G试验临床推广课件

北京金山川科技发展有限公司天津市一瑞生物工程有限公司G试验检测及内毒素检测的临床意义PartIII临床评价PartIG试验--深部真菌感染检测内毒素检测—革兰阴性菌检测PartII侵袭性真菌感染（IFI）的定义定义:指致病性真菌侵犯皮下组织、黏膜、肌肉和内脏器官等所引起的真菌感染性疾病，危害性较大。条件致病性真菌1.念珠菌属----念珠菌血症2.曲霉菌属---侵袭性肺曲霉菌病（IPA)3.其他MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验侵袭性真菌感染的特点1.不产生内毒素和外毒素4.早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高2.致病力一般较弱，机体免疫低下时发生3.感染菌种变化，白色念珠菌感染下降，曲霉菌感染增长趋势上升明显MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验1.长期使用广谱抗生素2.抗肿瘤药物和免疫抑制剂治疗5.AIDS感染、基础类疾病侵袭性真菌病（IFD）的诱因4.骨髓和实体器官移植3.插管等侵袭性治疗MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验6.使用激素治疗的病人侵袭性真菌感染（IFI）现状IFI诊断困难及漏诊情况严重IFI发生率不断增加IFI感染病死率居高不下123MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验严重真菌感染迅速上升势头危重病人的存活期延长延长了真菌感染的高危期使此类患者业已增加的人数进一步扩大医学和相关科学的进步是日益严重的威胁！国内深部真菌感染不容忽视18282875010203040506070801981-19861986-19911991-19961996-2001▲引自北京协和医院王爱霞主任课件MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验20年内院内149例真菌感染的变化侵袭性真菌感染（IFI）现状MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验IFI诊断困难及漏诊情况严重IFI发生率不断增加IFI感染病死率很高123美国四大医疗中心做的关于IFI的一项回顾性研究GareyKWetal.ClinInfectDis2006,43:25–31.死亡率(%)延迟治疗时间（d）侵袭性真菌感染（IFI）现状MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验IFI诊断困难及漏诊情况严重IFI发生率不断增加IFI感染病死率很高123●尸检研究发现：北京协和医院1953-1993年间3447例尸检，发现深部真菌感染85例，其中生前明确真菌感染诊断者仅5例，占5.9％，漏诊率高达94.1％。●诊断困难的主要原因：---临床表现不典型，易被基础疾病所掩盖---确诊常需侵入性手段获得组织标本，侵入性操作常因患者的病情所限难以实施---真菌检测项目开展相对不足或滞后IFI诊断困难及漏诊情况严重MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验方法特点传统检查直接培养真菌法耗时长,阳性率低，结果是定性的，有些标本采集困难。可以区分菌种。辅助方法：临床表现，免疫学，病理学，影像学检查等观察期不确定，费时费力，特征性不明显并对医师的专业水平要求高非传统检查1.G试验：通过检测(1-3)-β-D-葡聚糖的含量，判断是否有真菌感染耗时短，灵敏度高，特异性强，定量检测可判断感染严重程度2.GM试验：曲霉属半乳甘露聚糖抗原检测。判断是否曲霉属真菌感染3.PCR技术：真菌的抗原、抗体及代谢产物的血清学检查和真菌核酸检测侵袭性真菌感染的临床检测方法对比MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验G试验1-3-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验（1-3）-D-GlucanLAL-RM(反应物)G因子活化G因子凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）试验反应机理图：1,6葡聚糖磷脂双分子层几丁质麦角固醇1,3葡聚糖合成酶甘露糖蛋白MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验（1,3）-β-D-葡聚糖广泛存在于真菌细胞壁中，占真菌壁成分50%以上。