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食用菌栽培技术滁州职业技术学院生化工程系汤士勇:tangshiyong_tsy@163.com:570424862第二章食用菌菌种生产菌种生产类型及生产流程菌种生产的基本设备培养基的配制消毒与灭菌接种与培养菌种的分离方法菌种的保藏与复壮液体菌种生产本章主要内容食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程菌种：是指以适宜的营养培养基为载体进行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝体的联合体。或者说是指人工培养，并供进一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。菌种的生产类型：食用菌菌种是通过三级逐步扩大培养的方式来生产的，在生产上通常把菌种分为一级菌种（母种）、二级菌种（原种）和三级菌种（栽培种）。食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程菌种一级菌种二级菌种三级菌种从孢子分离培养或组织分离培养获得的纯菌丝体。由一级菌种扩大繁殖成的菌丝体。由二级菌种扩大繁殖成的菌丝体，是直接用于栽培的菌种。食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程母种食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程原种食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程栽培种食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程三级菌种之间的关系菌种类型制种容器培养基菌株来源用途要求一级菌种（母种、试管种）试管PDA、PSA种菇（孢子或菌肉组织）扩制二级种菌种保藏纯度高，质量好，绝对无杂菌二级菌种（原种）菌种瓶固体培养基一级菌种扩制三级菌种纯度高，质量好，无杂菌三级菌种（栽培种）罐头瓶、菌种袋固体培养基二级菌种用于栽培高纯度，高质量，无杂菌食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程菌种生产流程：种菇一级菌种二级菌种三级菌种栽培食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程菌种生产工艺流程：三级种培养基制备高压或常压灭菌接种三级菌种栽培培养斜面一级种培养基制备高压灭菌接种培养筛选提纯原始种中试后确定一级种保存孢子或组织分离一级种转管、扩大菌种瓶二级种培养基制备高压灭菌接种培养二级菌种罐头瓶菌种袋食用菌菌种生产一、菌种的生产类型及生产流程菌种制作的四个基本环节配制培养基灭菌接种培养食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备菌种厂的布局仓库配料室灭菌室接种室培养室办公室栽培棚门口晒料场食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备接种设备接种室缓冲间：2~3m2接种间：5~6m2面积7~9m2高2.2~2.5m要求6个面平滑两门错开、平拉式顶装紫外灯食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备接种设备接种室清洁→物品放缓冲间→消毒→移物至接种间→喷消毒液→10min后接种→消毒液清洁使用食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备接种设备接种室食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备接种箱观察窗紫外灯操作孔食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备超净工作台（净化工作台）食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备超净工作台（净化工作台）双人单人食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备接种工具要求：前端为导热性好的金属材料枪匙钩铲镊耙针环接种食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备培养设备培养室：培养大量菌种的恒温房要求光线暗；密闭好、通风性强；能升温、降温（空调机）；有培养架食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备培养室：培养大量菌种的恒温房食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备培养箱培养少量菌种的恒温电器（20~40℃）食用菌菌种生产二、菌种生产的基本设备灭菌设备手提式高压灭菌锅高压锅外锅：装水内锅：装物锅盖安全阀排气阀压力表食用菌菌种生产三、培养基的配制培养基概念：采用人工的方法，按照一定比例配制各种营养物质，以供给食用菌生长繁殖的基质。