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厦门基科生物科技有限公司是一家专注于基因科技服务及创新的生物科技企业。公司已经建立了完善的基因科技研究平台、规范的技术服务流程和严格的质量控制体系，公司专注于为全球高校、科研机构、医院、生物技术公司等提供专业的技术服务及创新的基因检测技术及相关产品。基科生物提供：探针（TaqmanMGB、分子信标（Molecularbeacon）、FRET探针、Scorpion探针等）设计及合成、病毒及细菌等微生物检测、短串联重复序列（STR）检测、基因表达定量（qPCR）检测、遗传突变检测、肿瘤突变检测、单核苷酸多态性（SNP）分型、DNA甲基化检测、基因拷贝数变异（CNV）检测、基因检测试剂开发等服务。基科生物提供多种解决方案，包括高分辨熔解曲线（HRM）、多重探针连接扩增（MLPA）、连接酶检测反应（LDR）、连接酶链式反应（LCR）、多重聚合酶扩增反应（mPCR）、扩增阻碍突变系统（ARMS）、实时荧光PCR（realtimePCR）、毛细管电泳（CE）分析等技术。选择专业服务，选择基科生物！PCR与real-timePCR厦门基科生物科技有限公司公司电话：0592-2082126电子邮件：sales@chinagenex.com公司网站：公司地址：福建省厦门市曾厝垵北路一号俊秀楼一层WhatisPCR?MonicaLewinskyBillClintonThe42ndPresidentoftheUnitedStatesfrom1993to2001……一滴残留在裙子上的精液使得美国总统BillClinton不得不坦承他与白宫实习生MonicaLewinsky有不正当的关系。因为他知道现在的生物科技就连一个精子也能被用来做为证据……一个关于爱与背叛、性与政治的故事……这种将极微量的生物标本化为可供鉴定的现代技术正是PCR(Polymerasechainreaction)----聚合酶链式反应具有的特色之一。这也是分子生物医学令人震撼的一例。Dr.KaryBanks.Mullis（1944－）（PolymeraseChainReaction）是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。一、PCR的定义二、PCR的原理No.ofNo.AmpliconCyclesCopiesofTarget122438416532664201,048,576301,073,741,8241cycle=2Amplicon2cycle=4Amplicon3cycle=8Amplicon4cycle=16Amplicon5cycle=32Amplicon6cycle=64Amplicon7cycle=128Amplicon①模板：单链或双链DNA②引物：16-30bp合成的寡核苷酸③DNA聚合酶：耐热的DNA聚合酶④底物：四种脱氧三磷酸核苷（dNTP:dATP、dTTP、dCTP、dGTP)⑤Mg2+：DNA聚合酶的激活剂三、PCR的基本要素Real-timePCRreal-timePCR，顾名思义，指的是实时定量PCR。在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实现了实时监测整个PCR进程，对起始模板进行定量分析的方法。一、real-timePCR的定义二、real-timePCR常用参数Tm值：双链DNA的50%解为单链时的温度三、与普通PCR的区别•普通PCR技术：在PCR结束后对终点产物进行定量分析。•实时定量PCR技术：实时检测PCR扩增，在扩增的指数期对起始模板进行定量。四、常用检测荧光类型1、非特异性SYBRGreenI（染料）2、特异性FRET（荧光共振能量传递）TaqManMolecularBeacon（分子信标）SYBRGreenI•SYBRGreen1结合到双链DNA的小沟部位•SYBRGreen1染料只有和双链DNA结合后才发荧光GTTTGGCCCCCCCAAAGGGACTTGATAGCATCGTAAGTTTTTTGGGGCCCCCCCCAAAAATACCGGGGTTACGAACGGTAAT未结合SYBRGreen1dye变性:无荧光信号Oligo1:FluoresceinOligo2:LCRed640ExcitationEmissionTransferFRET（荧光共振能量传递）TaqMan•水解型–荧光素，淬灭剂–FRET（荧光共振能量传递）–识别特异性产物•优点–对目标序列特异性高–设计相对MolecularBeacon简单•缺点–只适用于一个目标–价格较高–探针5‘端不能是G（切下后淬灭）MolecularBeacon（分子信标）•颈环结构，与特异产物配对–荧光素，淬灭剂–FRET（荧光共振能量传递）•优点–对目标序列有很高的特异性–低背景•缺点–设计复杂–只能用于一个特定目标–价格较高Q&A