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呼吸道感染疾病检测新技术姚俊飞呼吸道病原体感染概况上呼吸道感染鼻腔、咽、喉部-----常见病因病毒，少数为细菌；下呼吸道感染(最常见的感染性疾患)气管、支气管、肺部----由病毒、细菌、支原体、衣原体、军团菌等微生物引起。以社区获得性肺炎(CAP)多见呼吸道病原体感染概况一、典型“致病菌”细菌：肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌等症状：典型，咳嗽、脓性痰、胸膜炎性胸痛，一般都伴有发热，或有脓血痰病史：①悠久，古代的“瘟疫”很多细菌性肺炎②重症致死性肺炎很多是细菌性③上世纪50年代以前的肺炎90%以上为细菌性肺炎，现在报道约在40%左右④肺炎链球菌大约占在60%呼吸道病原体感染概况二、非典型病原体①进展的、开放的概念，始用于20世纪30年代末，60年代首次发现了非典型的病原体——肺炎支原体②泛指各种能引起肺炎的、临床表现与典型肺炎不同的各种病原体（广义）③临床症状不典型，差异大④在CAP中感染的比例逐年增加，据报道大约占40-60%，逐渐引起各国医疗工作者注意（一）最常见的非典型病原体肺炎支原体、肺炎衣原体、军团菌等（狭义的非典型病原体）①感染比例高，超过“非典”50%②临床症状：干咳为主，少痰或无痰，肺外症状较常见明显，尤其军团菌感染，表现相对较重，多脏器受累明显。可有高热、耳鸣、相对缓脉、血尿、腹痛、腹泻、肝酶升高、电解质紊乱、精神神经症状等③β-内酰胺类（青霉素类、头孢类）、氨基糖苷类（链霉素）等药物无效④治疗：呼吸喹诺酮类、大环内酯类（二）病毒类流感病毒、副流感病毒、腺病毒、呼吸道合胞病毒、冠状病毒、禽流感病毒等①季节性或区域性流行②临床症状：干咳为主，少痰或无痰、呼吸困难，低氧血症③治疗：主要依靠对症支持治疗。早期抗病毒治疗可能效果较好。预后取决于病毒类型和宿主对病毒的反应（三）真菌性肺炎念珠菌，曲菌，新型隐球菌，放线菌，组织胞浆菌，毛霉菌属等①除组织胞浆菌为原发吸入性感染外，多数为条件致病②多发生在免疫低下患者和长时间接受广谱抗生素治疗的患者白色念珠菌肺炎各病原体在CAP中感染率病原菌感染率（%）肺炎链球菌27肺炎支原体15流感嗜血杆菌12肺炎衣原体7军团菌4.8病毒类8.5混合感染（两种或以上）17其他及不明原因13a在养老院获得的肺炎数据来源：《各国社区获得性肺炎指南对非典型病原体的重视情况》《肺炎的诊断与治疗研究进展》《重视非典型病原体在CAP致病中的作用》《要重视非典型病原体在小儿呼吸道疾病中的致病作用》等呼吸道病原菌合并感染的分析Morethanonepathogenwasidentifiedin27(34%)patientsinwhomanetiologicaldiagnosiswasestablished.ItisconcludedthatRTIiscausedbyabroadspectrumofetiologicalagents,aconsiderablenumberofpatientshavingevidenceofinfectionwithmorethanonepathogen.------EurJClinMicrobiolInfectDis(1998)17:685–689Oneormoreviralagentswereidentifiedin369(45.9%)cases;ofwhich3.3%weremixedinfections.-------PediatricInfectiousDiseaseJournalSingleinfectionswerenotedin48(74%)whereasmixedinfectionsoccurredin17(26%)of65infectedinfants.-------PEDIATRICSVol.68No.3September1981,pp.322-329In20（127）patientstherewasevidenceofinfectionwithmorethanonemicroorganism.