高效液相色谱仪校验方案

高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage1of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072题目Title高效液相色谱仪校验方案方案号Document#PQP-QC072-02设备编号Equipment#QC-0072安装地点Location高效液相色谱室生产厂家Manufacturer日本岛津（Shimadzu）公司方案审批：ApprovedBy姓名Name职位Position签名Signature日期Date陈凯QC分析人员于勇QC主管莫远略质量部长江苏阿尔法药业有限公司JiangsuAlphaPharmaceuticalCo.,Ltd.高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage2of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072目录1.目的2.确认人员及职责3.确认前确认4.确认依据及判定标准5.确认内容6.再确认要求7.确认结果汇总8.结果评价高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage3of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-00721.目的明确稳定性试验箱的校验项目、校验条件、校验方法、接受标准、校验周期等，便于检验人员按规程进行稳定性试验箱的校验操作。保证实验室使用的称量点称量的准确性。2．确认人员及职责QC分析人员：负责起草确认方案和报告、组织协调开展确认；QC主管：审核确认报告和报告；质量部长：批准确认报告和报告。3.确认前确认3.1人员确认姓名职务职责签名日期陈凯QC分析人员起草确认方案和报告，执行确认、组织培训赵家宽QC分析人员协助执行确认于勇QC主管监督确认的进行3.2文件培训序号培训内容是否培训1《LC-2040C型高效液相色谱仪标准操作规程》（QC-3079）是□否□2《LC-2040C型高效液相色谱仪维护保养标准操作规程》（QC-3080）是□否□3《液相色谱仪的校验操作规程》（QC-4002）是□否□4《高效液相色谱仪校验方案》（PQP-QC072））是□否□5《检验室安全管理规程》（QC-1018）是□否□高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage4of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-00723.3校验设备确认序号设备及要求是否符合1秒表：分度值不大于0.1s是□否□2分析天平：最大称量200g,最小分度值0.1mg是□否□3容量瓶：10.0mlA级不少于10支是□否□4温度计：分度值不大于0.1℃是□否□5以上设备应在校验有效期内是□否□3.4标准物质和试剂确认序号标准物质、试剂及要求是否符合1甲醇：HPLC级是□否□2纯水：HPLC级是□否□3丙酮：分析级是□否□4萘：是□否□检测人：日期：年月日复核人：日期：年月日4.确认依据及判断标准4.1确认依据4.1.1《LC-2040C型高效液相色谱仪安装使用说明》4.1.2《液相色谱仪校验规程》JJG705-20144.1.3《中国药典》2010年版二部附录4.1.4《药品GMP指南》2010年版高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage5of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-00724.2评判标准4.2.1性能确认(PQ)5.确认内容5.1性能确认(PQ)5.1.1输液系统确认5.1.1.1泵耐压：仪器连接完好后，以100%甲醇为流动相，流速0.2ml/min.启动仪器，待压力平稳后，观察10分钟，应无漏液现象。卸下色谱柱，堵住泵出口（压力传感器以下），使压力达到最大允许值的90%，保存5分钟，应无漏液现象。5.1.1.2泵流量设定值误差SS、稳定性误差SR：启动仪器，按上表的要求设定流量，压力稳定后，用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，收集上表规定时间流出的流动相，在分析天平上称重，按式（1）、（2）计算SS、SR系统校验项目标准输液系统1、泵耐压2、泵流量设定值误差SS3、泵流量稳定性SR4、梯度误差Gi符合规定±2%2%±3%柱温箱系统1、温度设定最大误差2、温度稳定性±2℃≦1℃/h检测器系统1、基线噪音2、基线漂移3、最小检测限5×10-4AU5×10-3AU/30min5×10-6g/ml(萘/甲醇溶液)整机性能1、定性重复性2、定量重复性3、线性测定≤1.0%≤3.0%相关系数R≥0.999高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage6of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072表1注：Fm=(W2-W1)/(ρ•t)Ss=(—Fm-Fs)/Fs×100%式（1）SR=(Fmax-Fmin)/—Fm×100%式（2）式中：Fm——实测流速；W2——容量瓶+流动相的质量，g；W1——容量瓶的质量，g；ρ——试验温度下流动相的密度，g/mL；t——收集流动相的时间，min；—Fm——同一组测量的算术平均值，mL/min；FS——流量设定值，mL/min；Fmax—同一组测量中流量最大值，mL/min；Fmin—同一组测量中流量最小值，mL/min。5.1.1.3梯度误差Gi：色谱条件：色谱柱：限流阻尼管流速：2.0ml/min检测波长：265nm流动相A：纯化水流动相B：0.1%丙酮水溶液以流动相A平衡系统，按表2梯度程序测试2次，记录色谱图。画出B溶剂经5段阶梯从0%到100%B梯度变化曲线（如图1），求出由B溶剂变化所产生的每一段阶梯对应的响应信号的变化值Li；按下列公式（1）计算每一段阶梯对应的响应信号值的变化平均值iL；按下列公式（2）计算五段阶梯对应的响应信号值的总平均值iL；按下列公式（3）流量（ml/min）次数W1W2W2-W1SSSR0.51231.01232.0123高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage7of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072计算每一段阶梯的误差Gi，取Gi的最大值作为仪器梯度误差报告。