志贺菌

志贺菌的检测组长：温东方小组分工温东方收集材料陈继春讲解PPT马丽丽修改PPT杨露制作PPT郭丽收集材料冷娟收集材料志贺菌的介绍•志贺菌属的细菌通称痢疾杆菌是人类细菌性痢疾的病原菌以病人和带菌者为传染源无动物宿主•人和灵长类是志贺氏菌的适宜宿主，营养不良的幼儿、老人及免疫缺陷者更为易感。•细菌性痢疾是其导致的常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。传染源主要为病人和带菌者,通过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。•志贺氏菌病相关的食品包括色拉（土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡），生的蔬菜，奶和奶制品，禽，水果，面包制品，汉堡包，和有鳍鱼类。•食源性志贺氏菌流行的最主要原因是从事食品加工行业人员患菌痢或带菌者污染食品，食品接触人员个人卫生差，存放已污染的食品温度不适当等。志贺菌生物学特性革兰染色阴性杆菌无鞭毛,有菌毛.在肠道鉴别培养基上形成无色,半透明的菌落.均能分解葡萄糖只产酸不产气,除宋内志贺菌迟缓发酵乳糖外,均不分解乳糖.营养要求不高在普通琼脂平板上经24h生长形成直径达2mm大小半透明的光滑性菌落志贺菌属中的宋内菌常出现扁平的粗糙型菌落志贺菌的分类志贺氏菌的抗原有K和O抗原而无H抗原。K抗原是自患者新分离的某些菌株的菌体表面抗原，不耐热，加热100℃1小时被破坏。K抗原在血清学分型上无意义根据志贺氏菌菌体（O）抗原和分解甘露醇的能力，将其分为4群，即痢疾志贺氏菌（A群），福氏志贺氏菌（B群），鲍氏志贺氏菌（C群）和宋内氏志贺氏菌（D群）志贺菌的抵抗力本菌对理化因素的抵抗力较其他肠道杆菌为弱。对酸敏感，在外界环境中的抵抗力能以宋内氏菌最强，福氏菌次之，志贺氏菌最弱。一般56～60℃经10分钟即被杀死。在37℃水中存活20天，在冰块中存活96天，蝇肠内可存活9～10天，对化学消毒剂敏感，1%石碳酸15～30分钟死亡。志贺菌的致病性细菌性痢疾是最常见的肠道传染病,夏秋两季患者最多。传染源主要为病人和带菌者,通过污染了痢疾杆菌的食物、饮水等经口感染。志贺氏菌引起的细菌性痢疾，主要通过消化道途径传播。根据宿主的健康状况和年龄，只需少量病菌（至少为10个细胞）进入，就有可能致病。人类对志贺氏菌易感，10～200个细菌可使10～50%志愿者致病。志贺氏菌引起的细菌性痢疾可分为两类A、急性细菌性痢疾：又分急性典型、急性非典型、急性中毒性菌痢三型。B、慢性细菌性痢疾：又分慢性迁延型、慢性隐伏型、慢性急性发作型三型。志贺菌的致病物质1.致病物质主要是侵袭力和内毒素,有的菌株尚产生外毒素.(1)侵袭力借菌毛粘附,穿入回肠末端和结肠粘膜上皮细胞，在上皮细胞内繁殖,形成感染灶,引起炎症反应.细菌一般不进入血流.志贺菌穿透上皮细胞的能力,由基因所控制.志贺菌只有侵入肠粘膜后才能致病.(2)内毒素1)作用于肠粘膜,使通透性增高,促进对内毒素的吸收,引起发热,神志障碍等.2)破坏肠粘膜,形成炎症,溃疡,呈现典型的脓血粘液便.内毒素还能作用于肠壁植物神经系统,使肠功能发生紊乱,肠蠕动失调和痉挛.尤其是直肠括约肌痉挛最明显,因而出现腹痛,里急后重等症状.(3)外毒素A群志贺菌I型和II型还能产生外毒素,称志贺毒素.使蛋白质合成中断(上皮细胞损伤).2.所致疾病传染源是病人和带菌者.传播途径主要为粪一口.人类对志贺氏菌较易感.痢疾志贺菌引起病情较重;宋内志贺菌多引起轻型感染;福氏志贺菌感染易转变为慢性,病程迁延;福氏和宋内志贺菌是我国常见的流行型别.3.临床感染类型(1)急性菌痢局部症状有脓血便,腹痛,里急后重.急性中毒性菌痢,以小儿多见,无明显的消化道症状,主要表现全身严重的中毒症状.各型志贺菌都有可能引起.临床主要有高热,神志障碍,休克,病死率较高.(2)慢性菌痢病程2月,迁延不愈,局部症状为主.4.病后建立的型特异免疫(SIgA)短暂,不持久,无交叉防治措施♠主要预防措施是夏秋季加强食品卫生管理，严格执行卫生制度，食品企业和食堂中的工作人员息细菌性痢疾或带菌者应予治疗，并暂时不从事接触食品的工作。♠主要使用抗菌药物治疗，口服氯霉素或映喃陛酮，有失水现象者要及时补液。微生物检测检验步骤检样→样品处理→增菌培养→SS、HE平板分离培养→初步生化鉴定→最后血清学鉴定→报告培养基：GN增菌液培养条件：36±1℃6—8h当培养液出现轻微混浊即中止培养。操作：称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。1、增菌培养2、分离培养•强选择性平板：SS或HE•弱选择性平板：麦康凯或伊红美蓝平板(EMB)在工作中36±1℃培养18—24h•菌落特征：无色透明，中等大小，光滑圆形菌落3、初步生化试验：挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36℃培养18～24h，分别观察结果。原理：本培养基适合于肠杆菌科的鉴定。用于观察细菌对糖的利用和硫化氢（变黑）的产生。该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。4、血清学分型：凡凝为志贺氏菌，挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1、A2、B群多价和D群血清分别试验。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株，可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用1～15各型因子血清检查。如果鲍氏多价血清不凝集，可用痢疾志贺氏菌3～12型多价血清及各型因子血清检查。5、进一步的生化试验在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即：葡萄糖铵，西蒙氏柠檬酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶，ｐＨ７．２尿素，ＫＣＮ生长，以及水杨苷的分解。除宋内氏菌和鲍氏１３型为乌氨酸阳性外，志贺菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。已判定志贺菌属的培养物，应进一步做５％乳糖发酵，甘露醇、棉子糖和甘油的发酵和靛基质试验。志贺菌属４个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏６型的生化特性与Ａ群或Ｃ群相似。判定为志贺氏菌属五项生化试验：5%乳糖发酵实验甘露醇实验棉子糖实验甘油发酵实验靛基质试验6、结果报告：综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。其他检测方法脉冲场凝胶电泳荧光菌球法协同凝集试验PCR法检验操作要点•志贺氏菌在常温中生存的时间较短，应尽快进行试验。•如24h内不能检验，样品应在冰箱内•长时间不能检验，放在低温冰箱内。谢谢观赏