是真菌细胞壁上的特有成分用于侵袭性真菌感染的早期诊断1-3-β-D-葡聚糖本质及特点◇◇◇(1-3)-β-D-葡聚糖特性1.2.3.对热极为稳定，高压121℃并不能使其灭活。在念珠菌和曲霉菌细胞壁中含量较多，对G试验灵敏。当真菌进入人体血液或深部组织后，经吞噬细胞的吞噬、消化等处理后，(1-3)-β-D-葡聚糖可从胞壁中释放出来，从而使血液及其它体液中含量增高。当真菌在体内含量减少时，机体免疫系统可将其清除。在浅部真菌感染中，(1-3)-β-D-葡聚糖未被释放出来，故其在体液中的量不增高。MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验G试验检测的特点可检测多种致病真菌感染：念珠菌，曲霉，肺孢子菌，镰刀菌，地霉，毛孢子菌等MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验●G试验检测一般先于临床症状平均四天BG值升高平均早于发热5d，早于呼吸道症状平均10．7d，早于HRCT检查平均9．3d。高蕾，周新.(1，3)一β—D葡聚糖检测在侵袭性真菌感染中的诊断意义[J].中国感染与化疗杂志,2008,3(2),123-125.•对于念珠菌血症,G试验检测是首选检查J.Clin.Microbiol.2008.46:1009–1013.侵袭性真菌感染的诊断标准EORTC/MSG2008修订版宿主因素临床特征病原学真菌镜检真菌培养组织病理学检查血清学检查方法（间接证据）G-test——临床诊断ClinicalInfectiousDiseases2008;46微生物学标准:（1）痰或支气管肺泡灌洗液培养呈霉菌（2）鼻窦抽取液直接镜检或细胞学检查，或培养呈霉菌阳性；（3）痰或支气管肺泡灌洗液经直接镜检或细胞学检查发现霉菌或隐球菌；（4）支气管肺泡灌洗液、脑脊液或2份以上的血液样品呈曲霉菌抗原（半乳甘露聚糖检测、GM试验）阳性；（5）血液中(1,3)-β-D葡聚糖检测（G试验）阳性；（6）血中隐球菌抗原阳性；（7）无菌体液中经直接镜检或细胞学检查发现真菌；（8）未留置尿管的情况下，连续2份尿样培养均呈酵母菌阳性或尿检见念珠菌管型；（9）血培养呈酵母菌阳性；（10）肺部异常，与下呼吸道感染相关的标本中（血液、痰液和支气管肺泡灌洗液等）多次培养无任何致病细菌。宿主因素临床表现+组织病理+微生物学+Asciogluetal2002ClinInfectDis347-14拟诊临床诊断确诊侵袭性真菌感染的诊断标准：0363738394041体温(°C)实验室检查指导临床诊断与治疗组织培养+组织学检查+G、GM试验+PCR+治疗策略疾病疑似程度-7071421283542495663-140.1110粒细胞(log10x109/L)经验性治疗拟诊预防低特异治疗确诊抢先治疗临床诊断宿主因素---常平南方医科大学珠江医院重症医学科PartIII临床评价PartIG试验--真菌检测内毒素检测PartII内毒素定量检测在临床治疗中的重要意义项目介绍：定义细菌内毒素（Endotoxin）是G-菌细胞壁上的特有结构，为外源性致热原，它可激活中性粒细胞等，使之释放出一种内源性热原质，作用于体温调节中枢引起发热。内毒素的主要化学成分为脂多糖（LPS）中的类脂A。内毒素的代谢目前实验研究认为：一般细菌内毒素在体内1-1.5小时达到最高峰值，5-6小时逐渐衰减下来。体内内毒素的来源菌体死亡或人工裂解革兰氏阴性菌的释放肠道内毒素的吸收败血症时血中细菌的释放外源性输入体内内毒素的来源检测物质:脂多糖(内毒素主要成分)脂多糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的C因子，再激活B因子，经过一系列反应，最终引起裂解物凝固的过程。