发酵罐操作步骤

发酵罐操作步骤一设备使用前，操作人员应认真阅读本章节内容，清楚各管道、阀门的作用和工艺流程。在确保熟悉过程后方可进行实际操作。种子罐部分(一)空气过滤器消毒1.空气过滤器消毒：关闭阀门A12、A16、S12。然后打开S1、S2，待排出蒸汽管路凝结水后，S2转为微开。调节S1，使蒸汽过滤器上方压力表指示在0.13～0.14MPa之间。缓慢打开阀门S11，微开A13，打开A14，慢慢打开阀门A15，使其只有少量蒸汽流出。调节阀门S11，使空气过滤器上方压力表显示压力控制在0.11～0.12MPa之间。过滤器消毒时间一般为30～50min。到时间后依次关闭阀门A15、A13、S11、S2、S1。注意：消毒时，流经空气过滤器的蒸汽压力不得超过0.12MPa，蒸汽流量也不能太大，否则会损坏空气过滤器滤芯，使其失去过滤能力。要控制好阀门A15的开度，使之有少量的蒸汽流出即可。2.吹干空气过滤器：打开阀门A1，待排出凝结水后A1转为微开。打开阀门A11、A12，微开A13。缓慢打开阀门A15，控制空气流量计读数在0.3VVM左右，吹干空气过滤器，时间15～20min。结束后依次关闭阀门A15、A13，使空气管路内保持正压。注意：吹干空气过滤器时，A15应慢慢打开，使空气流量逐渐上升。防止损坏空气过滤器滤芯。(二)空消1.固定好罐盖螺栓。将接种口、补料口、电极插孔堵塞等紧固。注意：发酵罐罐盖密封螺栓应对称拧，螺栓和各接口螺母牢靠即可，不要拧得过紧，防止损坏螺栓和橡胶密封圈。2.检查W11、W13、H12、W14、H14、D12是否已经关闭，然后打开阀门D11、S13，排出夹套中残留冷却水后关闭阀门S13。注意：一定要排尽夹套内存水，并保持D11打开状态。否则空消过程可能会将发酵罐内筒体压扁，造成设备损坏。3.打开罐顶放气阀A17。关闭阀门A14，打开S12，打开A15，排出管路凝结水后A15转为微开。稍开A16，通过进气管向罐中通蒸汽。检查阀门P1是否关闭，打开阀门S14、P12，排出蒸汽管路冷凝水后P12转为微开，打开P11使蒸汽通过放料管进入罐内。观察压力表Y11，通过调节阀门P11、A16、A17的开度，使罐压稳定在0.11～0.12MPa之间，请勿超压！空消一般需要30～50min。注意：空消过程中压力最高不得超过0.15MPa，超压可能会损坏设备并出现危险。同时，空消过程中D11应一直处于开启状态。4.计时结束后，关闭阀门A15、A16、S12，打开A14，再稍开A16向罐内通空气。关闭S14、P12，再慢慢打开P12，排尽罐内的冷凝水后关闭P11、P12。注意：P12要慢慢打开，防止罐内热水喷出造成烫伤。降温过程中应注意观察罐顶出气口压力表Y11，要适时启闭A16向罐内通空气，使罐压维持在0.03～0.05MPa之间。注意：各进罐蒸汽阀门和罐顶出气阀门关闭后，罐压将会快速下降。为防止罐内产生负压，吸入外界空气，必须打开空气进罐出罐阀门向罐中通空气，以保证罐内正压。并调节其开度，使罐压维持在0.03～0.05MPa之间。(三)实消1.关闭空气进罐阀门A16，开大罐顶放气阀A17，卸去罐内压力。取出电极安装孔内的孔塞，注意：此时罐内必须没有压力。将标定好的pH、DO电极安装到罐体电极插孔内（电极标定参见电极使用说明书），用螺母固定好后与控制系统相连。2.按工艺要求配制培养基母液。关闭阀门P11、P12，将配好的培养基母液加入罐内，补水。开启控制系统电源。注意：培养基灭菌过程中，蒸汽将会带入一定量的凝结水，使灭菌后培养基体积升高。同时，考虑接种时种子带入的液体体积，故培养基配制时须相应的减少水的加入量。因此母液加入罐内后应补水至所需培养液总量的65～75%左右，其余25～35%为蒸汽冷凝水和种子量。初次使用发酵罐应适当减少配料时加入水的量，待明确实消过程增加的冷凝水量后再调整配料体积。3.升温：打开阀门S13（注意不要超过夹套最大工作压力），将夹套内残水排空，并对发酵液进行预热。