-------EurJClinMicrobiol.1985Jun;4(3):268-72.呼吸道病原菌合并感染的分析119例小儿肺炎细菌感染97例，细菌感染及肺炎支原体同时感染19例。------检验医学与临床2009年12月第6卷第23期在SARS发病前阶段，合并MP感染阳性率为69．3％(39／56)；发病后阶段，合并MP感染阳性率为l8．6％(8／43）------JoumalofTropicalMedicineVo1．3No．3Sep．2003Mpn和Cpn合并阳性有27例．占总阳性数的45．0％------中国优生与遗传杂志2001年第9卷第3期9例(1．2％)患儿MP-IgM和Cpn．IgM同时阳性；------世界感染杂志2006年第6卷第4期本次调查同时检测了8种感染呼吸道的常见病毒，结果提示Mp、Cp多混合有病毒感染。-------中国人兽共患病杂志：1002-2694(2005)03—0269-02一项来至亚太地区的研究表明肺炎链球菌是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌近年来随着检测手段的提高，非典型病原体亦是社区获得性呼吸道感染的常见致病菌之一2003年11月-2005年3月份，595例，22个城市，33家医院HeLixian,Beijie,et.al.2005.Unpublisheddata我国CAP病原学构成-流调12003年12月-2004年10月份，610例成人CAP，12家医院刘又宁，陈民钧等，2006，中国结核呼吸杂志我国CAP病原学构成-流调2欧洲一项回顾性评价1511例CAP患者病原学的研究结果（1996-2001）共计610例患者有病原学证据可供评价，其中细菌/非典型病原体致感染患者采用常规方法检测病原体，混合感染和化脓性肺炎患者具有血清学诊断证据其中细菌合并非典型病原体最常见，占10.2%共入组665例病人，其中完成非典型病原体检测的为610例刘又宁等．中华结核和呼吸杂志，2006;29(l):3-8．总结为：肺炎链球菌仍是我国CAP的主要致病菌非典型病原体在CAP中的作用不容忽视混合感染常见，细菌合并非典型病原体感染最常见特殊人群--肾病综合征和呼吸道感染1、感冒时，免疫沉积→肾病加重感冒时，人体内的免疫细胞会吞吃入侵体内细菌及病毒，形成一种抗体，而后死亡，达到消灭病菌的功能，以确保人体不受影响。某些人因为体质弱或其它因素，体内免疫细胞比正常的人少，免疫功能不够强，因此免疫细胞有可能不但没有吞吃病菌，而只是暂时把病菌包容起来，身体中的病菌抗体与病菌本身结合成一种免疫复合物，随着血液循环，到了肾脏时，会沉积到肾小球的基底膜，从而对肾脏有一种损害，使大量蛋白流失，最终导致肾病综合征、肾炎等肾病。2、肾病患者易成感冒高发人群由于许多慢性肾病患者长期使用免疫抑制剂或细胞毒药物来治疗，导致免疫力下降，而且肾病患者多不适宜进行疫苗接种，加之久病体虚，所以肾病患者是春季感冒的高发人群；感冒是肾病复发、加重诱因，感冒、感染呼吸道疾病会激活自身的免疫反应，而造成免役复合物沉积于肾脏的病变部位，诱发或加速肾脏纤维化，导致肾功能的进行性下降。肾病患者免疫机制土耳其学者Guven等报告，肾病患儿接种肺炎疫苗后，尽管最初抗体反应较好，但随着时间的延长，其抗体水平不能得到保持，提示这些患儿对感染的易感性仍然存在肾病综合征患儿(NS)的IgG明显低于正常人,IgM显著高于正常人,IgA与正常人无差异.—《肾病综合征患者血清中C3、C4、IgG、IgA、IgM的分析》对肾病综合征患者的随访结果表明：不论活动期、缓解期或停药2年，均有IgG明显降低和IgM明显升高。—《肾病综合征缓则低IgG血症原因的探讨》特殊人群--肿瘤和呼吸道感染九项呼吸道病原体IgM抗体检测试剂西班牙VIRCELL公司：成立于1991年。专业从事呼吸道病原体检测试剂盒的研发和生产。