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化学原料药质量研究及原始记录常见问题讨论余立yuliyy8716@vip.sina.com010-83226198(O)特性研究-理化、稳定性对照品研究-标化、校正因子方法研究-建立、验证原料药研究的特点杂质研究-工艺、残留溶剂1432建立标准时要考虑的问题200820072006200520042003200220012000常见研究方法误区以及供参考的经验和体会新版药典动态对化学原料药质量研究的影响原始记录与资料表达常见问题及改进建议主要讨论内容吸收系数新药：尽可能研究详细、全面、规范仿制药：重点考察与文献值的一致性《中国药品检验标准操作规范》注意测定方法的准确性与规范性!物理常数研究理化常数研究吸收系数实验样品的纯度-精制品、干燥品实验的条件-温湿度记录！（环境、仪器）温度校正仪器台间差/编号物理常数研究理化常数研究碘值、皂化值、酸值引湿性比旋度熔点相对密度溶解度吸收系数黏度凝点理化特性与常数研究•新药：考察物质的溶解性能•为药物制剂的剂型选择•为提取、精制工艺的溶剂选择•为检验时供试品溶液的制备溶剂选择•提供参考信息•仿制药：考核仿制药品质一致性提供佐证•（晶型、微粉粒径、成盐程度、纯度）溶解度试验的目的•问题一：溶剂选择种类不当或不足•毒性（三氯甲烷）；后续试验缺参考•问题二：提供数据不足，定位理由不充分•两端（极易溶解、不溶）才可一点确定•不给折算值•问题三：试验样品质量•精品-与文献核对•3批-确定自己质量标准溶解度试验常见的问题•按溶解度大小依次排列•极易溶解不溶或几乎不溶•在同一溶解档中按溶剂极性大小排列•水、甲醇、乙醇；乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚等；•热水或热乙醇放在同一档之首（不用其他热溶剂）溶解度的表述酸和碱（注明浓度）中的溶解度放最后吸收系数物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸光度数值。研究意义及应用趋势的改变作为物理常数：新药考察与仿制药核对溶出度或含量均匀度用其计算一定研究并放入标准不用其计算但有紫外吸收也应研究但不用放入标准拓展鉴别用途吸收系数研究的关注点溶剂选择考虑制剂测定用溶剂一般大于100才用于制剂测定，放入标准测定溶液浓度既要吸光值在0.3～07之间，也要兼顾制剂测定溶液浓度限度范围一般为±3%熔点测定药典收载三种方法第一法：测定易粉碎的固体药品第二法：测定不易粉碎的固体药品（如脂肪、石蜡等）第三法：测定凡士林或其他类似物质原始记录问题-方法不对、信息不全干燥；校正；升温速率；传温液；初熔；全熔；现象；次数（3次）标准中的熔点品种在标准中收载熔点需注意：第一：由于采用传温液，故收载的熔点宜在200℃以下。熔点在200℃以上的视需要而订。第二：应是在熔点以下遇热时晶型不转化，初熔点和终熔点易于判断的品种；对熔融分解且不易明确判断的品种也可不订。对于熔融时同时分解或另有要求的品种，均应在标准中标明。第三：限度范围一般为2～4℃，包括初熔和全熔温度个别可放宽至6℃；另加“熔距”限制的除外药典附录变化提示－引湿性试验指导原则•重金属检查法：•pH测定法：•不溶性微粒检查法：•可见异物检查法：•渗透压摩尔浓度：2010年版2005年版（1）供试品符合药品质量标准全检之后（2）称量瓶试验前一天置25±1℃80±2%环境中预引湿（3）瓶盖同条件放置（1）供试品干燥失重或水分符合限度要求（2）称量瓶没要求预引湿（3）瓶盖没提及引湿性试验原始记录-容易出现的错误实验日期（全检合格之后）实验时间（24小时）实验温度、湿度称量瓶提前放置记录吸湿平衡曲线与临界相对湿度在相对干燥或较低相对湿度环境中，一些药物或辅料不吸湿或很少吸湿。随着环境相对湿度的增大，吸湿量缓慢增加。当相对湿度到达某一定值时，药物的吸湿量急剧上升。吸湿量急剧上升时的相对湿度(RH)即为该药物的临界相对湿度。药物的临界相对湿度越大，则表明该药物不容易吸湿，相反则容易吸湿。