箱中静置24h，离心并弃去上清液，沉淀用95%乙醇洗涤，至洗出液无色，水浴挥干至无醇味，用蒸馏水溶解，于250ml容量瓶中定容，再精密吸取1ml溶液至100ml容量瓶中定容，即得多糖供试品液。精密吸取2ml供试品液，加入5ml0.2%硫酸-蒽酮溶液，置90℃水浴中加热4min，取出，冷却。同法制备空白对照液。照分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录27页Ⅴ），于620nm处测定吸光度，计算总多糖的含量（表2）。表2正交试验表及结果No.ABCDExtractiverate(%)COTTS(g)COTTP(g)CE1111117.97480.16240.64057.67812122220.77250.20320.8542.47523133323.41590.18590.70567.03184212327.39210.23540.93084.46905223129.29610.23480.89884.93596231226.72090.19750.69470.93037313232.98230.26731.03496.49028321231.97940.24370.87487.36009332127.15630.25521.17191.8289Ⅰ197.18510240.33520275.67910Ⅱ238.63730244.77110229.79100Ⅲ215.96840248.77310248.45790R26.16474.993410.9349Note:COTTS:contentsofthetotalsaponins;COTTP:contentsofthetotalpolysaccharide;CE:comprehensiveevaluation。1.2.6结果分析各因素影响提取工艺的顺序是ACB（表3），即提取次数（A）和提取时间（C）对浸膏收得率、总皂苷含量、总多糖含量有显著影响（P0.05），加水量影响较小，最佳提取条件是A3B1C2，即提取3次，加8倍量水，每次1h。1.2.7重复验证实验为验证最佳提取工艺，按上述条件制备3批样品，结果表明该工艺稳定可靠（表4）。表3方差分析表FactorSSDFMSFPA1030.272515.14184.260.05B37.80218.906.760.05C236.872118.4342.360.05Note:F0.05(2,2)=19.0;F0.0l(2,2)=99.0。表4重复性试验结果BatchNo.ExtractiveRate/%RSD/%COTTS(g)RSD/%COTTP(g)RSD/%129.0510.25860.875227.3922.40.24883.50.8024.3328.6640.24130.8362.讨论王不留行、桔梗、麦冬等5味药主要有效成分为皂苷和多糖类成分，故选择总皂苷和总多糖含量作筛选提取工艺考察指标。在多糖含量测定时中，蒽酮-硫酸试剂要临用新配，否则颜色加深，影响测定结果。加蒽酮-硫酸试剂时，应在冰水浴中慢慢滴加，否则也会影响测定结果。参考文献：[1]彭拓华，等.大孔树脂富集纯化人参总皂苷工艺条件优选[J].中药材，2006，29（4）：392-394.[2]魏晓明，符红，万幼平.硫酸蒽酮比色法测定鹿龟酒中多糖含量[J].中成药，2000，22（5）：380-381.[3]马丽耕.蒽酮-硫酸法测定灵芝多糖含量[J].首都医药，2004，（2）：51.（责任编辑：JaneChen）