表2梯度程序时间(分)流动相A%流动相B%1.00100.00.01.0180.020.04.0080.020.04.0160.040.07.0060.040.07.0140.060.010.0040.060.010.0120.080.013.0020.080.013.010.0100.016.000.0100.021.00100.00.026.00100.00.0图1梯度组成准确度示意图高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage8of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072iL=2)()()1(22)1(11iiiiLLLL公式（1）iL=nLnii1公式（2）Gi=%100iiiLLL公式（3）式中：iL————第i段阶梯响应信号值的平均值；L1i————第i段阶梯第1组响应信号值；L1（i-1）——第（i-1）段阶梯第1组响应信号值；L2i————第i段阶梯第2组响应信号值；L2（i-1）——第（i-1）段阶梯第2组响应信号值；iL————5段阶梯响应信号值的总平均值；Gi————第i段阶梯的梯度误差表35.1.2柱温箱系统确认依次设定柱温箱温度为25℃，35℃，45℃值进行校验，这些温度应覆盖实验室使用的柱温范围,当使用柱温超出该范围时，需要增加该温度点校验。设定待校验温度，待测温仪显示的温度稳定后，记录温度显示值，每隔10分钟记录一次，每个温度点记录7次。求出平均值，设定值与平均值之差为设定值误差△T，7次测量值中最大值与最小值之差为控温稳定性误差Tc。iL1iL1（i-1）（℃）L2iL2（i-1）iLGi12345高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage9of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072表45.1.3检测器系统确认5.1.3.1基线漂移和基线噪声：色谱条件：色谱柱：C18柱流速：1.0ml/min检测波长：254nm流动相：甲醇在分析界面中点击基线检查，设置参数后，点击运行，工作站会自动记录30分钟，运行完毕后，机器自动计算出结果，给出是否通过的结论。将运行界面复制到Word文档中，打印出来即可。其他型号站基线漂移和基线噪声的测试方法：按不同的仪器配置，设定检测器的灵敏度设定温度（℃）次数测定温度（℃）平均温度（℃）ΔT（℃）Tc25℃123456735℃123456745℃1234567高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage10of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072为最强灵敏度。待系统平衡后，调整基线在图谱的中部位置，记录基线30分钟。以图谱显示的刻度值，计算基线噪音和基线漂移值。基线漂移：________________5×10-4AU基线噪声：________________5×10-3AU/30min5.1.3.2最小检测限：按上述色谱条件，平衡系统。取20µl的1×10-7g/ml萘/甲醇溶液进样，记录色谱图。按下列公式计算最小检测限：CL=HcVNd202注：Nd与H的单位应一致；分母中的20为进样体积，单位为µl。式中：CL——最小检测浓度,g/ml；Nd——基线噪音高度；c——标准溶液浓度,g/ml；V——进样体积，µl；H——标准溶液的峰高。最小检测限（CL）=HcVNd202=_______________________________5.1.4整机性能确认5.1.4.1定性与定量重复性：色谱条件：色谱柱：C18柱流速：1.0ml/min检测波长：254nm流动相：甲醇取1×10-4g/ml萘/甲醇标准溶液连续进样6次，记录色谱图，以萘峰的保留时间和峰面积，计算相对标准偏差RSD，即为整机性能的定性与定量重复性。表55.1.4.2进样针性能线性：取1×10-4g/ml萘/甲醇标准溶液，分别以5μl、10μl、15μl、20μl、30μl的体积进样，记进样次数123456平均值RSDRT（min）峰面积高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage11of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-0072录色谱图。重复测定3次。以进样体积Vi为横坐标，以3次萘峰平均面积Ai为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。表6进样体积(μl)510152030平均峰面积线性方程，相关系数R5.1.4.3线性：配置萘/甲醇标准溶液，使浓度分别为0.2×10-4g/ml、0.4×10-4g/ml、0.6×10-4g/ml、0.8×10-4g/ml、1.0×10-4g/ml、1.2×10-4g/ml以20μl的体积进样，重复测定3次，记录色谱图。以进样体积Vi为横坐标，以3次萘峰平均面积Ai为纵坐标作线性回归，得其线性方程及相关系数R。表7样品浓度×10-4g/ml0.20.40.60.81.01.2平均峰面积线性方程，相关系数R6.再确认要求6.1再验证周期6.1.1设备大修后需再校验。6.1.2由于检修、调整、迁移或其它原因，可能对设备的安装情况、主要技术参数和功能有影响时，应进行再验证。6.1.3高效液相色谱仪的验证周期为12个月，更换部件或对仪器性能有怀疑时，应随时验证。6.2再验证内容进行设备的再校验，可针对设备性能中部分必须的项目进行再验证，而不一定要进行全面的验证。高效液相色谱仪校验方案JSALPHARMPage12of12登记号：PQP-QC072版本：02生效日期：2017.09.01仪器编号：QC-00727.确认结果汇总7.1性能确认(PQ)系统校验项目标准测试结果输液系统泵耐压泵流量设定值误差SS泵流量稳定性SR梯度误差Gi符合规定±2%2%±3%柱温箱系统温度设