cobas-4800-HPV检测在宫颈癌筛查中的应用价值

中国肿瘤临床2013年第40卷第6期ChinJClinOncol2013,Vol.40,No.6:WenCHEN;E-mail:[e-mail]1DepartmentofGynecologicOncology,LiaoningCancerHospitalandInstitute,Shenyang110042,China2DepartmentofCancerEpidemiology,CancerHospitalandInstitute,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Beijing100021,ChinaAbstractObjective:Thisstudyaimedtoevaluatethefeasibilityandutilityofcobas4800humanpapillomavirus(HPV)testasaprimaryscreeningtestandatriagetoolincervicalcancerscreening.Methods:Atotalof856unscreenedwomensubjectsover21yearsofageandhaveengagedinsexualactivitieswererecruitedfromHenan,Chinain2011.Allsubjectswerescreenedthroughcobas4800HPV,HybridCapture2(HC2)technology,ThinPrepliquid-basedcytology,andcolposcopy.Anyvisiblelesionwasdirectlybiopsiedthroughcolposcopy.Randombiopsiesinfourquadrantsatthesquamocolumnarjunctionandendocervicalcurettagewereperformedwhenapparentcolposcopicabnormalitywasnotobserved,butatleastoneoftheHPVtestswaspositive.Pathologicdiagnosiswasusedasthegoldenstandardtoevaluatetheperformanceofthescreeningtests.Results:Measuredasaprimaryscreeningtest,thesensitivityandspecificityofthecobas4800HPVtestindetectinggradeⅡcervicalintraepithelialneoplasia(CIN2)andCIN2+inpatientsreached94.4%and63.2%,respectively,comparedwith94.4%and63.9%oftheHC2test.TheconcordancerateindetectingHPVDNAbetweencobas4800HPVandHC2testswas83.4%(κ=0.65).Thecobas4800HPVtestcoulddetectallCIN2+casesthatwereundetectedbytheThinPrepliquid-basedcytologictest.ThepositivepredictivevalueoftheHPV16/18typingtestindetectingCIN2+lesionswastwiceashighasthatoftheHC2test(2.13×).IntheCIN2+cases,thewomensubjectsinfectedwithHPV16/18were5.4yearsyoungerthanthoseinfectedwithothertypesofHPV.Conclusion:Satisfactoryconsistencyandsimilaraccuracybetweenthecobas4800HPVandHC2testswereobserved.However,cobas4800HPVtestissuperiorindetectinghigh-riskHPVtypes.ThistestcouldprovidemoresensitiveandefficientstrategiescomparedwiththeThinPrepliquid-basedcytology.Cobas4800HPVcanalsoidentifythesub-genotypesofhigh-riskHPV16/18,whichcaneffectivelyhelpthedoctorsfollowuphigh-riskcasesamongwomenwithhigh-gradecervicallesions.Cobas4800HPVtestisexpectedtobeanewmethodforcervicalcancerscreening.Keywords:cervicalcancer,HPV,screening,cobas4800作者单位：①辽宁省肿瘤医院妇科（沈阳市110042）；②中国医学科学院肿瘤研究所流行病学教研室通信作者：陈汶[e-mail]4800HPV检测在宫颈癌筛查中的应用价值崔晓莉①王纯雁①王红②康乐妮②陈汶②陈凤②于露露②洪恩宇②潘秦镜②乔友林②摘要目的：评价cobas4800HPV检测技术在宫颈癌及癌前病变筛查中的可行性及应用价值。方法：对河南省新密市856例年龄21岁有性生活的妇女进行宫颈癌筛查。