自免肝讲课讲义

自身免疫性肝病血清学检测欧蒙（德国）医学实验诊断股份公司（一）自身免疫性肝病肝脏疾病分类感染性：HAV、HBV、HCV、HDV、HEV、HFV、HGV、CMV、EBV、肝吸虫、阿米巴、包虫…药物和毒物：异烟肼、甲基多巴、双醋酚汀、苯妥英钠…自身免疫性：AIH、PBC、PSC酒精性：大量饮酒肿瘤性：原发性肝癌、继发性肝癌代谢障碍性：肝豆状核变性、α1-抗胰蛋白酶缺乏其它：继发性、重叠综合征、病因不明性…自身免疫性肝病发病情况（欧美）一般认为,AILD好发于欧美白人•AIH：西欧和北美患病率0.1-1.9/10万人占所有慢性肝炎的20%左右•PBC：西方国家患病率为10-20/10万人•PSC：欧美地区患病率至少为2-7/10万人其中70%左右合并有溃疡性结肠炎遗传背景：主要组织相容性复合物（MHC）的易感基因与HLADR2、DR3、DR4、DRw8、DR8基因型相关自身免疫性肝病发病情况（中国）研究资料少：有关AILD的基础研究、流行病学研究及临床研究报道少见↓被认为是一种少见病•原因：#病毒性肝炎发病率占有绝对高的比率，慢性乙肝2000万（2002年底）#AILD诊断标准中的重要因素─血清自身抗体谱检测，开展的很不普及，严重影响诊断、治疗•自身免疫性肝炎(AIH)•原发性胆汁性肝硬化(PBC)•原发性硬化性胆管炎(PSC)•重叠综合症自身免疫性肝病•自身免疫引起的肝细胞损伤•血清转移酶升高•界面肝炎•发病率：10-20例/100,000人口•85%女性自身免疫性肝炎(AIH)•一般肝脏炎性指标升高：CRP、γ球蛋白、转氨酶升高•鉴别诊断:病毒性肝炎、药物、PBC、PSC•特殊病例:重叠AIH/PBC(10%)•自身抗体:ANA,ASMA,anti-LKM-1,anti-LC1,anti-SLA/LP诊断ƒTypeIASMA(抗平滑肌抗体;F-actin)ANA(cellnuclei)ƒTypeIILKM-1(肝肾微粒体;cytochromeP450IID6)LC-1(肝细胞溶质抗原;亚胺甲基转移酶环化脱氨酶)ƒTypeIIISLA/LP(可溶性/肝胰抗原;UGA-丝氨酸-tRNA相关蛋白复合物)自身免疫性肝炎主要靶抗原•方法:IIFT•阳性率:40-90%•靶抗原:多种常见F-actin？•高滴度抗F-actin和ANA提示AIH•与病毒性肝炎相关ratstomachHEp-2primateliverratkidneyASMA大鼠胃:抗平滑肌抗体(ASMA)ƒTypeIASMA(抗平滑肌抗体;F-actin)ANA(cellnuclei)ƒTypeIILKM-1(肝肾微粒体;细胞色素P450IID6)LC-1(肝细胞溶质抗原;亚胺甲基转移酶环化脱氨酶)ƒTypeIIISLA/LP(可溶性/肝胰抗原;UGA-丝氨酸-tRNA相关蛋白复合物)自身免疫性肝炎主要抗原•方法:IIFT,ELISA,Immunoblot•阳性率:2-4%•靶抗原:细胞色素p4502D6•见于丙型肝炎•[更严重]????LKM(ratkidney)LKM(ratliver)LKM-1•方法:IIFT,ELISA,Immunoblot•阳性率:1-2%•靶抗原:FTCD(亚胺甲基转移酶环化脱氨酶)•疾病特异?•与疾病活动性相关?LC-1(liverrat)LC-1ƒTypeIASMA(抗平滑肌抗体;F-actin)ANA(cellnuclei)ƒTypeIILKM-1(肝肾微粒体;cytochromeP450IID6)LC-1(肝细胞溶质抗原;亚胺甲基转移酶环化脱氨酶)ƒTypeIIISLA/LP(可溶性/肝胰抗原;UGA-丝氨酸-tRNA相关蛋白复合物)ƒ自身免疫性肝炎主要靶抗原SLA/LPzcDNA序列确认(Lohse,2000)SLA=LP⇒SLA/LPzUGA-丝氨酸-tRNA相关蛋白复合物(Costa,2000)zAnti-SLA/LP抗原表位:SeranAnti-SLA/LPpositiveAIH,Brazil13217%AIH,Japan307%AIH,Germany10819%AIH,USA14915%AIH(SLA/LPinhibitiontestpositive)2882%AIH(anti-LKM-1positive)180Primarybiliarylivercirrhosis(PBC)3454%Primarysclerosingcholangitis(PSC)100HepatitisBinfection400HepatitisCinfection390Toxicliverdisease140Non-alcoholicsteatohepatitis240Healthyblooddonors2000Anti-SLA/LPELISA：敏感性和特异性autoimmunehepatitisotherliverdiseasesAnti-SLA/LP：高度提示AIH(预测值:100%)Anti-SLA/LP与AIH/PBC重叠综合症Kanzleretal.,DtschMedWschr,2001抗SLA/LP阳性PBC:-重叠综合症的高特异性标志-界定对免疫抑制剂治疗效果良好的病人PBC(n=20)AIH(n=20)AIH/PBCOverlap(n=9)Genderratio(f:m)19:13:12:1AST