药物生产或贮存在该药物的临界相对湿度以下环境，能够延长药物吸湿平衡到达的时间。不同无机盐饱和溶液产生的相对湿度•无机盐温度（℃）相对湿度（RH%）•磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O2098•硫酸锌ZnSO4·7H2O2090•硫酸氢钾KHSO42086•硫酸铵(NH4)2SO42081•氯化铵NH4Cl20～2579•醋酸钠NaC2H2O2·3H2O2076•溴化钠NaBr·2H2O2058•重铬酸钠Na2Cr2O7·2H2O2052•氯化钙CaCl2·6H2O24.531•醋酸钾KC2H3O22020•氯化锂LiCl·H2O2015Page18干燥失重重金属溶液的澄清度硫酸盐酸碱度氯化物水分铵盐结晶性一般检查项研究2010年版药典变化提示pH测定法：氢氧化钙标准缓冲液是要用25℃时取饱和溶液的上清液，所以临用时需核对温度才能取用上清液！纯化水：取本品100ml，加饱和氯化钾溶液0.3ml极弱电解质品种的pH值测定可采用相同的测定方法药典附录通用检测方法变化提示•重金属检查法：甲管（标准）＋乙管（供试品）+丙管（标准+供试品）如丙管颜色浅于甲管则将一法改为二法进行检查勘误！第二法规定乙管（标准）中显出的颜色与甲管（供试品）比较，不得更深。药典附录通用检测方法的使用•氯化物5.0ml常用硫酸盐2.0ml检查法铵盐2.0ml铁盐1.0ml•注意标准液的取用量！•应保证灵敏检测的需要！•建议：必要时改用仪器法判断•2015版药典科研课题纯化水、注射用水和灭菌注射用水的增修订纯化水、注射用水的修订增订：电导率氯化物硫酸盐钙盐二氧化碳总有机碳测定易氧化物药典中新检验技术的应用第一次飞跃第二次飞跃纯度控制杂质控制杂质谱控制有关物质的研究－杂质质控理念的变迁杂质谱的定义•ImpurityProfile（杂质谱）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.•对存在于药品中所有已知杂质和未知杂质的总的描述。已鉴定杂质IdentifiedImpurity特定杂质SpecifiedImpurity潜在杂质PotentialImpurity杂质谱ImpurityProfile已确证了结构特征的杂质在质量标准中规定检查并有自己限度标准的杂质。已鉴定或未鉴定理论推测在生产或贮藏过程中可能产生的杂质实际产品中不一定存在存在于药品中的所有杂质组成或模式Clicktoedittitlestyle选择最优多种互补新杂质研究比较杂质的数与量，一致或基本一致，物质基础相同决定可否桥接已上市药品的安全有效性结果杂质谱比较杂质谱的比较原研标准EP7.0USP34JP15国内标准拟定标准方法梯度洗脱色谱条件………210nm254nm梯度线性洗脱色谱条件………210nm254nm等度洗脱HPLC色谱条件………210nm检测等度洗脱HPLC色谱条件210nm检测系统适用性限度新方法分析方法的有效性（氨苄西林钠/舒巴坦钠）原方法中国抗生素杂志，2009，34：734在对各国药典方法比较的基础上确定分析方法杂质谱的比较－多种互补•不同色谱系统（流动相、色谱柱、波长）•不同检测器（uv、DAD）•不同原理的方法•-分离或检测杂质谱的比较•平行列表、逐峰比较•新杂质个数•单一新杂质量（0.1%）•新杂质总量所占比例（2.0%?）峰序号溶剂峰对照药峰/量自制品峰/量峰性质新增杂质总量10.20.20.2溶剂峰22.2/0.2%34.2/0.2%新增杂质48.2/0.5%8.2/0.3%原有杂质511.8/0.5%苯乙胺618.2/0.5%新增杂质（苯乙醇）杂质总量1.2%1.0%0.7%杂质谱的比较结构确证常用的方法热分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析质谱紫外红外毒性快速评价平台•斑马鱼毒性快速评价平台，对杂质的胚胎毒性、神经毒性，心脏毒性等进行评价。优点：–杂质用量少–无需知道杂质结构–实验周期短（3－4天一个周期）药物耳毒性检测利用一种特殊染料对斑马鱼幼体头部耳蜗区神经丘毛细胞的染色，检测毛细胞的存活状态，来判断检测物的耳毒性。