细菌数量测定---标准平板计数法

细菌数量测定---标准平板计数法一、实训目的1、掌握菌液稀释的方法和步骤。2、掌握浇混接种的操作步骤。3、掌握菌落计数的原理与方法平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即代表原样品中的一个单细胞。二、实训原理统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞。所以平板菌落计数法结果往往偏低。现在常使用菌落形成单位。三、实训仪器和材料1、仪器：恒温培养箱。高压蒸汽灭菌锅，电热套、托盘天平吸量管、烧杯、三角瓶、培养皿、试管、试管架、酒精灯2试剂：大肠杆菌悬液、牛肉膏蛋白胨培养基（营养琼脂培养基），生理盐水、盐酸、氢氧化钠、蒸馏水四、实训步骤（一）培养基配制与灭菌1.生理盐水：180mL/2组→分16支（9mL/支）→加塞包扎灭菌2.营养琼脂培养基：330mL/2组→加热煮沸→溶解→调pH=7.2±0.2→分4个→加塞包扎灭菌(二)仪器包扎（每组用量）培养皿7套1mL吸量管7支，包扎灭菌（三）菌液稀释1、编号（1）无菌平皿7套，分别标记为10-4、10-5、10-6各2套，留一平皿做空白对照。2、标记(2）6支盛9mL生理盐水的灭菌试管一次标记为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6（四）浇混接种1、取样：用3支无菌吸管分别精确吸取10-4、10-5、10-6的的稀释液0.2mL，对号放入编好号的培养皿中。2、倒平板：在上述平皿中倒入熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基约15~20mL，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固后，于37℃培养箱中倒置培养24h。（五）计数取出平皿，观察并计算菌落数。一般选择平皿上长有30~300个菌落的稀释度计算每毫升的菌落数最合适。算出同一稀释度2个平皿上的菌落平均数，并按下列公式计算：活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5检验结果活菌落数/mL=同一稀释度2个平皿上的菌落平均数×稀释倍数×5稀释度10-410-510-6菌落数12平均12平均12平均活菌数/mL