QIAamp中文说明书

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资源描述

QIAamp试剂盒提取唾液DNA步骤此试剂盒可以提取1~100uL的唾液样本,一般在15~25℃下操作。准备工作:(1)样本需提前放到室温环境中,使其解冻。(2)用于洗脱的BufferAE或去离子水需要提取放置与室温中。(3)开启水浴锅,设置到温度56℃。(4)确保BuffersAW1在使用前已经加入25mL无水乙醇,并打钩表示已加入;确保BuffersAW2在使用前已经加入30mL无水乙醇,并打钩表示已加入,加入乙醇后,此溶液最多能使用一年。(5)实验前检查BuffersAL或BuffersATL是否含有沉淀,如果有需要在70℃使沉淀溶解。步骤:(1)将1mL唾液样本放入1.5mLEP中(自备),并12000rpm离心5min。(2)弃去上清后,并加入500uLBufferAE,然后振荡5s。(3)8000rpm下离心2min。(4)弃去上清后,加入300ulBufferATL和20uLproteinaseK,并振荡10s。(5)振荡后,放于56℃水浴锅中,并每隔15min上下颠倒1.5mLEP15s,整个水浴时间需1h。(6)1000rpm离心1.5mLEP管30s,使粘在管盖的液体离心下来。(7)加入300uLBufferAL和50uL无水乙醇,盖紧盖子,振荡10s。(8)1000rpm离心1.5mLEP管30s,使粘在管盖的液体离心下来。(9)仔细地将上清液转移到QIAampMinElutecolumn(在2mL的收集管中),注意不能弄湿了管盖的边缘。盖紧盖子,在8000rpm离心1min。将QIAampMinElutecolumn放到另一个新的2mL收集管中,丢弃上一个含离心液的收集管。(10)仔细打开QIAampMinElutecolumn,并加入500uLBufferAW1,注意不能弄湿了管盖的边缘。盖紧盖子,在8000rpm离心1min。将QIAampMinElutecolumn放到另一个新的2mL收集管中,丢弃上一个含离心液的收集管。(11)仔细打开QIAampMinElutecolumn,并加入500uLBufferAW2,注意不能弄湿了管盖的边缘。盖紧盖子,在8000rpm离心1min。将QIAampMinElutecolumn放到另一个新的2mL收集管中,丢弃上一个含离心液的收集管。(12)再在14000rpm离心3min,使QIAampMinElutecolumn中的液体完全被离心下来。(13)将QIAampMinElutecolumn放置与一个新的1.5mLEP管中(自己准备),仔细打开QIAampMinElutecolumn盖子,并加入20~50ulBufferAE或灭菌后的去离子水,要加到膜的边缘。(14)盖紧盖子,在室温下放置2min,然后在14000rpm下离心1min。

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