马铃薯脱毒种薯生产技术规程

ICS65.020.20B23四川省地方标准DB51DB51/T818—2008马铃薯脱毒种薯生产技术规程TechnicalProceduresofVirus-freeSeedPotatoProduction2008-6-6发布2008-9-1实施四川省质量技术监督局发布DB51/T818—2008I目次前言----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------Ⅱ1.范围---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------12.规范性引用文件------------------------------------------------------------------------------------------------------------13.术语和定义------------------------------------------------------------------------------------------------------------------14.脱毒组培苗快繁------------------------------------------------------------------------------------------------------------25.原原种生产-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------36.原种生产----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------47.脱毒种薯繁育体系（见附录G）----------------------------------------------------------------------------------------4附录AMS培养基贮备液的配制----------------------------------------------------------------------------------------5附录B（规范性附录）酶联免疫吸附试验法------------------------------------------------------------------------6附录C（规范性附录）往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法---------------------------------------------------------8附录D种薯切块操作程序----------------------------------------------------------------------------------------------12附录E主要病虫害防治--------------------------------------------------------------------------------------------------12附录F（规范性附录）马铃薯主要虫害症状与防治方法--------------------------------------------------------13附录G脱毒种薯繁育体系----------------------------------------------------------------------------------------------15DB51/T818—2008II前言本标准附录B、附录C、附录F为规范性附录。本标准由四川省农业厅提出并归口。本标准由四川省质量技术监督局批准。本标准由四川省农业技术推广总站、成都市农林科学院作物研究所负责起草。本标准主要起草人：陈涛、章锐、周孝强、梁南山、何卫等。DB51/T818—20081马铃薯脱毒种薯生产技术规程1范围本规程规定了马铃薯脱毒苗的培育、繁殖，各级脱毒种薯的生产、扩繁栽培和各级脱毒种薯的检验、收获、贮藏等技术操作规程。本规程适用于四川省马铃薯脱毒种薯生产。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB3243-82马铃薯种薯生产技术操作规程GB7331-2003马铃薯种薯产地检疫规程GB18133-2000马铃薯脱毒种薯3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1脱毒组培苗（Virus-freein-vitroplantlets）简称脱毒苗，是应用茎尖组织培养技术获得的、经检测确认不带马铃薯卷叶病毒（PLRV）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯A病毒（PVA）、马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯M病毒（PVM）或马铃薯S病毒（PVS）等病毒和马铃薯纺锤块茎类病毒（PSTVd）的再生试管苗，经过组织培养方法大量扩繁的且不带上述病毒和类病毒用于生产原原种的试管苗。3.2试管薯(In-vitromicrotuber)脱毒苗经诱导培养，直接在试管(或瓶)内结的小薯。3.3扦插苗(Trans-plants)脱毒苗切段在网室扦插成活或马铃薯试管薯直播于网室出苗后，剪取其主茎及侧枝顶端扦插成活的苗。3.4脱毒种薯(Virus-freeseedpotato)从繁殖脱毒苗开始，经逐代繁殖增加种薯数量的种薯生产体系生产出来的各级种薯。脱毒种薯分为原原种、原种、生产用种薯。