每位妇女均接受了cobas4800HPV检测、高危型HPV第二代杂交捕获试验（hy⁃bridcapture2technology，HC2）检测、ThinPrep液基细胞学和阴道镜检查。阴道镜下在可见病变处直接取活检；任意筛查结果阳性但无可见病变时，于宫颈外口鳞柱交界处行四象限随机活检和宫颈管搔刮术（endocervicalcurettage，ECC）。结果：cobas4800HPV检测与HC2检测对宫颈上皮内瘤变（cervicalintraepithelialneoplasia，CIN）2级以上（CIN2、CIN3及宫颈癌）患者的灵敏度均为94.4%（34/36），特异度分别为63.2%（516/817）和63.9%（522/817）；一致率为83.4%（711/853），两者具有高度一致性（Kappa=0.65）。cobas4800HPV检测对于液基细胞学检查漏诊的患者具有100%检出率。cobas4800HPV16及18分型检测对于CIN2以上患者的阳性预测值21.9%为HC2检测10.3%的2.13倍。妇女感染HPV16及18型患CIN2以上病变的年龄比感染其他类型平均小5.4岁。结论：cobas4800HPV检测与HC2检测具有相似的准确性和良好的一致性，比ThinPrep液基细胞学检查更为灵敏，并且能鉴别HPV16及18两种高风险类型HPV感染，利于医生更有针对性地随访宫颈病变中的高危病例。关键词宫颈癌人乳头瘤病毒筛查cobas4800doi:10.3969/j.issn.1000-8179.2013.06.010·临床应用·341中国肿瘤临床2013年第40卷第6期ChinJClinOncol2013,Vol.40,No.6宫颈癌是全球女性第二大恶性肿瘤。全世界每年约有53万新发病例，27.5万死亡病例，其中85%以上的病例发生在缺乏有效宫颈癌筛查及治疗的发展中国家。我国每年约有10万新发病例，约占世界新发病例总数的1/5［1］。目前世界公认高危型人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus，HPV）是引起宫颈癌的主要病因，高达99.7%的宫颈癌患者可检测出HPVDNA［2］。在全部HPV高危型中，HPV16、18和45是宫颈癌报道中最常见的3种类型，全世界约75%的宫颈癌是由这3种型别引起［3］，而其中HPV16和HPV18与70%的宫颈浸润癌相关［4］。这使得高危型HPV检测成为一种有效的宫颈癌筛查技术。目前临床大量使用的高危型HPV第二代杂交捕获试验检测，可检测13种与宫颈癌相关的高危型HPV，但是不能区分HPV类型。cobas4800HPV检测是一种通过PCR扩增检测高危型HPVDNA的体外检测技术，与HC2检测相比增加了HPV66高危型的检测，并能鉴别两种风险度最高的HPV16和HPV18。本研究从宫颈癌人群筛查的角度探讨其可行性及应用价值。1材料与方法1.1材料1.1.1研究对象2011年4月在河南省新密市两个宫颈癌高发乡镇（超化镇和平陌镇），以村为单位，招募了856例年龄21岁、有性生活史、非妊娠期、无宫颈手术史的妇女进行宫颈癌筛查，所有参与对象均签署知情同意书。最终有853例完成了全部筛查流程并纳入统计分析，其中排除3例cobas4800HPV检测结果无效的妇女。研究方案通过中国医学科学院肿瘤医院及肿瘤研究所的伦理委员会批准。1.1.2筛查程序对符合筛查条件且自愿接受筛查的妇女建立档案、注册登记、签署知情同意书、接受流行病学调查，进行cobas4800HPV检测、高危型HPV第二代杂交捕获试验检测、ThinPrep液基细胞学和阴道镜检查，必要时阴道镜下行宫颈活检术。病理诊断由中国医学科学院肿瘤医院的病理医生完成，以病理确诊的CIN2以上病例评价筛查方法的准确性。1.2方法1.2.1高危型HPV第二代杂交捕获试验检测以窥器暴露宫颈，用干棉球轻轻擦去宫颈口分泌物，使用Qiagen宫颈取样刷顺时针旋转刷子3～5周刷取宫颈脱落细胞标本，并将带有标本的刷子放入DCMTM样本收集液中，折断采样刷多余的部分，进行HC2检测。HC2是一种应用微孔板化学发光进行信号放大的核酸杂交检测方法，采用96孔平板法，可一次检测13种高危型HPVDNA的类型（HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68），并可同时检测样本中HPVDNA的病毒载量。阳性判断标准：光量读数与阴性测定值比值1.0为阳性。1.2.2ThinPrep液基细胞学检查使用ThinPrep细胞学采样刷，顺时针旋转3～5周刷取宫颈鳞柱交界处脱落细胞，将收集的细胞保存于PreservCyt细胞保存液中，保存液中的部分标本经ThinPrep2000系统程序化处理后，制成直径为2cm的薄层细胞涂片，95%酒精固定，巴氏染色。采用TBS（theBethesdasystem）分级系统进行细胞学诊断。1.2.3cobas4800HPV检测cobas4800HPV检测使用ThinPrep液基细胞学相同的标本。该项检测是一种通过多聚酶链反应（PCR）扩增检测高危型HPVDNA的体外定量检测技术，可分别检测HPV16、HPV18及其他12种高危HPV型（31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66和68）。1.2.4阴道镜检查及活检在盲法下行阴道镜检查。采用5%醋酸溶液涂抹于宫颈表面，1min后在阴道镜下观察宫颈的变化，根据出现醋白上皮的厚度、范围、表面形态和浑浊度等做出初步诊断。正常宫颈无醋白上皮，低度鳞状上皮内病变（lowgradesquamousintraepitheliallesion，LSIL）包括HPV感染或