西班牙VIRCELL公司研发生产的九项呼吸道感染病原体IgM抗体检测试剂盒涵盖了以上所有最常见的非典型呼吸道病原体；联合检测，避免漏检，特别是避免混合感染的漏检。至2012年国内已有超过200家的大型三甲医院、CDC在开展、使用。产品简介全国开展医院的部分名单:中国人民解放军总医院上海交通大学医学院附属瑞金医院复旦大学附属华山医院复旦大学附属中山医院中山大学附属第一医院北京大学第一医院华中科技大学同济医学院附属同济医院第二军医大学长海医院南方医科大学南方医院上海交通大学医学院附属仁济医院中南大学湘雅医院山东大学齐鲁医院中山大学附属第三医院第二军医大学长征医院上海市第六人民医院浙江大学医学院附属第二医院上海交通大学医学院附属新华医院复旦大学附属儿科医院载玻片1、独特的载片包被工艺，视野清晰，显色持久2、一人一片，专人专用3、一片九项载玻片包被有下列抗原：1.嗜肺军团菌血清1型（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集）2.McCoy细胞中的肺炎支原体3.Q热立克次体II期（悬浮于0.5%正常鸡卵黄囊中以增强抗原吸附性和避免细菌聚集）4.肺炎衣原体（原生小体）5.HEp-2细胞中的腺病毒6.HEp-2细胞中的呼吸道合胞病毒7.LLC-MK2细胞中的甲型流感病毒8.LLC-MK2细胞中的乙型流感病毒9.LLC-MK2细胞中副流感病毒1、2和3型10.质控检测原理：1、IgM抗体，利于早期诊断2、血清标本，易采集试剂盒组成及用途组分成分和用途载玻片检测的物理载体为聚四氟乙烯，包被针对检测物的特异性抗原，包装袋内有硅胶干燥剂。阴阳性对照用于证明试剂盒及试验的有效性，含有人血清及防腐剂。吸附剂羊抗人IgG抗血清用来吸附人IgG避免干扰IgM检测。结合物荧光素标记的抗人免疫球蛋白结合物，含有伊文思蓝（对比染色）和蛋白稳定剂。和抗原抗体复合物反应，并显色。封闭介质甘油缓冲液，便于观察。磷酸盐缓冲液(PBS)用于洗涤步骤，从反应介质中除去未结合的免疫球蛋白和结合物。检测结果显示-阴性结果图谱POSITIVENEGATIVEPOSITIVENEGATIVE检测结果显示-阳性结果图谱不同地区儿童呼吸道感染病原体阳性率LPMPCOXCPADVRSVINFAINFBPIV总阳性率南京地区1.5%32.4%0.1%0.2%4.0%6.7%0.4%10.7%7.3%45.2%武汉地区0.20%21.8%0.20%0.13%4.03%2.27%0.07%12.69%2.13%29.35%北京地区0.05%21.8%0.40%0.60%1.82%1.44%0.18%9.67%5.90%33.02%天津地区2.06%23.9%0.30%0.35%6.77%3.48%0.76%12.49%10.95%37.61%成都地区0.15%16.2%0.58%0.42%2.18%1.57%0.12%18.05%2.82%36.86%临床问题总结1、查到病毒阳性或弱阳性临床意义不大，因病毒属有自限性特点？病毒性呼吸道感染虽属于自限性疾病，主要引起上呼吸道疾病，但具有较强的传染性，而且可引起严重并发症病毒性呼吸道感染疾病的预后取决于病毒类型和宿主对病毒的反应临床主要依靠对症支持治疗，早期抗病毒治疗可能效果较好。2.间接免疫荧光法的敏感性、特异性是多少？什么是敏感性？什么是特异性？采用方法学对比进行阴阳性符合率分析，阳性符合率代表灵敏度，阴性符合率代表特异性，结果如下：病原体对比方法样本数量阳性符合率阴性符合率嗜肺军团菌IFA8294.4%98.4%肺炎支原体ELISA6296.8%100.0%Q热立克次体IFA74100.0%97.6%肺炎衣原体IFA61100.0%98.0%腺病毒ELISA7485.7%97.0%呼吸道合胞病毒ELISA9793.8%100.0%甲型流感病毒ELISA4694.1%96.4%副流感病毒ELISA40100.0%96.4%副流感病毒ELISA36100.0%96.3%3.与凝集法查支原体不同在哪里？哪