B族链球菌筛查

B族链球菌筛查蔄日明—生物梅里埃[e-mail]2B族链球菌（GBS）/无乳链球菌，兼性厌氧菌，革兰阳性球菌，单个、成双、链状排列、长短不一正常寄居于阴道和直肠，它是一种条件致病菌，围产期妇女在分娩过程中，新生儿在通过产道时可被感染。在血琼脂平板上35℃培养18~24h，形成灰白色、表面光滑、有乳光、圆形、β溶血的菌落，部分菌株无β溶血环主要危害群体：孕产妇，尤其是新生儿在美国，大约25%到40%的孕妇的产道携带这种细菌。其中40%～70%在分娩过程中会传递给新生儿早发B族链球菌病（小于7天的婴儿）是引起新生儿疾病和死亡的首位感染性疾病什么是GBS？3孕产妇GBS定植在发展中国家中平均为12.7%。也是我国孕妇主要携带细菌之一(8.95%～10.10%)；临床致病表现为菌血症、泌尿系统感染、胎膜感染、胎膜早破、产褥感染（发病率为1%～7.2%，是产妇死亡的四大原因之一）、子宫内膜感染以及创伤感染。GBS感染诱发早产率最高达60%，研究表明，GBS阳性孕妇早产合并低出生体重儿、极低体重儿的可能性增加20%-60%。新生儿超过半数的新生儿是在母亲GBS检查阳性但没有接受治疗的情况下出生，约有2%最终发展成为侵袭性疾病早发型感染-80%(生后7d以内)主要引起肺炎和败血症,是新生儿死亡的主要原因之一晚期感染-20%（生后第1周至3个月，平均1个月)，通常因横向传播引起，表现为菌血症发热和脑膜炎。值得注意的是，GBS感染即使治愈，也可能遗留长期病理状态如耳聋、视力受损、发育障碍以及脑瘫等GBS的主要危害470年代美国新生儿GBS感染的发病率是(2～3)/1000活产婴,病死率大于50%。90年代以来,美国的产前抗生素预防策略使GBS感染的发病率和病死率均有所降低,其中新生儿早发型GBS感染的发病率下降了70%,但在晚发型却没有明显变化。GBS新生儿感染率母亲阴道携带GBS是新生儿感染的主要高危因素之一。要降低孕产妇的带菌率以及新生儿的发病率和病死率,就需要先进的GBS诊断技术,这样才能有效地对感染者进行预防和治疗CDC与其他机构共同制定了《围产期B族链球菌感染筛查及防治指南》，并于2002年和2010年进行了修改，发病率从90年代早期1.7/1000个新生儿降低到了近些年的0.34-0.37/1000个新生儿。5Caseanalysis67对所有孕妇于妊娠35-37周进行GBS筛查，结果阳性者进行预防性治疗以下情况，应进行GBS检查和预防性治疗：本次妊娠有GBS菌尿；上次新生儿GBS感染史；在妊娠37周之前分娩；胎膜早破分娩温度超过38℃GBS阳性孕妇新生儿出生以后产程中发生宫内感染的产妇及新生儿根据统计，这种方案会对26.7%的分娩者进行预防性治疗，可以预防86%的新生儿早发GBS感染美国CDC-2010GBS筛查指南8美国CDC-2010GBS筛查指南GBS治疗给予青霉素预防(对于青霉素过敏的病患)孕35-37周取阴道和直肠拭子做GBS检测毋须药物预防GBS(+)GBS(-)GBS(+)GBS(-)未做分娩期预防性使用抗生素，以防止围产期B族链球菌感染，B组链球菌的发病率在过去十年中下降70％-US产时高危因素：产时发热≥38℃，胎膜早破≥18小时进行GBS检测青霉素G首剂480万单位，后每4小时240—320万单位静滴直至分娩或阿莫西林首剂2g，后每4小时1g静滴直至分娩患者使用青霉素出现下列症状：过敏反应；血管性水肿；呼吸困难；荨麻疹否是是否对克林霉素和红霉素敏感头孢唑啉首剂2g，后每8小时1g静滴直至分娩万古霉素每12小时1g静滴直至分娩克林霉素900mg每8小时静滴直至分娩是是否否9GBS检测方法比较显色培养基PCR免疫备注原理培养DNAPCRELISA/胶体金培养方法是细菌检测的金标准操作流程采样-接种-孵育-观察采样-准备样品（震荡离心）-准备对照品-DNA提取-准备反应液和反应管-扩增-分析结果胶体金：采样-稀释-加样-观察结果ELISA:样品准备-加样-孵育-洗板-底物反应-读数显色培养基操作最简单所需设备无离心机、荧光PCR仪、漩涡混合器、恒温震荡器ELISA:酶标仪、洗板机；胶体金：无显色培养基检测毋需设备，节省成本作用培养+初步鉴定GBS，培养的菌落可用于后续药敏实验鉴定GBS鉴定GBS显色培养基除可做培养和初步鉴定外，其菌落可用于后续的药敏实验，而PCR和免疫方法则仅用于鉴别，如需药敏实验必须重新做培养可检测样本阴道直肠拭子；尿液；新生儿胃吸出物等阴道直肠拭子血清，血浆等孕妇筛查适用样本为阴道直肠拭子检测时间18-24小时2小时2小时虽然PCR和免疫学方法有速度优势，但对于筛查的病人，并不急于诊断，所以实验室和临床可以接受培养相对较慢的速度用户成本较低较高？