要求：含有该菌生长发育所需要的营养物质；水分、pH适宜；必须经过严格的灭菌，保持无菌状态。食用菌菌种生产三、培养基的配制培养基种类类型天然：天然有机物合成：已知成分的化学药品半合成：原料来源状态液体：营养液固体固体：天然固体原料固化：加1.5%~2%琼脂表面形状斜面培养基平板培养基食用菌菌种生产三、培养基的配制培养基成分：水分碳源：单糖、双糖、多糖氮源：有机氮（氨基酸、蛋白质、尿素）、铵态氮（硫酸铵）无机盐：磷、钾、钙、镁、硫等。磷酸氢二钾对pH变化具有缓冲作用生长素：B族维生素凝固剂：琼脂食用菌菌种生产三、培养基的配制粉状条状属天然植物多糖融点96℃以上凝点40℃以下冷水中不溶透明度好、粘着力强不被微生物分解利用琼脂食用菌菌种生产三、培养基的配制食用菌菌种生产三、培养基的配制母种培养基PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。PDA培养基PSA培养基马铃薯（去皮）200g马铃薯（去皮）200g葡萄糖20g蔗糖20g琼脂18～20g琼脂18～20g水1000ml水1000ml食用菌菌种生产三、培养基的配制母种培养基配制过程煮沸20min，取定量滤液制马铃薯滤液滤液沸时加入，融后加余料融化琼脂调节pH值勿污管口，控制装量分装试管准备灭菌包扎成捆1%NaOH或HCl食用菌菌种生产三、培养基的配制母种培养基配制过程食用菌菌种生产三、培养基的配制原种、栽培种培养基棉籽壳培养基主料棉籽壳87，麦麸10辅料白糖1，石灰1，过磷酸钙1棉壳、麦麸干混余料溶于水后浇入主料清水翻拌至含水量配制食用菌菌种生产三、培养基的配制原种、栽培种培养基谷粒培养基主料麦粒、玉米粒等98.5%辅料石膏粉1%,碳酸钙0.5%调pH与分装pH：一般为8.0左右原种培养基装大口瓶栽培种培养基装菌种袋颗粒洗净，1%石灰水泡胀文火煮沸15~20min晾至无明水后拌入余料配制食用菌菌种生产四、消毒与灭菌基本概念杀死一切微生物，包括芽孢。灭菌分为杀菌：菌体尚存溶菌：菌体消失消毒：只杀死病原菌，未伤及芽孢防腐：暂时抑制微生物生长除菌：用冲洗、过滤等法，除去微生物食用菌菌种生产四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法热力灭菌（一）原理高温使菌体蛋白质、核酸、酶等凝固或变性失活。食用菌菌种生产四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法热力灭菌（二）方法湿热灭菌干热灭菌食用菌菌种生产四、消毒与灭菌干热灭菌热源火焰及热空气特点简便、快速、范围有限方法小的金属、玻璃器皿酒精灯烧烘箱烤大的玻璃、金属器皿食用菌菌种生产四、消毒与灭菌食用菌菌种生产四、消毒与灭菌器皿包装→160℃~170℃2h干燥箱使用注意70℃以下开箱取物勿超180℃随用随开包食用菌菌种生产四、消毒与灭菌湿热灭菌热源热蒸气或热水特点范围广、温度低、效果好、时间短方法高压蒸汽灭菌常压蒸汽灭菌巴氏消毒食用菌菌种生产四、消毒与灭菌蛋白质凝固点与其含水量的关系蛋白质含水量(%)凝固温度(℃)502518605674~8080~90145160~170热蒸气穿透力大蛋白质凝固点随其含水量的增加而降低食用菌菌种生产四、消毒与灭菌干热灭菌与湿热灭菌穿透力的比较加热方式传导介质温度(℃)加热时间（h）透过布层温度（℃）结果20层40层100层干热空气130~1404867270以下灭菌不完全湿热饱和蒸汽105.3310110l10l灭菌完全食用菌菌种生产四、消毒与灭菌1.高压蒸气灭菌概念利用高压产生的高蒸汽温度杀灭微生物的方法原理水沸点随热蒸汽压力的增加而升高密闭锅蒸气多压力高沸点高食用菌菌种生产四、消毒与灭菌步骤：装锅→加热排气→升压→保压灭菌→降压出锅关键：排净冷空气注意灭菌时间和压力因物而异升降压力要稳灭菌时间从保压时算起压力降至“0”才能开盖使用食用菌菌种生产四、消毒与灭菌食用菌菌种生产四、消毒与灭菌排气食用菌菌种生产四、消毒与灭菌纯蒸气压力与温度的关系1kg/cm2=0.098Mpa(兆帕）=98Kpa（千帕）食用菌菌种生产四、消毒与灭菌2.