《食用菌生产技术》实训指导教材

《食用菌生产技术》实训指导教材实训一食用菌形态结构观察一、目的要求观察食用菌菌丝体的生长状态，利用显微镜认识食用菌的营养体和繁殖体的微观结构，利用徒手切片观察食用菌子实体的微观结构，通过对食用菌子实体形态特征的观察，让学生们了解和熟悉各种食用菌子实体的类型和特征，并能根据子实体的外形进行分类。二、实训准备1、材料平菇、香菇、双孢蘑菇、草菇、金针菇、木耳、银耳、猴头菇、灵芝、密环菌、羊肚菌、虫草、茯苓等食用菌子实体或菌核浸浸标本或干标本、鲜标本及部分食用菌的菌丝体，担孢子等。2、仪器工具光学显微镜（100～600倍）、接种针、无菌水滴瓶、染色剂（石炭酸复红或美蓝等）、酒精灯、75%酒精瓶、火柴、载玻片、盖玻片、刀片、培养皿、绘图纸、铅笔等。三、内容和方法步骤（一）菌丝体形态特征观察1、菌丝体宏观形态观察。①观察平菇、草菇、金针菇、木耳、银耳及香灰菌、蘑菇、猴头、灵芝等食用菌的试管斜面菌种或PDA平板上生长的菌落，比较其气生菌丝的生长状态，并观察菌落表面是否产生无性孢子。②观察菌丝体的特殊分化组织：蘑菇菌柄基部的菌丝束；密环菌的菌索；茯苓的菌核；虫草等子囊菌的子座。2、菌丝体微观形态观察。①菌丝水浸片的制作：取一载玻片，滴一滴无菌水于载片中央，用接种针挑取少量平菇菌丝于水滴中，用两根接种针将菌丝拔散。盖上盖玻片，避免气泡产生。②显微观察：将水浸片置于显微镜的载物台上，先用10倍的物镜观察菌丝的分支状态，然后转到40倍物镜下仔细观察菌丝的细胞结构等特征，并辩认有无菌丝锁状联合的痕迹。（二）子实体形态特征观察1、子实体宏观形态观察。仔细观察各种类型的食用菌子实体的外部形态特征，并比较各种子实体的主要区别，特别注意菌盖、菌柄、菌褶（或菌孔、菌刺）、菌环、菌托的特征，并对之进行比较、分类。2、子实体微观形态观察。①菌褶切片观察：取一片平菇菌褶置于左手，右手持刀片，横切菌褶若干薄片漂浮于培养皿的水中，用接种针先取最薄的一片制作水浸片，显微观察平菇担子及担孢子的形态特征。②有性、无性孢子的观察：灵芝担孢子水浸片观察；羊肚菌子囊及子囊孢子水浸片观察；草菇厚垣孢子水浸片观察；银耳芽孢子水浸片观察（以上各类孢子的观察可用标本片代替）。四、作业1、描述菌丝体的生长状态，并画出所观察菌丝、无性孢子、担子及担孢子的形态结构图。2、列表说明所观察各种类型的食用菌子实体的形态特征，如：伞状、头状、耳状、花絮状、肾状、扇状、蛋形、钟形等。3、绘制一种食用菌子实体的形态图，用绘图笔或钢笔（黑）绘制生物图，要求图形真实、准确、自然，画面整洁。实训二食用菌母种培养基的配制一、目的要求了解高压蒸汽灭菌锅的构造，了解食用菌母种培养基的配方，熟悉高压蒸汽灭菌锅的使用方法，掌握母种培养基（PDA或PSA）的配制方法二、实训准备1、配制培养基材料马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、水等。2、仪器用具高压蒸汽灭菌锅（手提式或立式）、可调式电炉、铝锅（20cm）、汤勺、切刀、切板、量杯、纱片、漏斗（带胶管和玻璃管）、止水夹、漏斗架、试管（18mm×180mm或20mm×200mm）、1cm厚的长形木条（摆放斜面时垫试管用）、棉花（未脱脂）、捆扎绳、标签、天平等。三、内容和方法步骤（一）母种培养基（PDA或PSA）配方马铃薯200g，葡萄糖（或蔗糖）20g，琼脂15～20g，水1000ml，pH自然。（二）母种培养基配制1、熬制。先将马铃薯洗净，挖芽去皮，准确称取200g，然后将马铃薯切成玉米大小的颗粒或薄片。用量杯量取1000～1200ml水于铝锅内煮马铃薯，待水沸后计时20～25min，当马铃薯酥而不烂时，用双层纱布进行过滤于量杯中，洗净铝锅滤渣，将滤液到回锅中继续以文火加热，加入葡萄糖（或蔗糖）和琼脂，待琼脂溶化，不断搅拌，以免糊锅，注意补足水量。2、分装。将熬面的培养基保持文火，趁热分装。用勺将培养基加入漏斗中，左手握2～5支试管，右手持漏斗下面的玻璃管入试管口内，同时放开止水夹，让培养基逐个流入试管内，培养基高度约为试管长度的1/6～1/5，约10～15ml，注意避免将培养基沾于试管口内外。