上皮跨膜电阻仪EVOM使用手册

使用手册目录手册说明1简介1快速参考指南2电阻测量2电压测量2产品概述3配置清单3启封3调试3校准电阻仪3STX2电极4仪表4设备诊断5测试EVOM2仪表5电压测量前的电极调整5操作说明7设备维护11电极11抛光/清洗STX2电极11STX2电极消毒12典型消毒方案12电极储存12EVOM2充电器及电池13电池充电13附件16故障诊断18EVOM2仪表18STX2电极18断开与记录仪的链接进行诊断19规格22附录A:电阻计算23电阻23插入“blank”电阻23单位面积电阻23附录B:直径24mm(6孔)插入皿和STX电极25附录C:精度及可重复性性能提升26索引27符合说明29质量保证30退换货30手册说明本手册中的以下标志:小心！操作可能导致仪器损坏。请仔细阅读相关说明警告！操作可能导致人身伤害或者威胁人身安全。请仔细阅读相关说明。注释或提示包含帮助信息。简介EVOM是第一代专门测量常规组织培养跨上皮电阻的设备。EVOM2是其新一代产品，新的设计更易于操作。EVOM2不仅可以定量测量细胞单层的健康，而且可以定量测量细胞汇合。独创的电路及STX2电极探测细胞单层的汇合。当结合使用WPI的endohm腔室，EVOM2还可以用来更精确地测量跨内皮电阻。EVOM2产生交流电流，这样可以避免由直流电流产生的电极金属沉积和对组织的副作用，另外，阻抗的测量不受膜电容和膜电压的影响。EVOM2内置可充电的镍-氢电池，电流为2200毫安时。电池由外源电池充电器充电，完全充满电后可以使用8小时。当电池电量低于正常工作水平时，仪器会自动关闭。当插入交流电源时要使仪器安全工作，WPI建议在测量时将仪器与充电器断开。之所以这样做，是为了提供最大的电子隔离以避免干扰，同时降低噪音以确保读数的精准。关于TEER自动测量，请考虑WPI’sREMS自动进样器(WPI#REMS),它包括机械取样器，数据获取板，底座，基于windows的软件和24孔或者96孔用电极。快速参考指南关于使用EVOM2具体测量步骤请参阅第7页”操作说明”电阻测量1.将EVOM2与充电器断开并且打开电源(I)2.将功能开关调至OHMs3.连接电极.4.测量.电压测量1.将电极连接至EVOM22.关闭电源，平衡电极注意：电极必须浸入在溶液中进行平衡。3.将EVOM2与充电器断开并且打开电源(I)。.4.将功能开关调至MILLIVOLTS。5.测量安装校准电阻器图1为1000电阻器（WPI#91750）请阅读以下EVOM2检测说明STX2电极STX2电极（如图2）只能用于电阻测量，可以直接从干燥的储存环境拿来使用而不需要预处理。STX2电极由一对宽4毫米厚1毫米的电极组成。每个电极包括一个外电极和一个内电极。（第8页图4）外电极是小的银板，用来传递样品膜上的电流，它们被称为电流电极。内电极是小的银/氯化银成分构成的电压传感器，它们被称为电压电极。仪表在利用一个螺丝起子（需自购）校准RADJ螺口之后，EVOM2就可以使用了。注意：要延长仪器的使用寿命，请勿长时间将仪器置于阳光下，否则屏幕会变黑导致无法读数。1.LCD显示屏2.电源开关3.功能开关4.模拟输出5.RADJ校准6.输入7.充电接口Fig.3—EVOM2meter①数字液晶显示屏：数字液晶显示屏上可以显示4位半数值，在测量电压时，它显示两个电极之间电势差，以毫伏表示最高999.9毫伏；在测量电阻时，它显示两电极之间的阻抗即欧姆。尽管仪器可以显示13000，但额定精度只到②电源开关I/O:棒状开关可以将仪器打开（I）或者关闭（O）③功能开关(Ohms/Millivolts):调拨到Ohms档,仪器处于电阻测量模式；调拨到Millivolts档,仪器则处于电压测量模式.④模拟输出:标准BNC连接允许将模拟数据输出到记录仪器.⑤RADJ校准旋钮:将1000电阻器接入到输入接口时，在电阻测量模式下，旋钮可以用来校准仪器显示到1000的量程.