全国临床检验操作规程

全国临床检验操作规程（第3版）精液检查一．标本收集1.在3个月内检查2次至数次，二次之间间隔应7天，但不超过3周。2.采样前至少禁欲3天，但不超过7天。3.采样后1h内送到检验科。4.用清洁干燥广口塑料或玻璃小瓶收集精液，不宜采用避孕套内的精液。某些塑料容器具有杀精子作用，但是否合适应事先做实验。5.应将射精精液全部送检。6.传送时温度应在20~40℃。7.容器必须注明患者姓名和（或）识别号（标本号或条码），标本采集日期和时间。8.和所有体液一样，精液也必须按照潜在生物危害物质处理，因为精液内可能含有肝炎病毒、人类免疫缺陷（病毒）和疱疹病毒等。二．一般性状检查一般性状检查包括记录精液量、颜色、透明度、粘稠度和是否液化。1.外观正常精液呈灰白色或乳白色，不透明。棕色或红色提示出血。黄色可能服用某种药物。精子浓度低时精液略显透明。正常精液是一种均匀黏稠的液体，射精后立即凝固，30min后开始液化。若液化时间超过60min考虑为异常，应记录这种情况。正常精液可含有不液化的胶冻状颗粒。2.量用刻度量筒或移液管测定。正常一次全部射精精液量约2~5ml。精液量过多或过少是不育的原因之一。3.黏稠度在精液全部液化后，用Pasteur滴管吸入精液，然后让精液依靠重力滴落，并观察拉丝长度。正常精液呈水样，形成不连续小滴。黏稠度异常时，形成丝状或线状液滴（长度大于2cm）。也可使用玻璃棒或注射器测定黏稠度。4.酸碱度用精密试带检查。正常人pH为7.2~8.0，平均7.8。三．精子存活率精子存活率（motility）用活精子比例来反映。1.伊红染色法【试剂】5g/L伊红Y染色液：伊红Y0.5g，加生理盐水至100ml。【操作】（1）在载玻片上加新鲜精液和伊红溶液各1滴，混匀后，加上盖玻片，30s后在高倍镜下观察，活精子不着色。死精子染成红色。（2）计数200个精子，计算未着色（活精子）的百分率。2.伊红-苯胺黑染色法【试剂】（1）10g/L伊红Y染色液：伊红1g，加蒸馏水至100ml。（2）100g/L苯胺黑染色液：苯胺黑10g，加蒸馏水至100ml。【操作】（1）取小试管，加新鲜精液和伊红溶液各1滴，混匀。（2）30s后，加苯胺黑溶液3滴，混匀。（3）30s后，在载玻片上，加精液-伊红-苯胺黑混合液1滴，制成涂片，待干。（4）油镜下观察，活精子为白色，死精子染成红色，背景呈黑色，计数200个精子，计算未着色活精子的百分率。3.精子低渗膨胀试验（HOS）【试剂】膨胀液：枸橼酸钠0.735g，果糖1.351g，加蒸馏水至100ml。分装，-20℃冷冻保存，使用前解冻，并充分混匀。【操作】（1）取小试管，加1ml膨胀液，37℃预温5min。（2）加0.1ml液化精液，轻轻搅匀，在37℃孵育至少30min。（3）在相差显微镜下观察精子，膨胀精子为尾部形状发生变化的精子，即活精子。计数200个精子，计算膨胀精子的百分率。【参考区间】在排精30~60min内，约有70%以上精子应为活动精子。精子低渗膨胀试验应有60%以上精子出现尾部膨胀。【附注】（1）如室温低于10℃时，应将标本先放入37℃温育5~10min后镜检。（2）某些标本试验前就有尾部卷曲的精子，在HOS试验前，计算未处理标本中尾部卷曲精子的百分数，实际HOS试验结果百分率就等于测定值减去未处理标本中尾部卷曲精子百分率。（3）HOS也是精子尾部膜功能试验。四．精子活力WHO推荐一种无需复杂设备而能进行简单精子活力（activity）分级的方法。【操作】取10μl标本涂片，连续观察至少5个视野，对200个精子进行分级，首先计数a级和b级精子，随后在同一视野内计数c级和d级精子。【结果判断】根据下述标准把精子活力分为a、b、c、d四级。a级：快速前向运动：37℃时速度≥25μm/s，或20℃时速度≥20μm/s（25μm大约相当于精子5个头部的长度，或半个尾部的长度）。b级：慢速或者呆滞的前向运动。c级：非前向运动（＜5μm/s）。d级：不动。【参考区间】正常精液采集后60min内，a级+b级精子达50%以上。五．精子计数【试剂】精子稀释液：碳酸氢钠5g，40%甲醛溶液1ml，蒸馏水100ml，待完全溶解过滤后使用。【操作】1.于小试管内加精子稀释液0.38ml，吸液化精液20μl，加入稀释液内摇匀。2.