此时可低速搅拌发酵液，促进热传递。当温度达到80℃以上时，停止搅拌。可进行下述操作：1)检查阀门P1是否已经完全闭合，打开阀门S14、P12，待排出凝结水后P12转为微开。稍开P11，向罐内部通蒸汽加速升温。2)关闭A14，打开阀门S12，微开A15，使其有少量蒸汽流出。稍开A16向罐内通蒸汽，并对空气进罐管路灭菌。注意：发酵液升温的时间应控制在40分钟左右，如果升温时间太短发酵罐顶部温度有可能达不到灭菌温度，造成灭菌不彻底。4.罐温到达灭菌温度后，适当关小P11、A16的开度。控制阀门S13、D11、A17，使罐压保持在0.11～0.12MPa之间，请勿超压！实消一般在30～40min。注意：实消时间不足将无法灭菌彻底，太长会过多地破坏培养基营养。5.计时结束后，关闭S13。关闭P11、P12、S14。关闭A16、A15、S12，打开A14，开始自然降温减压。降温过程须适时打开A16，向罐内通空气，保证罐压在0.03MPa～0.05MPa之间。自然冷却10min左右后，可向夹套通循环水加速冷却，操作如下：关闭D11，打开W12、W13、W14。调整控制系统的温度设定值（参照控制系统使用说明书中的温度设置内容进行），将控制仪设置为“运行”状态，并设置“加热”、“冷却”为自动，进入自动控制降温状态。同时可打开搅拌，加快冷却速度。注意：在降温过程中必须注意罐顶压力表Y11的示数，适当开启空气进罐阀门A16，使罐压保持在0.03～0.05MPa之间，不得过低，否则极易吸入外界空气造成发酵染菌。开启冷却水阀门之后注意压力表Y12示数，不要超过夹套最高工作压力。6.打开阀门W1，在控制系统设置水箱温度进行水箱预热。(四)接种当培养液温度降到接种温度时即可进行接种。1.将无污染的摇瓶种子在超净工作台上尽量合并后备用。并准备好打火机、75%酒精棉、95%酒精、棉花、钳子、接种口扳手。2.用酒精棉擦洗罐顶接种口，并在接种口四周围上棉花，倒上适量95%酒精。接种者的双手也需用酒精棉擦洗消毒。注意：棉花和95%酒精不宜过多，否则点燃后火焰高不易操作，甚至造成烫伤。3.调节进气阀A16的开度，减少进气量。检查罐内压力是否在0.01MPa以下，点燃接种口四周的酒精棉。用专用扳手拧下接种口螺母，并将其放入预先准备的盛有75%酒精的培养皿中。注意：A16不能关闭，否则有可能有外界空气进入罐内引起污染。如果罐压不在0.01MPa以下，应开大排气阀或调小进气阀。否则松开接种口后，罐内空气从接种口喷出，有可能会将酒精棉吹灭，造成染菌。4.在火焰上拔下种子瓶瓶塞，在火焰上灼烧瓶口，迅速将菌种倒入罐内。5.盖上接种口螺母，拧紧，熄灭火焰。并用75%酒精棉将接种口四周清理干净。注意：接种口不能拧的太紧，防止损坏密封圈。(五)培养1.开启恒温控制：打开阀门H12、H14即可（实消过后已经进行水箱预热）。2.转速设定：转速的数值按《控制系统操作说明》所述方法进行设置。并将“搅拌”置于“自动”位置。3.空气流量调整：微开A13，观察转子流量计和压力表Y11，调节A16、A17控制通气量和罐压达到工艺要求。4.补料操作：如果pH、消泡、补料是自动控制的，则需进行以下操作：将预先灭过菌的酸液、碱液、消泡剂、补料液通过硅胶管与蠕动泵、发酵罐联接好（将针插入发酵罐备用口）。注意：酸、碱液浓度不能过高。操作过程必须保证无菌。参照《控制系统使用说明书》在控制系统中做好相应的数值设置，然后将“加碱”、“加酸”、“消泡”、“流加”置于“自动”控制状态。5.DO电极标定：如果装有DO电极，则需进行DO电极标定，即：当温度、罐压、通气量调整好后，稳定1～2min，然后将DO电极标定为100%。(六)取样1.取样口灭菌：打开阀门S14、P12，排尽蒸汽管中的冷凝水后P12转为微开，使其只有少量蒸汽流出即可，保持30min，对取样口进行灭菌。计时结束后关闭阀门P12、S14。2.取样：打开P11，稍开P12，弃去最初流出的一段发酵液后关闭P12。