⑥输入:将测试电阻器、STX2、STX3或者Endohm腔室的电话线插头（RJ-11）插入到该口以连接到测量仪器.⑦充电接口:接入充电器的插头，并且将充电器的另一头接电源插座可以为EVOM2电池充电。但在充电时请勿测量电阻或者电压.设备诊断建议第一次使用EVOM2时先对设备进行测试，并且在后续要进行周期性的检查。如果担心仪器或者电极不能正常工作，可以参考以下的内容来判断EVOM2的工作状态：测试EVOM2仪表1.将测试电阻器的RJ-11插头插入仪器的输入接口2.将功能开关置于欧姆档3.将EVOM2与充电器断开并打开电源。仪器将显示1000如果不是，用螺丝起子调节R-ADJ旋钮直到仪器显示1000.调节电极进行电压测量1.根据第7页“操作说明2-准备电极”操作提示平衡电极.注意：在测量电压前，必须先将电极浸入溶液中至少12小时进行平衡.2.将电极头部浸入到实验用培养基或者0.1-0.15M的KCl或者NaCl电解质溶液中.3.将功能开关置于毫伏.4.将EVOM2与充电器断开,并打开电源(I).注意:在一段时期内多次电压测量后会产生电压漂移.5.当仪器显示读数为0时，电极可以用来测量电压,如果仪器读数不为0，参考“故障诊断”.操作说明EVOM2用来测量电阻时，电极在使用前不需要被平衡或者预处理。如果测量结果出现不一致的情况，可以对设备进行调整来补偿。测量阻抗或者电压时，请遵循以下步骤:1.将EVOM2与充电器断开.2.电极与仪器相连，将RJ插头接入到输入接口。.3.准备STX2电极.A.电极预处理.测量电阻时：不需要进行任何预处理，可以直接从干储存环境中取出使用。测量电压时：电极使用前则需要平衡。为了确保电压稳定性和较低的电极间电势差，关闭EVOM2电源（O），并且在电极连接到EVOM2时，将电极浸入到电解液中(0.1–0.15MKCl)。当STX2电压电极连接到设备且关闭电源时，在内部会形成短路。当电压电极回路短路几小时后，电极间的不对称电势差就会减小，内部电极直流电势差只有几毫伏甚至更少，同时十分稳定，表1列出了平衡电极所需要的时间。表1:STX2电极平衡时间电极所处环境达到平衡的时间在干燥环境24小时在溶液中2小时B.如果希望消毒的话，可以参阅操作说明中的“STX2消毒”4.将电极置于样杯中.STX2电极设计用来测量组织培养孔中表皮细胞的膜电压和电阻。由于电极之间的长度有差异，允许外部长的电极接触到含有外部培养基盘子底部，这样可以防止内部短的电极接触组织培养杯的底部。(图4).这种结构确保电极和细胞层之间的合适位置。另外，长电极每次都接触到容器底部，大大提高了重复测量的准确性。将电极置于溶液中时，头部刚好接触到容器的底部而不会使电极变形。见图5。备注：电极浸入角度不正确（图6）或者浸入深度不够（图7）会影响到阻抗测量.注意:要对同一个样品杯中获得可复制性的结果，电极位置必须保持不变。要提高可重复性结果和测量的稳定性，在测量过程中必须保证电极的稳定性。当心:当把电极从一个样杯移动到另外一个量杯时，最好不要用蒸馏水冲洗银/氯化银电极。如果使用蒸馏水冲洗银/氯化银电极，在从一个样杯移动到另外一个量杯时，会需要几分钟时间进行复位，而在这个过程中会出现电压几个毫伏的漂移。如果必须要清洗以避免将一种样本带入到另外一个样本中，电极请用实验用培养基冲洗。提示:由CorningCostar生产的Transwell培养皿,通常在过滤杯底部和培养板之间有较大的距离。同时这个距离会由于每批产品的不同而不同，而这个差异可能会导致短的电极接触到细胞层而长的电极也接触到培养杯的底部。这种情况下，Transwell用户可以使用STX3电极代替STX2。STX3电极是一种可调节的电极，或者可以用砂纸将短电极上磨掉0.5毫米。见右图。将600级砂纸放置在桌子边缘，垂直握住电极使短电极接触砂纸而长电极悬空，拖动电极在砂纸上轻轻滑动，直到得到合适的长度。图8—打磨STX2电极警告:只有STX2电极的绿色部分才能被打磨。