埃希氏菌属的标准操作程序

第三人民检验科微生物室作业指导书文件编号：WSW-SOP-10版本/修订号：第一版主题内容埃希氏菌属的标准操作程序生效日期：20140701第1页共4页埃希氏菌属的标准操作程序1概述埃希菌属是肠杆菌最常见的一群革兰阴性杆菌，广泛分布于环境中，是人类肠道的正常菌群，常为人体其他部位感染的致病菌，该菌属包括、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫尔曼埃希菌、和伤口埃希菌5个菌种。大肠埃希菌是代表菌。2形态与染色革兰阴性直短球菌，大小约为（1.1~1.5ul）×（2.0~6.0ul），多数有鞭毛，部分菌株有荚膜（微荚膜）和周身菌毛。3培养特性在血琼脂平板上菌落圆形，直径2~3mm、较大、稍凸、边缘整齐、灰白色、湿润，少数有β溶血环；在麦康凯平板上形成不透明、粉红色菌落，部分致病埃希菌可为无色菌落，少数成粘稠状菌落；在伊红亚甲蓝平板上为黑色菌落，有金属光泽，中国兰平板上为慷慨琼脂平板上程无色菌落。赫尔曼埃希菌在血琼脂平板上形成较大、边缘整齐、湿润的黄色菌落；在麦康凯平板上呈黄色菌落；在营养琼脂平板上呈黄色菌落。4生化反应典型发酵型埃希菌氧化酶实验阳性，KIA为A/A,发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇等多种唐，产酸产气，IMVIC为++––，动力阳性，硝酸盐还原阳性实验，大部分菌株不产硫化物。不发酵型KIA为K/A，葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖、甘露醇。致病性大肠埃希菌包括EIEC、ETEC、EPEC、EaggEC，需要结合血清学反应、毒力实验和临床症状。5鉴别要点5.1本菌属特征：KIA为A\A，发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇，IMViC为++––，动力阳性。5.2与志贺菌属的鉴别：通过赖氨酸脱羧酶、醋酸盐实验和血清分型的方法区分，埃希菌为阳性，而志贺菌为阴性。第三人民检验科微生物室作业指导书文件编号：WSW-SOP-10版本/修订号：第一版主题内容埃希氏菌属的标准操作程序生效日期：20140701第2页共4页5.3与变形杆菌德鉴别：IMViC都为++––，但埃希菌分解甘露醇，苯苯氨酸脱氨酶试验阴性，而变形杆菌则相反。6细菌鉴定与药物敏感实验6.1形态染色革兰阴性直短杆状。6.2分离培养谦性厌氧在血琼脂上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落，某些菌株可产生β任溶血，在肠道选择性培养基上可发酵乳糖。形成有色菌落。尿液标本应同时作菌落计数，6.3氧化酶阴性。6.4用酶Vitek2德CNI+鉴定卡和GNS药敏卡进行全自动细菌鉴定和药敏试验。6.5疑为O157:H7检测：用0157:H7因子血清直接进行特异性抗血清的凝集试验。6.6致病性大肠埃希菌在血琼脂平板上形成较大、边缘整齐、湿润的黄色菌落；在麦康凯琼脂平板上呈黄色菌落；在营养琼脂平板上呈淡黄色菌落。7检验结果分析与报告根据一起鉴定结果，报告菌名和药敏试验结果，注意ESBL菌株的检出与药物敏感报告。根据NCCLS标准，如果该菌β-内酰胺酶阳性，则报告该菌对所有青霉素类、大多数一代头孢菌素耐药，治疗时建议临床医师选择含酶抑制的复合抗生素或对该酶稳定的药物；如果该菌为ESBL阳性菌株则应报告该菌对所有青霉素、头孢菌素类（不含四代头孢）和氨曲南耐药，而对碳青酶系类和头霉烯类敏感，治疗时建议临床医师选择碳氢霉烯类、头霉烯类、部分氨基糖苷类或β-内酰胺酶抑制剂复合类抗生素。8临床意义大肠埃希菌是寄居在人和动物的肠道正常菌群，当机体抵抗力下降时，该菌侵入肠外组织或器官，可引起急性炎症和继发感染，如胆囊炎、肾盂肾炎、膀胱炎、腹膜炎，败血症等疾病。该属菌的致病因素主要有菌毛、内霉素和肠霉素，而致病性大肠埃希菌的致病性主要是：EIEC侵入结肠上皮粘膜引起志贺菌样腹泻，ETEC引起霍乱样肠毒素腹泻EHEC出血性结肠炎，EPEC婴儿腹泻，EaggEC也可以引起腹泻，大肠埃希菌和克雷伯菌产生质粒介导的超广谱β-内酰胺酶的代表菌种，目前临床上首选碳青酶烯类抗生素进行治疗。肠出血型大肠埃希菌第三人民检验科微生物室作业指导书文件编号：WSW-SOP-10版本/修订号：第一版主题内容埃希氏菌属的标准操作程序生效日期：20140701第3页共4页主要引起严重出血性肠炎，临床表现为低热、痉挛性腹痛，开始水样便。继而血样便。少数患者并发溶血性尿毒综合症（HUS），除胃肠道症状外，还可出现高、呕吐、呼吸道症状和急性肾衰。赫尔曼埃希菌以前称为非典型大肠杆菌，是一个产黄色色素的病原菌。可从血液、脑脊液、伤口等分离出，能引起菌血症，脑膜炎和伤口感染，也可以从牛奶和牛肉等食物中分离出。第三人民检验科微生物室作业指导书文件编号：WSW-SOP-07版本/修订号：第一版主题内容葡萄球菌属常规鉴定标准操作程序生效日期：20140701第4页共4页