常压蒸气灭菌概念利用常压产生的100℃蒸汽温度进行灭菌的方法特点设备简，成本低，灭温低，时间长用法一次性灭菌（100℃，10余h)尽快达到100℃达到100℃时开始计时灭菌中勿降温，勿干锅食用菌菌种生产四、消毒与灭菌1.常压蒸气灭菌食用菌菌种生产四、消毒与灭菌3.巴氏消毒概念利用低于100℃的温度杀灭有害微生物的方法培养料堆积发酵料温60℃~70℃杀死有害微生物方法食用菌菌种生产四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌概念利用电子射过水银气体产生的紫外线而杀菌的方法杀菌机理直接：使蛋白质、酶等变性失活间接：空气中产生臭氧或过氧化氢使用有效距离：1.5~2.0m理想波长：265nm30w紫外灯照30min→避光30min食用菌菌种生产四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌便携式食用菌菌种生产四、消毒与灭菌物理消毒灭菌法紫外线灭菌透力很弱定期更换灯管只起辅助作用伤眼睛和皮肤特点食用菌菌种生产四、消毒与灭菌化学消毒灭菌法利用化学药剂杀灭或抑制微生物的方法概念抑菌剂消毒剂灭菌剂浓度液态：喷雾、浸泡、洗刷等气态：加热、焚烧、氧化等状态划分食用菌菌种生产四、消毒与灭菌气雾消毒灭菌法（一）要求密闭条件下保持一定时间（二）种类甲醛气雾盒食用菌菌种生产四、消毒与灭菌气雾消毒灭菌法机理：结合蛋白质氨基，使其变性。喷：5%熏：10ml/m3+1/2KMnO4用法1.甲醛有刺激性和腐蚀性食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法固体或液体药品水药液（多现配现用）概念种类氧化剂熟石灰表面活性剂乙醇酚类新洁尔灭食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法（一）氧化剂氧化菌体蛋白质的活性基团，使其变性。机理种类高锰酸钾过氧化氢漂白粉过氧乙酸食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法1.高锰酸钾紫色针状结晶0.1%~0.2%浸泡手、器具等。食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法2.过氧化氢无色液体，属环保型消毒剂3%皮肤、伤口消毒6％浸泡器皿30min食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法3.漂白粉2%~5%浓度洗刷、喷雾、浸泡湿处可干撒作用约30min使用注意原品密封随配随用对衣物有退色和腐蚀性食用菌菌种生产四、消毒与灭菌4.过氧乙酸无色至微黄色液体，有刺激性、腐蚀性、挥发性。1.5%熏蒸7ml/m30.2%洗手0.5%浸泡0.5%喷雾使用食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法（二）表面活性剂脱水剂脂溶剂蛋白质变性剂1.乙醇70％~75％效果最好皮肤、器皿擦拭或浸泡浓度高浓度效果差无水的无杀菌作用食用菌菌种生产四、消毒与灭菌3.新洁尔灭0.25%消毒皮肤、浸泡器具0.5%喷雾2.酚类石炭酸：3%~5%浸泡或喷雾来苏尔刺激性小效力比苯酚强4倍3%~5%喷雾、擦洗2%消毒手食用菌菌种生产四、消毒与灭菌液体消毒灭菌法（三）重金属盐类1、氯化汞（升汞）：常用浓度0.1%~0.2%，主要用于食用菌菌种分离2、硝酸银：0.1%~1.0%3、硫酸铜：常配制波尔多液食用菌菌种生产五、接种与培养母种的接种与培养接种（转管）：过程接种环取绿豆粒大母种移入新斜面中部注意种块勿太大原老种块勿再接入传代次数勿太多食用菌菌种生产五、接种与培养培养：接种后的试管放入温箱内，于25℃左右的温度条件下培养。3d后检查菌丝生长情况及有无杂菌，培养7~15d母种菌丝即可长好。食用菌菌种生产五、接种与培养原种的接种与培养接种：过程用接种耙取蚕豆大母种放于瓶中料面上食用菌菌种生产五、接种与培养培养：前3-5d内直立放置，当菌丝吃料后倒卧叠放，并适时转动，这样可以保证水分分布均匀，使菌丝生长一致。定期检查有无杂菌污染。原种应在3个月内使用。食用菌菌种生产五、接种与培养栽培种的接种与培养接种：过程用接种匙（镊、铲）取枣大原种放于袋的两端或瓶中料面上表面老菌丝及老种块勿接入食用菌菌种生产五、接种与培养培养：30-40d后栽培菌种即可长满菌丝，供栽培使用。食用菌菌种生产五、接种与培养菌种质量鉴定母种质量鉴定：1、形态（外观）：菌丝白、整齐、粗壮、有弹性、萌发快等外观好差丝干燥、收缩、自溶产生红褐色液体等食用菌菌种生产五、接种与培养退化母种好母种食用菌菌种生产五、接种与培养2、长势：将菌种接入合适的培养基，在适宜的温度条件下培养，若菌丝