请勿打磨或损坏电极的任何金属部位5.电阻测量.A.功能开关置于欧姆档.B.断开EVOM2充电器，打开电源开关(I).C.将电解液倒入空的杯子中。(例如,不含细胞的细胞培养皿)D.将电极置于空白培养杯中.这时会显示溶液的电阻读数。这个空白电阻值应该加入到测量的组织培养的跨膜电阻里进行计算。详细内容参见附录A中电阻的计算。注意：空白电阻必须测量，然后从测得的跨膜电阻减去，这样可以得到真实的跨膜电阻。6.电压测量A.将功能开关置于毫伏档B.断开EVOM2充电器，打开电源开关(I).C.将平衡好的电极插入到细胞培养皿，仪器会显示稳定的膜间电压读数。注意：内部短电极将连接到设备地线作为参照电极。如果仪器读数为正，则细胞组织的基底面（黏在插入杯底部）相对于顶层（暴露的部分）的电压为正；相反的，如果读数为负，则细胞组织的底层对顶层的电压为负。注意：操作步骤参考第2页的“快速参考指南”。设备维护备件订购请参考表2中的零件号。其他附件参考13页表3。表2:备件WPI零件号说明STX2电极917501,000电阻器电极电极必须正确清洗、消毒和储存。注意:请勿灼烧电极，否则会引起金属融化，并使电极的质量保证无法保证。清洁STX2电极表面在使用中，电极表面可能被蛋白质或其他物质覆盖。这种堆积或污染，会导致系统效率的降低，引起10-20mV电压误差，或者读数不稳（电阻测量不受影响）。如果需要解决这个问题，可以按以下步骤重新氯化电极或者清洁电极表面。重新氯化–将电极浸入未经稀释的家用漂白水3分钟，浸泡后用清水立即冲洗，尽管这将重新氯化电极表面，但是不能纠正误差。当心！确保只有电极尖端置于漂白液中，不能将漂白液接触电极上部。电极表面抛光--用600级砂纸轻轻打磨STX2的电压电极顶端内侧的银质小球(图9)，轻轻除去银质小球的表层即可。当心：多次重复打磨最终会除去所有的Ag/AgCl小球，如果打磨不再改善电压读数时，则需要更换电极。提示：如果没有600级砂纸，可用橡皮擦代替。对STX2电极消毒STX2电极是未经消毒的。可以用酒精、环氧乙烷、紫外线或者杀菌剂如CidexPlus(WPI#7364)或者Sporicidin.当心：电极不能用高压灭菌器消毒。典型消毒方案在层流净化罩中:1.将电极在CidexPlus(wPI#7364)浸泡15分钟，然后用15秒风干。当心：电极每次在酒精中的浸泡时间不能超过30分钟。在酒精里长时间的浸泡，会破坏电极表面的保护层，从而缩短电极使用寿命。2.用类似实验细胞培养液的消过毒的电解液或者0.1-0.15MKCl或者NaCl溶液冲洗电极。3.现在电极可以用来测量电阻。4.测量电压时，在无菌电解质溶液中平衡电极。提示：电极可以存储在一个UV罩保持无菌状态。注意：当电极暴露在强光或者紫外线中时，电极表面会形成一层黑色氧化膜，通常，氧化膜不会影响电极性能。为了避免氧化膜的行成，应该避光储存。电极存储短期存储（两周以内）：浸泡电极尖端在电解液中。确保电极线缆插头连接到EVOM2设备，以便保证系统内部短路并且保证电极对称性。长期存储（两周以上）：长期存储时，电极要用蒸馏水清洗并且放置在干燥、黑暗处。EVOM2充电器和电池注意:电池充电时确认EVOM2电源开关已关闭。EVOM2充电器接交流电源可以给电池充电。配备的通用电源可在多个国家使用。EVOM2包含有6V2200mAH可充电镍氢电池。电池充电电池可进行500次的充放电，可以在任何时候，且可以进行连续充电。图10–镍氢电池警告：请使用EVOM2充电器。使用其他充电器能会损坏电池。根据使用情况，电池寿命约1-2年。镍氢电池在不使用情况下也会放电，放电速度和温度有关，温度越低，放电速度越低。如果电池长期处于放电状态可能会损坏电池。为防止电池损坏，至少每两个月对电池充电一次。如果EVOM2中的电池失效，可使用备用电池(WPI#91736)。见16页“附件”更换电池：1.使用螺丝起子取下EVOM2外箱上的4个螺丝钉。图11