FACSDiva操作说明

FACSDiva操作说明书首先熟悉一下Diva的操作界面1通过点击菜单栏的相应的按钮，可以隐藏或展开相应的模块2Browser通过Browser，可以对数据库进行管理，Browser列出了文件夹、实验、及实验所包含的样本和管子。3Acquisitioncontrol对获取和记录数据进行操作4Instrument仪器设置仪器框显示了仪器连接状态，当打开一个实验，试管指向定位于一个试管时，这个框显示的是当前试管的仪器设置。5浏览框浏览框显示了worksheet或者Browser中选中的部件的属性，可进行修改。6worksheetWorksheet框，可进行画图、设门、设逻辑关系，进行统计等。7获取状态显示了获取或记录数据时的状态。在基本熟悉Diva的界面后，下面就进行一个实验。在Diva软件上进行操作，必须先新建一个实验（实验必须建立在文件夹中）。下面描述的是如何使用这些命令：CreatingaFolderandanExperiment这部分描述了如何创建一个Practice文件夹和包含有基础分析的实验。1、在浏览框的菜单栏中单击2、重命名为Practice，如下图3、选择Practice文件夹，点击浏览框菜单栏的在文件夹下就创建了一个新的实验，这个实验包含了默认的仪器设置和一个空白的globalworksheet。4、点及增加Specimen快捷键，可加一个样本和试管。5、浏览框中点击左边的样本指向，指向tube-001。样本指向变成绿色，说明当前Expriment和Acquizitioncontrol中显示该tube的属性。6、在Browser中选择每一项，看看Inspector框的变化。当tube-001被选择时，在Inspector中可以看到有四个标签，分别点击看看变化。在这版软件中，一些仪器设置不能在Inspector中修改。当与流式细胞仪相连接时，可以在Instrument框中改变电压、域值和补偿。7、选择Expriment—ExprimentLayout，对每个参数进行定义，如下图。当你的实验包含有很多试管时，你可以用ExprimentLayout来一次标记所有试管。8、在ExprimentLayout对话框中，点击Acquisition标签，选择Tube-001，改变计数粒子为10000，点击OK。当你在浏览框中选择Tube—001时，在Inspector中的Labels和Acqui中的选项也随着改变。9、在Globalworksheet中创建一个FSCvsSSC点图在worksheet菜单栏中点击，再在worksheet中点击一下，就创建了一个默认大小点图。10、在FSCvsSSC点图中边上创建一个PE直方图在worksheet菜单栏中点击直方图工具，再点击worksheet，一个默认大小的直方图就建立好了。点击X轴标签，在下拉菜单中选择PE-A，可改变图的参数。注意参数的名字是你先前设定的参数名。11在FSCvsSSC点图下面创建一个FITCvsPerCP-Cy5.5的点图按住Ctrl键，点击FSCvsSSC图的边缘，往下拖。当你拖的时候，就创建了一个复制的点图。把点图放在合适的位置，松开鼠标，这个方法可以复制任何的点图。点击坐标轴，选择合适的参数。12创建一个PopulationHierarchyPopulationHierarchy是用来列出定义的亚群。右击任何点图，选择ShowPopulationHierarchy，把结果图拖到FITCvsPerCP-Cy5.5点图的右侧。Worksheet应该看起来类似于下图：ExportinganExperimentasaTemplate现在已经创建好一个实验了，可以导出成为一个模板。实验模板包括了样本、试管、关键词、仪器设置、标签、worksheet上的图以及worksheets（包括所有设置，如分页），但不包含有数据。一个实验可以保存为一个模板，为了简化浏览框，模板不通过浏览框选择。1、在浏览框中选择Expriment-001，再选择File—Export—ExprimentTemplate。确定选择的是ExprimentTemplate命令，而不是Expriment命令。ExportExperimentTemplateWizard出现，对话框上的黑体字告诉你每个框的作用2在模板类型中输入Practice，模板名字中输入SimpleAnalysis。模板类型用来对类似的模板进行分组，以便于查找。当你在创建一个模板时，至少要输入类型和名字，后面的选项是可选项。3点击Next，可查看后面的选项，点击Finish。CreatinganExperimentfromaTemplate现在可以用原来保存的模板来创建一个实验。记住当你想在一个文件夹中创建一个实验时，首先要选择文件夹。1、选择Practice文件夹，选择Experiment—NewExperiment。当你想用原来保存的Exprement模板时，使用菜单栏而不是快捷键，你也可以按Ctrl-E。ExperimentTemplates对话框出现2、在对话框中，点击Practice标签，选择SimpleAnalysistemplate，点击键。ExperimentLayout对话框出现，显示试管标记、关键词、模板的设置等。3点击ExperimentLayout对话框中的各种标签，查看设置，然后点击Cancle。这些设置是你建立模板时设定的，注意：这些数据是只读的，不能修改。4点击OK建立一个新的实验注意原先的实验已经关闭，一个新的实验SimpleAnalysis在浏览框中。当你在做实验时，一次只能打开一个实验。注意globalworksheet中包含有点图和PopulationHierarchy，在点图中没有数据。ImportinganExperiment接下来，你将在Practice文件夹中导入一个实验。导入实验与导入模板的不同之处在于它们包含有记录的数据。