下图中红色圈示耳蜗区域；给药组中红色箭头示给药后毛细胞减少，黄色圈示给药后1神经丘消失。给药后系统对照组（正常幼体）色谱峰的归属•建议表达方式：平行列表、图谱叠加•要搞清的重点问题：•杂质产生的途径、属性？•杂质产生需要的条件？峰序号溶剂峰未破坏酸碱空白酸破坏碱破坏峰性质10.2分钟0.2分钟0.2分钟0.2分钟0.2分钟溶剂峰20.5分钟0.5分钟0.5分钟试剂峰32.2/0.2%2.2/0.2%2.2/0.2%工艺杂质48.2/0.3%8.2/11.8%8.2/0.3%工艺杂质和/或酸降解杂质511.8/0.5%11.8/1.5%11.8/1.9%工艺杂质和/或酸碱降解杂质618.2/0.5%碱降解杂质杂质总量1.0%13.5%2.9%强制降解试验•强制降解条件的摸索控制记录•杂质增长10%~20%最佳不一定所有条件•各峰分离程度的考察比较•色谱系统的评价•以图谱和数据为基础，针对实验目的，作出相应的结论！物料守恒建议表达方式：列表•要搞清的重点问题：•是否有漏检的杂质？•是否有需要用校正因子计算的杂质？•可接受的限度？（仪器误差+响应因子）•个人观点！杂质含量的计算对照品外标法主成分自身对照法加校正因子的自身对照法面积归一化法标准举例-注射用盐酸阿糖胞苷项目2005年版2010年版含标量93.0％～107.0％93.0％～107.0％鉴别2项2+1项（+HPLC）检查干燥失重水分酸度酸度----溶液的澄清度----有关物质梯度、校正、3个特定杂质----异常毒性----细菌内毒素含量测定UV吸收系数法HPLC外标法对照品测定随机误差仪器误差制备精制标定校正因子多组分生化药的特点校正因子测定常见问题质量研究的标尺-对照品/标准品购买的对照品/标准品权威性真实性准确性原始记录核查需要检查的问题：-质量研究所用的对照品/标准品是否具有合法来源？-如果质量研究所用对照品/标准品为自制品，有否精制和标化记录与标化结果？使用购买的对照品对照品权威性真实性准确性-发票、标签、批号、分析报告单、盐基/碱基、水分•详细精制方法与记录、质量检验报告标定方法与结果•详细富集精制方法与记录、质•量检验报告、标定方法与结果详细合成精制方法与记录、质量检验报告、标定方法与结果粗品精制富集精制合成精制使用自制的对照品进行结构确证热分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析质谱紫外红外200820072006200520042003200220012000数据标定：用正确的方法由至少3位实验者，不同仪器进行不少于10个数据的测定/核对待标品质量考察：证明不仅是对的而且还是好的对数据进行数理统计处理对照品的标定•标定者测定结果（%）n均值%RSD•1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%0.17%•2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%0.12%•3.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%0.09%•经Corchan检验，三位标定者的方差没有差异，均来自同一正态分布。用Dixon法检验15组数据中的最大值99.25%，最小值98.82%均非离群值。•T1-0.05×S•置信区间μ=X±=99.08±0.068•n1/2•标定结果的置信区间为99.15~99.01%，因此，本批对照品的色谱纯度总均值为99.08%。•！考虑仪器台间差与人员等单次检验的误差对照品外标法优点缺点50%定位易定量准要求高成本高70%有条件时首选的方法主成分自身对照法优点缺点50%不定位成本低定量粗70%没条件时首选的方法面积归一化法优点缺点50%不需定位成本低定量粗70%不提倡使用的方法影响多重复性差加校正因子的主成分自身对照法优点缺点50%成本较低定量较准确需标因子定位难70%杂质与主成分响应因子差异大（超过0.9~1.1）且对照品不稳定或昂贵时选用的方法校正因子响应因子使用与