2xnormal40%95%67%AP1.5xnormal80%25%22%*Elevatedγ-globulins90%95%78%ElevatedIgG25%100%89%*ElevatedIgM95%35%56%HLA-B8,DR3orDR420%90%86%*其它AIH相关抗体LSP(猴肝)LMA(猴肝)•胆管炎性破坏•晚期硬化•12例/100,000人口•75%为女性原发性胆汁性肝硬化(PBC)•一般和肝脏炎性指标升高：CRP、γ球蛋白、转氨酶升高•鉴别诊断:病毒性肝炎、药物、AIH、PSC•特殊病例:重叠AIH/PBC(10%)•自身抗体:AMA,M-ANA(核膜型),MND-ANA(多核点型)•相关抗原:E2M2(AMA),gp210,Nup62(M-ANA),sp100,PML-抗原(MND-ANA)诊断ƒ线粒体(IIFT:大鼠肾)AMA-M2(丙酮酸脱氢酶复合体)ƒ核点型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)Sp100,SUMO1/2,PMLƒ核膜型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)核孔复合体蛋白:gp210,p62Lamin蛋白,Lamin蛋白B受体PBC主要靶抗原胞浆颗粒型（2）：线粒体类型EUROIMMUN抗线粒体抗体(鼠肾)ƒ线粒体(IIFT:大鼠肾)AMA-M2(丙酮酸脱氢酶复合体)ƒ核点型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)Sp100,SUMO1/2,PMLƒ核膜型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)核孔复合体蛋白:gp210,p62Lamin蛋白,Lamin蛋白B受体PBC主要靶抗原EUROIMMUNHEp-2/猴肝:多核点型HEp-2/灵长类肝组织片:着丝点HEp-2cellsLiver(primate)HEp-2/灵长类肝组织片:着丝点+核点PrimateliverHEp-2cellsAnti-Sp100ELISA:敏感度和特异性Panelnanti-Sp100positivePBC17036(21.2%)4*(8.2%)1(0.5%)099.2%AIH49ViralHepatitis200Healthyblooddonors400Specificity649*3SerafromOverlappatientsAnti-Sp100ELISAPBCn=90*positivenegativepositive232IIFTlivermonkey,HEp-2negative461Anti-Sp100ELISA↔IIFT猴肝片,HEp-2相关性比较⇒符合率达93.3%*80of170PBCserashowedinterferingpatternsinIIFTƒ线粒体(IIFT:大鼠肾)AMA-M2(丙酮酸脱氢酶复合体)ƒ核点型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)Sp100,SUMO1/2,PMLƒ核膜型(IIFT:HEp-2细胞,灵长类肝组织片)核孔复合体蛋白:gp210,p62Lamin蛋白,Lamin蛋白B受体PBC主要靶抗原EUROIMMUNHEp-2/猴肝:核膜型gp210p62核外膜核内膜细胞浆细胞核浆ERProteinsRERBA/CBA/CBA/CBA/C核孔复合体LaminB受体LaminBLaminsAandC核孔复合体结构KindlyprovidedbyDrInvernizzi,Milan原发性硬化性胆管炎(PSC)ƒ患病率:4-8/100,000人ƒ发病几率:0.7/100,000人/年ƒ主要发生在年轻人ƒ通常与溃疡性结肠炎相关(50-70%)ƒ甲醛敏感(atypical,x-)pANCA阳性PSC血清学检测系统:ANCA马赛克乙醇固定中性粒细胞甲醛固定中性粒细胞猴肝片HEp-2pANCA(甲醛敏感)EUROIMMUNEUROIMMUNgranulocytes(EtOH)granulocytes(HCHO)primateliverHEp-2cells自身免疫性胆管炎（AIC）autoimmunecholangitis-抗胆管抗体（二）自身免疫性肝病血清学检测AIH–血清学检测系统ELISA欧蒙斑点法IIFT欧蒙印迹法M2LKMLC-1SLA/LPANAASMAActinLKMANALKMLC-1SLA/LPLC-1EUROIMMUN肝抗原IIF马赛克ANA,ANCALSP,LMA,SLA/LP,LC-1,LKM-1抗胆管抗体AMA,GBMPCA,ASMA抗横纹肌抗体、抗润盘抗体质控带SLA/LPAMA-M2LKM-1欧蒙斑点法检测肝抗原LC-1全新欧蒙印迹法肝抗原谱胞浆颗粒型：M2和BPO核膜型：gp210核点型：Sp100和PML抗体所对应的抗原:AAMA-M2(74,51,45,36kDa)BAMA-M2(74,55,51,45,36kDa)CAMA-M2(55,51,36kDa)DSLA/LP(重组)ELKM-1F细胞角蛋白8/18GGST(谷胱甘肽巯基转移酶)免疫印迹法检测肝抗原微孔板ELISA