1、选择Practice文件夹，选择File—Import—Expriments默认情况下，当导入一个实验时，D:\BDExport\Experimentfolder将会出现，除非你以前改变路径导向到另一个文件夹。2、选择命名为ManualComp的文件夹，点击Import。导入的实验都是以文件夹形式出现，文件夹在导入后在浏览框中将会以实验Expriment出现。注意原先的实验没有关闭，新的实验加在SimpleAnalysisExperiment后面有三种方法在浏览框中增加实验：1、用浏览框工具栏中的快捷键来新建一个空的实验（默认条件设置）。2、Expriment—NewExpriment命令新建一个新的实验，实验来自于一个原来保存的模板，模版包含下列部分：点图、门、统计图和仪器设置。3、File—import—Expriment命令，可新建一个实验，通过这个方法获得的实验包括原来保存的实验条件等和数据。WorkingwithExperimentsintheBrowser现在在浏览框中有三个实验，一个关闭的实验(Experiment_001),一个打开的实验模板(SimpleAnalysis)和一个关闭的导入的实验(ManualComp)。接下来的练习来证明关闭和打开的实验之间的不同，以及如何来比较仪器设置。1、点击ManualCompExperiment前面的（+），展开实验。尽管在browser框中显示出实验组分，但点图依旧是空白的，你必须打开一个实验来获得它的数据。注意：展开一个实验和双击打开一个实验是不同的2、双击ManualCompExperiment来打开SimpleAnalysisExperiment关闭，在worksheet中显示ManualCompExperiment中的分析目标。3、点击其中一个实验样本ManualCompExperiment中，在每个样本下面含有多个试管，注意每个试管都是绿色的，说明每个试管都包含有数据。4、点击试管指示到任何一个试管。在globalworksheet中包含有点图、试管中含有数据，数据就显示在worksheet中，可用试管指示来定位试管，则将显示所选择试管的数据。5、在browser中选择其它试管注意：数据并没有改变，必须依靠试管指示，才能在globalworksheet中显示其他试管的数据。尝试把试管指示指向另一个试管，注意数据的变化。6、展开SimpleAnalysisExperiment，选择InstrSettings。注意Inspector上的仪器设置是所选Instrusettings的设置，尽管实验已经关闭。7点击Instrumengt框中的各个参数Instrment框显示了试管指示所对应的试管的仪器设置（ManualCompExperiment中的tube）。Inspector显示的是试管的设置或者是所选择的InstrSettings的设置。在这个例子里，Inspector显示的是SimpleAnalysisExperiment实验的仪器设置，你可以用Instrument框和Inspector来比较浏览器中的任何两个仪器设置。UsingGatingFeatures在BDFACSDiva软件中：可以创建四种类型的门：polygon、rectangle、quadrant和interval。自动圈门工具Automatic和Snap-To门工具可用来设置polygon和interval门。在这一节中，你需要先前所建立的SimpleAnalysis和ManualComp实验。CreatingGates这部分说明了在ManualCompExperiment中怎么用worksheet中的菜单栏来设不同的门：1、打开ManualCompExperiment2、把试管指向对准Calibrite样本下的PreSort试管，如下图：3、在FSCvsSSC点图上建一个Autopolygon门选中worksheet菜单栏的（Autopolygon）工具。在点图中点击粒子，一个门将会自动地画成。4、试管指示指向下一个试管，可以看到一些粒子在门外。5、选择FSCvsSSC图的Autopolygon门，Delete按Delete键而不是Backspace键，如果Delete键不工作的话，右击门，选择delete。这将会激活Delete键，下次就可以使用。显示的是ManualComp_001中PE试管的仪器设置显示的是simpleAnalysis_001的instruSettings的仪器设置6、在FSCvsSSC点图上创建Snap-Topolygon门Snap-Topolygon和autopolygon门不同，Snap-Topolygon门自动重新计算。可看见Snap-Topolygon门的边框比较粗。7、把试管指示回到PreSort试管，注意门的变化。8、（可选）用其它设门工具进行练习，在点图上去除Snap-To门，创建一个Rectangle门（）和一个Polygon门（）EditingGates这部分描述怎样移动和改变门的大小1、选中FSCvsSSC点图上的门，在每个顶点上会出现一个把手。2、移动选中的门移动门的时候，选择门的边，而不是顶点，可看到门的标签随着门一起移动3、拖动其中的一个把手来改变门的大小在你移动或者改变Snap-To门时，门将不会自动调准。你可以通过右击门的边，选择下拉菜单中的重新计算。4、通过拖动门内的标签，可把标签拖到门外5、在门外点击，释放门6、关闭ManualCompExperiment.SubsettingPopulationsSimpleAnalysisExpriment包括三个点图和一个PopulationHierarchy。PopulationHierarchy主要是用来查看各个门内群体关系。在这里，你需要原来创建的SimpleAnalysisExperiment，在软件安装时，样本文件存在于BDExport\FCS文件中。导入数据在你进行分群前，需要含有数据的点图：1、通过