1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒技术

北京天和瑞生物科技有限公司11200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒技术一、技术背景国内口蹄疫布控形势仍严峻，高效、安全的病毒性疫苗是防止口蹄疫情发生的最有效方法。BHK21细胞是繁殖FMDV的理想宿主，国外普遍采用了2000－5000L反应器悬浮培养BHK21细胞技术生产口蹄疫苗。目前国内主要通过大规模转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫苗，仅一家单位已采用上千升反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗。转瓶培养BHK21细胞生产口蹄疫苗工艺，因为每个转瓶均是独立的细胞培养单元，每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，导致疫苗批间差大，隐性污染引起高内毒素，副反应大等缺点。反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫苗工艺，不仅能提高BHK21细胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，提高病毒滴度，而且工艺规模放大相对容易，管道化操作最大可能避免了污染的发生，能显著提高口蹄疫疫苗的质量。北京天和瑞生物科技有限公司携手北京清大天一生物技术有限公司，已成功开发了BHK21反应器悬浮培养基、120L-650L-1200L反应器悬浮BHK21细胞技术、1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫疫苗工艺等关键技术，为反应器生产口蹄疫疫苗的产业化奠定了扎实的技术基础。二、工艺技术1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺：利用BHK21悬浮培养基从液氮中复苏已适应悬浮培养的BHK21细胞株，种子细胞经摇瓶、5L反应器、120L反应器和650L反应器等逐级放大培养，最后在1200L反应器中悬浮培养BHK21细胞至合适密度，接种口蹄疫病毒种毒，维持一定的溶氧、pH值、温度等工艺参数，适时收获一次性收获培养液,制备成苗。图1表示了反应器悬浮培养BHK21细胞的照片，细胞密度可以达到3×106cells/ml左右以上。图2表示了悬浮培养的BHK21细胞接种口蹄疫病毒14hr北京天和瑞生物科技有限公司2后的BHK21细胞。从反应器中收获上清的口蹄疫病毒抗原量（146S完整病毒粒子）高于转瓶培养工艺。图1反应器中悬浮培养的BHK21细胞图2接种FMDV后14hr的BHK21细胞三、工艺流程复苏悬浮BHK细胞株摇瓶培养BHK细胞5L反应器培养BHK细胞120L反应器培养BHK细胞650L反应器培养BHK细胞1200L反应器培养BHK细胞经BHK细胞繁殖、悬浮适应的口蹄疫种毒收获病毒液制苗口蹄疫病毒种毒库1200L反应器生产口蹄疫病毒北京天和瑞生物科技有限公司3四、项目技术资料1.1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒总结报告2.1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒工艺规程3.5L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程4.120L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程5.650L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程6.1200L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程7.1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒操作规程8.1200L反应器悬浮培养BHK21细胞生产口蹄疫病毒技术要点9.各级反应器细胞培养记录10.1200L反应器口蹄疫病毒培养记录