一般收费60-8060-100ELISA:30-60胶体金：10-20GBS检测方法比较10chromIDStreptoB（43461-86）B族链球菌筛查培养基上海生产筛查临床样本中孕产妇B族链球菌携带情况。chromIDStreptoBB链筛查培养基&增菌液ToddHewittbroth+antibiotics（42116）B族链球菌增菌肉汤法国进口（10个月效期）用于孕妇阴道—肛肠样本中B族链球菌检测时的选择性增菌培养基中成分有助于含多种微生物标本中链球菌的生长。培养基中含抗生素（萘啶酸和粘菌素）能抑制标本附属菌群中的大部分革兰氏阴性菌的生长。11B族链球菌筛查培养基是一种选择性产色培养基，供医疗机构用于筛查临床样本中孕妇B族链球菌携带情况。由不同种类的蛋白胨、3种显色底物和抗生素组成，这些成分能够通过培养基上生长出的浅粉色到红色菌落来筛查无乳链球菌。其它细菌和酵母菌多数不在这种培养基中生长，或产生紫色、蓝色，无色的不典型菌落。典型的无乳链球菌落呈浅粉色到红，圆形呈珍珠状B链筛查培养基12采样B链培养基使用方法阴道口1/3肛门括约肌2~5cm孕妇：先檫去外阴分泌物，将1根无菌阴道拭子放入阴道下1/3内，旋转1周采取阴道分泌物，再使用1根棉拭子插入肛门，在肛门括约肌上2-3cm处轻轻旋转取得直肠分泌物新生儿：无菌棉拭子在新生儿鼻腔，咽部旋转1周取分泌物。脑脊液、血液、痰液亦可*新生儿消化胃液在国外临床实验中为有效样本类型13接种读取结果B链培养基使用方法Todd-Hewitt增菌肉汤（18-24h）接种到Strepto产色培养基（避光18-24h）接种到Strepto产色培养基（避光18-24h）如24h无生长延长至48小时粉色至红色，圆形&珍珠状菌落-GBS无生长或蓝色紫色无色不典型菌落-杂菌使用选择性增菌液，可显著提高阳性率，避免50%的GBS携带者出现假阴性结果(US-CDC2010)（有氧，37℃）14StreptococcusagalactiaeATCCNCTC8190无乳链球菌ATCC12386+粪肠球菌ATCC29212无乳链球菌ATCC12386+白色念珠菌ATCC10231颜色典型，清晰明确的判读结果（纯菌落）实验室实物拍摄15颜色典型，清晰明确的判读结果（临床标本）血平板需透光观察少小菌落易漏诊非溶血B链无法观测StreptoB产色平板颜色典型，清晰可辨所有的B链均可被检出：无论是否具有溶血性16增菌液的必要性和色素增菌液的缺陷17市场容量平均每年1600万新生儿（二胎政策开放以后，新生儿数量会增加），目前约一半剖腹产，随着剖腹产手术的管理加强，顺产儿会超过半数除35-37围产期筛查之外，有部分医院在产中会做筛查，以保证孕妇和胎儿的健康情况，避免因为GBS引起的胎膜早破，羊膜腔感染和产褥感染等定位综合性三级医院地区性有影响力的妇幼保健医院外资医院（GBS筛查指南要求比较严格）收费情况GBS筛查/检测（100-200不等）套用一般性细菌培养与鉴定（60-80不等）国内市场容量/定位/收费孕妇：X某孕期：36周症状：发烧标本：阴道拭子/肛拭子检测方法：产色培养基检测试剂：chromIDStreptoBB族链球菌检测案例（临床标本）郭健飞—市场部·生物梅里埃[e-mail]19采集标本直接接种37℃有氧，24小时后转运培养基，变浑浊阴道标本，无菌生长肛门标本，蓝色细菌37℃有氧，24小时后，没有发现浅粉色/红色，圆形珍珠状菌落。继续培养24小时2048小时的生长情况阴道标本阴性，48小时，没有细菌生长；肛门标本阴性，48小时，没有B族链球菌（浅粉/红色，圆形珍珠状）21根据说明，两个标本均排除B族链球菌感染的可能强光照射下下出现疑似菌落，为了验证产色培养基的培养结果，使用VitekMS（20Mins）进行快速鉴定lactobacillussalivarius唾液乳杆菌Enterococcusfaecalis粪肠球菌22检验结果的解释经过培养后，观察细菌增长情况以及菌落形态：典型的无乳链球菌菌落呈浅粉色到红色，圆形呈珍珠状。其他无明显特征颜色，可排除B族链球菌感染其它种类微生物的生长会受到抑制，或其生成的菌落呈不同的颜色（例如：紫色、蓝色、无色等）。通过实验鉴定，验证了颜色可靠，结果准确