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第一章植物组织培养基本理论与操作技术本章主要教学内容一、组织培养实验室的设计与主要设备二、培养基及其配制三、无菌技术四、组织培养植株再生的途径五、植物组织培养中常见问题及解决办法第一节组织培养实验室的设计与主要设备教学目的与要求（1）掌握组培室的功能布局与设计要求（2）掌握组培常用的实验仪器设备及使用（3）掌握调控组培的主要环境条件组织培养实验室场所的选择植物组织培养需要一个无菌的环境。因此，选择场所时应远离闹市和主干道，周围无污染源，阳光充足、交通便利。准备室配药室贮藏室接种室培养室组培实验室炼苗室一、组培室的基本组成培养室培养室培养室门厅走廊准备室缓冲室接种室洗涤室配药室案例1：实验室平面设计功能：用于玻璃器具的清洗、干燥和贮存；接种材料冲洗；培养基配制、分装、高压灭菌等。设计要求：通风、洁净、易清洗，水、电来源方便。配备：水槽；塑料筐；干燥箱；晾干架；纯水机、高压锅等。1、准备室面积：根据规模，一般40m2。电炉纯水发生器蒸气压力灭菌器酸度计磁力搅拌器恒温水浴锅冰箱功能：培养基母液的配制、药品贮藏等。配备：工作台；冰箱、各类天平、酸度计、药品橱、移液器、各类玻璃容器等。2、配药室要求：干燥、洁净。药品橱工作台电子天平电光分析天平托盘天平3、贮藏室•功能：贮藏各种上玻璃器皿、日用品等。•结构：明亮、干燥。•面积：根据需要而定4、接种室•功能：用于植物材料的无菌接种、培养物的转移、试管苗的继代等。•结构：缓冲室+接种室•面积：尽量越小越好，一般10－20m2配备：空气交换机、超净工作台、搁架、医用平车、解剖镜、紫外灯、酒精灯、各种接种器械等。设计要求:地面平坦无缝、顶棚及墙壁密闭光滑，干爽安静，清洁明亮，配置横拉门，门窗严密。单人单面水平送风双人单面水平送风干燥箱人工气候箱显微镜5.培养室配备：培养架、照明设备、定时器、空调器、干湿温度计、换气扇等。面积：根据规模而定功能：人工条件下培养接种物及试管苗的场所。设计要求：恒温、恒湿，地面平坦、清洁明亮。培养室5、炼苗室功能：提供组培苗炼苗的环境。要求：能够控温调湿、控光通风。面积：根据规模来定。二、设备和器材1、玻璃器皿2、器械用具3、仪器设备（一）对玻璃器皿要求：1、耐腐蚀；2、耐高温、高压；3、透明度好；4、便于接种。1、玻璃器皿三角瓶：100、250、500ml或用250ml罐头瓶代替。培养皿：6、9、12cm试管：18×180mm或20×200mm量筒：10、50、100、500、1000ml烧杯：50、100、200、500、1000ml容量瓶：100、200、500、1000ml试剂瓶（棕色）：50、100、250、500、1000ml移液管：0.2、0.5、1.0、2、5、10ml微量移液器玻璃棒、酒精灯（二）玻璃器皿的规格：(1)、镊子类：接种、转移材料或分离茎尖用，以100ml三角瓶为培养瓶，可用20cm长。2、器械用具2、器械用具(2)、剪刀类：医用剪刀，剪切割外植体或继代培养时分离材料。(3)、解剖刀：切割芽、茎段、愈伤组织等，继代时分离材料，也可用于微小外植体的接种等。(4)、解剖针：转移细胞或愈伤组织，微茎尖分离及接种等。2、器械用具(5).其它：周转筐、搪瓷盘、移液管架、玻璃棒、酒精灯、试管架等。细菌过滤器三、培养条件1.一般控制25±2ºC。2.植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20℃；月季25－27℃；番茄28℃。△（一）、温度（二）、光照1.光强★影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。★有的材料愈伤组织的诱导需光或需暗；★光照强，幼苗生长健壮；光照弱，幼苗生长弱小，容易徒长。★不同波长的光对细胞的分裂和器官的分化有影响。2.光质②白光促进小花天竺葵愈伤组织的生长，蓝光则无作用。如：①红光促进杨树愈伤组织的生长,蓝光阻碍其生长;3.光照时间•根据植物生物学特性决定;•光照长短对试管内花的形成有重要影响；•在胡萝卜组织培养中随着日照长度的增加，而促进生长。(三)、湿度1.瓶内的湿度：主要受到培养基含水量和封口膜透性的影响。如培养基过硬，则不利于外植体接触和插入培养基，导致生长迟缓；封口膜过于透气，也会使瓶内湿度下降。2.环境湿度:过低会使培养基丧失大量水分，渗透势升高，影响材料对营养物质的吸收，也会阻碍外植体的生长。一般为70－80%。(三)、湿度1.培养基适宜PH值5.0-6.5，一般为5.6－5.8；可用0.1M的NaOH和HCl溶液进行调整。(四)、pH值2.ｐH值影响培养基的硬度。3.灭菌之前，培养基的ｐH要比标准提高0.2－0.3个单位。PH＞6.5培养基会变硬PH＜5.0培养基不易凝固(五)、气体(必要条件)1.培养瓶内氧气的充足与否与封口材料有关。可用棉塞或特制的封口塑料。通气最好的是棉塞，但棉塞易使培养基干燥，夏季易引起污染。2.培养基内氧气充足与否与培养基的种类和培养方式有关。◆固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。◆液体培养时，可考虑采取振荡培养的方式，以增加通气性。(五)、气体(必要条件)2、２个大气压以上就对生长有阻碍作用，5－６个大气压生长就完全停止，６个大气压细胞就不能生存。(六)、渗透压1、1-2个大气压促进生长。培养基中添加白糖可有效提高培养基的渗透压。实训一在参观完学院的植物组织培养室后，你认为有存在什么问题？如果给你一块空地，请你设计一个合理的组培实验室以及需要配置的仪器设备。？