分装后的试管，在培养基凝固前必须立放。3、制棉塞。用叠放式将未脱脂棉做成棉球，塞入试管口，管口内棉塞底部要求光滑，棉塞侧面要求无褶皱，棉塞长度的2/3在管口内，1/3在管口外。棉塞的松紧以手提棉塞轻晃试管不滑出为度。捆把。以10支试管为一捆，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。（三）培养基的灭菌1、手提式高压灭菌锅的构造。锅体、提把、压力表、安全阀、排气阀、灭菌锅腔、筛架、锅盖、胶垫圈、紧固螺栓等。2、高压灭菌锅的使用方法。加水→灭菌物入锅→上盖→对称、均匀地扭紧螺栓→加热升温→压力至0.5kg/cm2时，打开排气阀排除锅内冷空气，压力降至0，排气阀有大量热蒸汽冲出时，关闭排气阀→继续升温，压力升至1kg/cm2，温度过到121℃时，开始调火稳压25～30min→灭火，自然降压至压力为0.5kg/cm2时，可慢慢打开排气阀徐徐降压至0（若降压太快，试管中的培养基易沸腾浸湿棉塞）→锅盖半开，让锅内多余蒸汽逸出，锅内的余热烘干棉塞→开盖，取物→摆斜面→斜面试管上应覆盖洁净和厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。四、作业1、试述母种培养基的配制过程。培养基分装的要点2、怎样正确使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌？实训三食用菌菌种分离技术一、目的要求了解纯菌种性状的优劣对食用菌产量高低和品质好坏影响的重要性，掌握食用菌母种制作技术，学会母种的分离方法。二、实训准备斜面培养基、三角瓶培养基、平菇种菇、接种箱、酒精灯、接种针、接种铲、镊子、剪刀或刀片、金属丝等。三、内容和方法步骤（一）种菇的选择从产量高、长势好、适应性强、无杂菌、无病虫害的群体中选择菇形正、朵大、菌盖厚实、生长健壮、八成熟的子实体作为分离材料。种菇应保持菇体洁净备用。（二）母种分离方法1、组织分离。此法是生产中最常用的方法，它操作简便，菌丝萌发快，分离所得的菌种遗传性较稳定，在培养基条件适宜的情况下，能保持原有菇种的优良性状和特性。操作方法：在分离前用75%的酒精棉球擦菇体表面进行消毒，在接种箱内将菌菇撕开，用消毒镊子或剪刀或刀片在菌盖与菌柄的交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上棉塞。将分离的试管放在25%恒温箱内培养7～8d，即可进行转管扩大繁殖成母种。2、孢子分离。此法是将子实体成熟后散出的孢子收集在培养基上萌发并长成菌丝而获得的纯菌种。本实训中练习一种成功率较高的方法：三角瓶钩悬法：取即将弹射孢子的鲜平菇，在菌盖边缘向里2/5处切取带有菌褶的菌盖组织一小块，金属丝钩悬持菌块于底部有培养基的三角瓶内。注意菌块不要碰瓶壁或培养基。菌褶朝下，使孢子能散落在培养基上。将三角瓶放在25℃条件下，经1～2d在培养基上即可见到白雾状的孢子印，此时以无菌操作，把悬挂于瓶内的菌块取出，再将三角瓶移入恒温箱只培养。经2～3d,培养基表面就会出现许多乳白色的菌落。四、作业1、试比较组织分离和孢子分离的优缺点。2、组织分离和孢子分离的技术要点。实训五食用菌原种和栽培种制作一、目的要求了解原种及栽培种常用培养基的种类，掌握食用菌原种及栽培种培养基的配制方法及消毒灭菌方法，学会菌种的接种技术。二、实训准备1、材料棉籽壳、杂木屑、酒糟、麸皮、蔗糖、石膏粉、过磷酸钙。2、器具菌种瓶、棉塞、打孔棒、标签、立式高压蒸汽灭菌锅、接种箱、接种用具等。三、内容和方法步骤原种的生产是由母种移接入原种培养基，经培养而成，原种也称二级种。栽培种是由原种移接入栽培种培养基，经培养而成，故称三级种。二者生产程序是相同的。即培养基的配制→装瓶→灭菌→接种→适温培养。（一）培养基的配制1、常用培养基有以下几种配方：（1）谷粒培养基。谷粒99%，石膏粉1%，过磷酸钙1%。制作时先将谷粒洗净，浸泡4～8h,放入锅内水煮20min，使谷粒吸足水分，但不煮开花为度。