充分摇匀后，滴入改良Neubauer血细胞计数池内，静置1~2min，待精子下沉后，以精子头部作为基准进行计数。3.如每个中央方格内精子少于10个，应计数所有25个中方格内的精子数。4.如每个中央方格内精子在10~40个，应计数10个中方格内的精子数。5.如每个中央方格内精子多于40个，应计数5个中方格内的精子数。【结果判断】精子数=计数结果*25*1*20*103/ml计数中方格数计数池高度=计数结果*1*5*105/ml计数中方格数计数池高度【参考区间】正常男性≥20*106/ml【附注】1.收集精液前避免性生活3~7天。收集精液标本后应在1h内检验，冬季应注意保温。2.出现一次异常结果，应隔1周后复查，反复查2~3次方能得出比较正确的结果。3.如低倍镜、高倍镜检查均无精子，应将精液离心沉淀后再涂片检查，如两次均无精子，报告“无精子”。六．精子形态观察【试剂】改良巴氏染色液、Shorr染色液、Diff-Quik快速染色液：商品化染色液一般质量均佳，但实验室也可自行配制。【操作】1.在载玻片上滴1滴精液，约5~20μl，采用压拉涂片法或推片法制片。2.待干后，巴氏染色法用等量95%乙醇和乙醚混合液固定5~15min；Shorr染色法用75%乙醇固定1min；Diff-Quik快速染色法用甲醇固定15s。3.作改良巴氏、Shorr或Diff-Quik染色，然后在油镜下观察。4.精子头部顶体染成淡蓝色，顶体后区域染成深蓝色，中段染成淡红色，尾部染成蓝色或淡红色，细胞质小滴位于头部后面或中段周围，巴氏染色染成绿色。【结果判断】评估精子正常形态时应采用严格标准，只有头、颈、中段和尾部都正常的精子才正常。精子头的形状必须是椭圆形，巴氏染色精子头部长4.0~5.0μm，宽2.5~3.5μm，长宽之比应在1.50~1.75，顶体的界限清晰，约占头部的40%~70%。中段细，宽度1μm，约为头部长度的1.5倍，且在轴线上紧贴头部，细胞质小滴应小于正常头部大小的一半。尾部应是直的、均一的，比中段细，非卷曲，其长约为45μm。所有形态学处于临界状态的精子均列为异常。异常精子可有：①头部缺陷：大头、小头、锥形头、梨形头、圆头、无定形头、有空泡头、顶体过小头、双头等；②颈段和中段缺陷：颈部弯曲、中段非对称地接在头部、粗的或不规则中段、异常细的中段等；③尾部缺陷：短尾、多尾、发卡形尾、尾部断裂、尾部弯曲、尾部宽度不规则、尾部卷曲等。【参考区间】正常人精液中正常形态者≥30%（异常精子应少于20%，如超过20%为不正常）。七．精子凝集精子凝集是活动精子以各种方式，如头对头，尾对尾或头对尾等彼此粘在一起。以分级方式报告，从“-”（没有凝集）~“3+”（所有可动的精子凝集到一起）。凝集的存在，提示可能为免疫因素引起不育。八．非精子细胞精液含有的非精子细胞成分，成为“圆细胞”，这些细胞包括泌尿生殖道上皮细胞、前列腺细胞、生精细胞和白细胞。正常人精液中：圆细胞5*106/ml。正常精液中白细胞，主要是中性粒细胞，数量不应超过1*106/ml。过多提示感染，为白细胞精子症。九．其他成分精液中可以有结晶体、卵磷脂小体、淀粉样体、脂滴、脱落上皮细胞等。十．临床意义1．正常精液呈灰白色，久未排精者可呈淡黄色；离体30min后，完全液化。根据精液检查结果，临床上常用于诊断男子不育症及观察输精管结扎术后的效果。2．正常精子活力一般在a级≥25%。如活力a级25%；a级+b级50%可成为男性不育的原因。3．精索静脉曲张症患者精液中常出现形态不正常的精子。4．血液中有毒性代谢产物、接触铅等污染物、应用大剂量放射线及细胞毒药物等可使精子形态异常。前列腺液检查一．标本收集临床医师作前列腺按摩术后，采集标本于清洁玻片上，立即送检。二．检查内容记录液体颜色、是否混有血液、有无脓块等。湿片镜检，高倍镜下观察白细胞、红细胞、卵磷脂小体，其次为上皮细胞、精子、淀粉样体等。革兰染色后检查细菌。三．报告方式1．卵磷脂小体报告在高倍视野中分布数量。2．白细胞、红细胞报告方式与尿液相同。3．如找到精子、上皮细胞应报告。【参考区间】正常人卵磷脂小体为多量或满视野；白细胞10个/HP；红细胞5个/HP。【临床意义】前列腺炎时，白细胞增多，可找到细菌，卵磷脂小体常减少。前列腺癌时，可有血性液体，镜检见多量红细胞，细胞学检查可见癌细胞。前列腺患滴虫感染者亦可找到滴虫。