实验原理:实验原理图：细菌内毒素因子C活化因子C因子B活化因子B凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）传统热原检测方法与MB-80方法比较传统方法MB-80方法实验方法凝胶法动态比浊法性质定性定量结果判读肉眼观察准确数值，打印检测报告使用试剂鲎试剂革兰氏阴性菌脂多糖检测试剂盒（具有SFDA颁发的注册证)内毒素检测的临床应用内毒素检测的临床应用革兰阴性菌败血症的诊断呼吸道感染肝脏感染及肝硬化胆道疾病急性胰腺炎溃疡性结肠炎细菌性感染的辅助性诊断、治疗和预后判断原因不明的发热外源性输注的内毒素血症的诊断体液内毒素水平是严重细菌性炎症的一个重要的特异性指标，而且也是脓毒症和多脏器衰竭的可靠指标。不仅可用于感染类别的鉴别诊断，也可用于感染控制和病情转归的判定。内毒素检测的临床意义1.系统组成：1）仪器MB-80主机（MB-80(E)、MB-80(D)、MB-80(S)、MB-80(V)、MB-80(M)）2）MB-80软件系统3）试剂(配套真菌、内毒素试剂盒）4）配套无热原耗材2.系统功能：快速定量检测深部真菌和内毒素，帮助临床医生早期诊断目前常规方法难以确诊的侵袭性真菌感染、革兰氏阴性菌感染，便于临床医生的早期诊断、早期治疗及对治疗的疗效进行判定。3.可检测标本：血液、尿液、脑脊液、胸腔积液、腹水等。血液透析液，透析用水--（内毒素检测）MB-80系统MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验MB-80优势快速---1个小时完成检测动态---动态检测定量---定量检测灵敏---真菌（1-3）-β-D葡聚糖最低检测量5pg/ml内毒素最低检测量1pg/mlMB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验适合服务临床科室呼吸科血液科肿瘤科烧伤科感染科ICU病房器官移植部门等MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验仪器检测原理动态比浊法：动态定量检测真菌可溶性抗原（1-3）-β-D葡聚糖，革兰阴性菌可溶性抗原（脂多糖），系统通过测定生物试剂与检测样品中抗原抗体反应生成浊度，采用动态比浊法，连续检测浊度的变化,建立时间（T）与微生物含量（C）关系的标准曲线，通过光电转换原理，经软件系统分析得出具体检测值，得出检测样品中含真菌或内毒素含量。MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验临床阈值Cut-off：阴性＜10pg/ml中介10~20pg/ml阳性＞20pg/ml儿童阳性＞50pg/ml（真菌检测）MB-80系统定量测定(1-3)-β-D-葡聚糖的临床意义深部真菌感染增多且复杂，早期症状无特异性，往往被原发病掩盖，病程长，发现较晚，死亡率高。因此对深部真菌感染治疗成败的关键在于早期诊断。早期诊断快速诊断指导用药评价效果真菌感染就医的患者，往往病情严重，传统的微生物分离、培养与鉴定需要时间较长，患者在等待期间有可能病情加重，甚至死亡。快速确定真菌感染后，选择好治疗方案,有针对性使用抗真菌类药物。为临床选用副作用小，疗效高，价格适宜的药物提供准确的依据。应用抗真菌药物后，定期检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性。MB-80系统简介侵袭性真菌感染G试验临床评价例1----徐英春北京协和医院检验科肝炎，右肺实变，右胸腔积液支气管镜做细菌，TB、真菌，血培养结果均阴性8-19:ICU:经验治疗：拜复乐+万古霉素8-20痰涂片：在中性粒细胞内可见革兰阳性球菌少量PCT:7.9ng/ml治疗：特治星+万古霉素8-26T：38°C，不能脱呼吸机WBC:15.0x10^9/L8-27:会诊COPD？非典病原体？PCP？真菌？抗菌药物？检查：G试验G试验：80.16pg/ml01020304050607080901002008-8-272008-8-282008-8-282008-8-282008-8-282008-8-282008-8-292008-8-29泰能+斯沃+两性BG试验（pg/ml）变化情况G试验：9.31体温的变化情况3536373839402008-8-182008-8-202008-8-222008-8-242008-8-262008-8-282008-8-302008-9-12008-9-32008-9-5泰能+斯沃+两性B510152025302008-8-182008-8-202008-8-222008-8-242008-8-262008-8-282008-8-30200