然后捞出，稍冷后拌入1%石膏粉和1%过磷酸钙，即可装瓶。（2）棉籽壳80%，杂木屑17%，蔗糖1%，石膏粉1%，过磷酸钙1%。按比例称取原料，将棉籽壳用2%石灰水浸泡2～6h，捞起滤水后，将各种原料混匀；边加水边检查培养料的含水量，直至用手握培养料时，指缝略有水渗出不滴为度，培养料不宜过湿或过干。（3）木屑77%，麸皮20%，蔗糖1%，石膏粉1%，过磷酸钙1%。（4）酒糟63%，麸皮15%，木屑20%，石膏粉1%，过磷酸钙1%。以上培养料拌料时，应掌握“均匀、湿透”的原则，其含水量调至60%～65%为宜。手测方法如前。配方（1）多用于原种制作，谷粒是指麦粒、稻谷粒、玉米粒等总称；配方（2）、（3）、（4）多用于栽培种制作。2、培养基的配制：（1）称料：先称主料，后称辅料（2）拌料：先将难溶于水的辅料与主料拌均，再将易溶于水的辅料溶解于水中制成母液，每次加水均从母液桶中取水，边加水边搅拌，直至将培养料的含水量调至65%为宜。（3）调节PH值：（4）装瓶培养料拌好后就可装瓶，边装边振动，料装至瓶肩处，再用手指或工具将料面压紧压平，用打孔棒从中由上至下打一通气孔。然后清洁瓶口内外，塞上棉塞。3、灭菌：若采用高压蒸汽灭菌，则标准为1.5kg/cm2,128℃,1～2h。如果采用常压蒸汽灭菌，则标准为100℃下8～10h。（三）接种将已灭菌的培养料瓶移入事先消毒过的接种箱内，母种管、用具及手要进行消毒。等培养料温降至35℃左右时，按无菌操作方法进行接种，用接种铲取菌种一块放入种瓶内培养料的孔隙边，并使菌丝紧贴在培养料上，塞上棉签，贴上标签，注明菌种名称和接种日期。（四）适温培养接种后，将种瓶置于适温下培养。菌种并行初放时，应直立于床架上，当菌丝吃料后，可将其横放。经常检查，淘汰污染种瓶。一般25～35h左右菌丝可长满菌种瓶。培养成的原种和栽培种，菌丝浓白健壮，菌丝紧贴瓶壁不干缩，生命力强，具有一定清香味，无任何杂菌污染。四、作业1、原种和栽培种培养基的制作2、原种和栽培种的接种实训六食用菌菌种保藏技术一、目的要求了解食用菌菌种容易变异和退化的特性，掌握利用低温、干燥、缺氧进行菌种保藏的原理，学会怎样保持食用菌菌种的生活力及优良性状的主要方法。二、实训准备平菇母种试管、蘑菇或灵芝八成熟的子实体、木屑麸皮培养基（装入菌种瓶，经1.5kg/cm2高压蒸汽灭菌1h后备用）、液体石蜡（装入三角瓶中，经高蒸汽灭菌后，40℃干燥箱烘干水分后备用）、滤纸条（装入培养皿中经1kg/cm2高压蒸汽灭菌后备用）、灭菌插菇铁丝架、无菌空试管（带棉塞与变色硅胶）、接种箱、接种用具、无菌镊子、固体石蜡、坩埚、酒精灯、试管架或铁丝筐、塑料薄膜、牛皮纸、捆扎绳、标签、普通冰箱等。三、内容和方法步骤先将接种箱和操作人手的表面进行消毒灭菌，分别在无菌条件下操作如下：1、斜低温保藏法利用增加了氮源和K2HPO4的保种培养基移接平菇母种，待菌丝长至斜面2/3时，选择菌丝生长粗壮整齐的母种试管，将试管口的棉塞用剪刀剪平。利用酒精灯在坩埚里溶化固体石蜡，用以密封试管口，在外包扎一层塑料薄膜。最后将试管斜面朝下，置入4℃冰箱里保存。2、木屑培养基保藏法提前两周，将平菇母种移接入已灭菌的木屑培养基的菌种瓶内，待菌丝长满培养基1/2时，剪平瓶口棉塞，用蜡密封，包扎牛皮纸后置于4℃冰箱内保藏。3、矿物油保藏法选择优良的平菇母种试管放进已消毒的接种箱内，在无菌条件下操作。将种管竖立于试管架或铁丝筐内，将已灭菌的液体石蜡注入种管内，淹没菌苔，液体石蜡的量高出斜面尖端1cm为宜。最后用牛皮纸包扎试管口，立放，闭光保藏。4、孢子滤纸保藏法将蘑菇或灵芝置入已消毒的接种箱里的插菇铁丝架上，插菇铁丝架立于装有灭菌滤纸条的培养皿内，待担孢子弹射在滤纸条上之后，用无菌镊子将载有担孢子的滤纸条移入灭菌的空试管内，塞入棉塞剪平，用石蜡融封，干燥、低温保藏。四、作业1、液体石蜡保藏食用菌菌种的技术。2、比较各种菌种保藏法的优缺点。实训七平菇生料栽培技术一、目的要求学会生料栽培食用菌的基本技术及管理方法二、实训准备1、原料稻草、麸皮、木屑、石膏粉、地磷酸钙、