用火焰封取样口，把预先灭过菌的取样瓶瓶口置于火焰上，拔去瓶塞，瓶口对准取样口，再次打开阀门P12，开始收集发酵液样品至所需取样量。随后关闭取样阀P11、P12，盖上瓶塞。3.取样口再灭菌：同1.条。发酵罐操作步骤二设备使用前，操作人员应认真阅读本章节内容，清楚各管道、阀门的作用和工艺流程。在确保熟悉过程后方可进行实际操作。发酵罐部分(一)空气过滤器消毒1.空气过滤器消毒：检查阀门A32、A36、S32是否已经关闭。然后打开S1、S2，待排出蒸汽管路凝结水后，S2转为微开。调节S1，使蒸汽过滤器上方压力表指示在0.13～0.14MPa之间。缓慢打开阀门S31，微开A33，打开A34，慢慢打开阀门A35，使其只有少量蒸汽流出。调节阀门S31，使空气过滤器上方压力表显示压力控制在0.11～0.12MPa之间。过滤器消毒时间一般为30～50min。到时间后依次关闭阀门A35、A33、S31、S2、S1。注意：消毒时，流经空气过滤器的蒸汽压力不得超过0.12MPa，蒸汽流量也不能太大，否则会损坏空气过滤器滤芯，使其失去过滤能力。要控制好阀门A35的开度，使之有少量的蒸汽流出即可。2.吹干空气过滤器：打开阀门A31、A32，微开A33。缓慢打开阀门A35，控制空气流量计读数在0.3VVM左右，吹干空气过滤器，时间15～20min。结束后依次关闭阀门A35、A33，使空气管路内保持正压。注意：吹干空气过滤器时，A35应慢慢打开，使空气流量逐渐上升。防止损坏空气过滤器滤芯。(二)空消1.固定好罐盖螺栓，将电极插孔堵塞等紧固。注意：密封螺栓应对称拧，螺栓和各接口螺母牢靠即可，不要拧得过紧，防止损坏螺栓和橡胶密封圈。2.检查W31、W33、H32、W34、H34、D32是否已经关闭，然后打开阀门D31、S33，排出夹套中残留冷却水后关闭阀门S33。注意：一定要排尽夹套内存水，并保持D31打开状态。否则空消过程可能会将发酵罐内筒体压扁，造成设备损坏。3.打开罐顶放气阀A37。关闭阀门A34，打开S32，打开A35，排出管路凝结水后A35转为微开，稍开A36，通过进气管向罐中通蒸汽。打开阀门S34、P32，排出蒸汽管路冷凝水后P32转为微开，打开P31使蒸汽进入罐内。打开P3，微开P4。观察压力表Y31，通过调节阀门P31、A36、A37、P4的开度，使罐压稳定在0.11～0.12MPa之间，请勿超压！空消一般需要30～50min。注意：空消过程中压力最高不得超过0.15MPa，超压可能会损坏设备并出现危险。同时，空消过程中D31应一直处于开启状态。4.计时结束后，关闭S34、P32。关闭A35、A36、S32，打开A34，再稍开A36向罐内通空气。关闭P3、P4。慢慢打开P32，排尽罐内的冷凝水后关闭P31、P32。注意：P32要慢慢打开，防止罐内热水喷出造成烫伤。降温过程中应注意观察罐顶出气口压力表Y31，要适时启闭A36向罐内通空气，使罐压维持在0.03～0.05MPa之间。注意：各进罐蒸汽阀门和出气阀门关闭后，罐压将会快速下降。为防止罐内产生负压吸入外界空气，必须打开空气进罐出罐阀门向罐中通空气，以保证罐内正压。并调节其开度，使罐压维持在0.03～0.05MPa之间。(三)实消1.关闭空气进罐阀门A36，开大罐顶放气阀A37，卸去罐内压力。取出电极安装孔内的孔塞，注意：此时罐内必须没有压力。将标定好的pH、DO电极安装到罐体电极插孔内（电极标定参见电极使用说明书），用螺母固定好后与控制系统相连。2.按工艺要求配制培养基母液。关闭阀门P31、P32，将配好的培养基母液加入罐内，补水。开启控制系统电源。注意：培养基灭菌过程中，蒸汽将会带入一定量的凝结水，使灭菌后培养基体积升高。同时，考虑接种时种子带入的液体体积，故培养基配制时须相应的减少水的加入量。因此母液加入罐内后应补水至所需培养液总量的65～75%左右，其余25～35%为蒸汽冷凝水和种子量。初次使用发酵罐应适当减少配料时加入水的量，待明