3.4.1原原种(Pre-basicseed)（脱毒小薯）利用组培苗或系选苗（clonalselection）在防虫网室和温室条件下生产出来的、不带马铃薯病毒、类病毒及其他马铃薯病虫害的、质量在1g～10g之间的小薯。3.4.2原种(Basicseed)用原原种作种薯，在良好隔离条件下生产的符合质量标准的种薯。3.4.3生产用种薯(Certifiedseed)用原种或其加代繁殖一代后作种薯，在隔离条件下生产出的符合一级种薯质量标准的种薯。3.5病毒病株允许率(Maximumvirus-infectedplantpercentageallowed)脱毒种薯繁殖田中病毒病株的允许百分率。3.6细菌病株允许率(Maximumbacterial-infectedplantpercentageallowed)DB51/T818—20082脱毒种薯繁殖田中细菌病株的允许百分率。3.7真菌病株及其它病株允许率(Maximumfungalorotherpathogeninfectedplantpercentageallowed)脱毒种薯繁殖田中真菌病株和其它病株的允许百分率3.8混杂植株允许率(Maximumoff-typeplantpercentageallowed)脱毒种薯繁殖田中混杂的其它马铃薯品种植株的允许百分率。3.9有缺陷薯(Defecttuber)指畸形、次生、龟裂、虫害、冻伤、黑心和机械损伤的薯块。3.10隔离栽培(Isolatedplanting)指在与病虫害相对隔离条件下进行的栽培方式。3.11扩繁栽培(Multiplicationplanting)主要指lg以上脱毒原原种直接种入大田，采取调节播种期、喷药防虫、剔除病、杂株等综合保护措施，生产脱毒原种的种植方式。4脱毒组培苗快繁4.1脱毒组培苗的培育4.1.1选材：应选用生产上主栽的、或具有某种特性(如抗马铃薯癌肿病)优良品种块茎的休眠芽或刚出土幼苗的茎尖、或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。4.1.2培养基的制备：在每l000mlMS培养基(见附录A)中加GA30.2mg～0.3mg、6-BA0.1mg～0.2mg、NAA0.01mg～0.05mg、泛酸钙1.5mg～2.5mg，分装入管(或瓶)。4.1.3灭菌：在0.15Mpa／cm2压力下灭菌15min～20min，冷却备用。4.1.4茎尖剥离接种：将入选材料放入纱布袋，用自来水冲洗1h后，在无菌条件下，放入70％～75％酒精中浸2s～3s，再用0.1％升汞液消毒3min～6min(或用3％次氯酸钠液加2～4滴吐温振荡消毒15min～20min)，取出用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解剖镜下用手术刀等工具轻、准、快速地剥去幼叶，切取带l～2个叶原基(0.1mm～0.4mm大小)的生长点，迅速接入装有茎尖分化培养基的试管或培养瓶中，每管（瓶）放1个生长点。注明品种，茎尖号，接种期。4.1.5培养条件：日温25℃，夜温15℃，光照时数l2h／d～14h／d，光照强度2000～30001x条件下培养。4.2病毒检测本单位自检，然后送国家法定植检部门复检认定。用于检测的数量不低于总数的10%。根据检测结果出具检验结果报告单，如果脱毒苗没有检出PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS和PSTVd等病毒和类病毒，则应批准进行组培苗生产。不合格的脱毒苗不得用于组培快繁。4.2.1检测方法：马铃薯PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS等病毒，用酶联免疫吸附（ELISA）法检测（见附录B），无阳性反应再用指示植物鉴定。纺锤块茎类病毒(PSTVd)用往复双向聚丙烯酰胺凝胶电泳法（R-PAGE）检测（见附录C），鉴定筛选出不带PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PSTVd的脱毒苗。4.2.2脱毒苗复检：继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少作一次病毒复检。4.3脱毒苗组培快繁4.3.1脱毒组培苗来源：经4.2.1检测，脱除了所列病毒的组培苗。4.3.2培养基：用MS培养基。灭菌同5.1.3。4.3.3快繁：将脱毒苗剪切成1cm左右，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上，每瓶培养基接种10～15个茎段，待茎段长成高10cm左右小苗（培养15d～30d），进行切段转接，如此，反复继代培养繁殖。4.3.4培养条件：同4.1.5DB51/T818—200834.4脱毒组培苗的保存4.4.1培养基：Ms+B95mg/l～10mg/l+甘露醇40mg/l+琼脂7000mg/l+40000mg/l。pH5.8.每瓶装培养基45ml~70ml，灭菌同4.1.3。4.4.2接种：选继代培养中生长健壮的组培苗，进行切段，每瓶接种10个茎段。4.4.3培养：置弱光（1000lx）和较低温度（5℃~10℃）下保存。3～6个月转接一次。3y～4y更新一次用于快繁的脱毒组培苗。5原原种生产用脱毒组培苗或试管薯在60目以上网室内隔离栽培。5.1隔离网室的建立5.1.1环境条件：选择四周无高大建筑物，水源、电源、交通便利，通风透光的地方建网室。5.1.2建设要求：隔离网室用热镀锌钢管作支撑，高3m～3.5m，宽6m～10m。网室内地表及网室四周2m内，应建成水泥地面，网室周围10m范围内不能有其它可能成为马铃薯病虫害侵染源或可能成为蚜虫寄主的植物。严防网室内地表积水和网室外水流入。用于隔离的的网纱孔径要达到60～80目。5.2扦插(或播种)前准备5.2.1炼苗：将长到7～8片叶，苗龄30d左右的组培苗拔去瓶塞，炼苗2d～3d。5.2.2基质：蛭石、草炭、珍珠岩或细砂均可作基质。生产原原种