粪便隐血

粪便隐血试验第五小组上消化道出血量＜5ml时，粪便中无可见的血液，且红细胞被破坏，显微镜检查也未见到红细胞。需要用化学法、免疫法等才能证实的出血，称为隐血。其检测方法包括化学法、免疫学方法、转铁蛋白测定法以及其他方法。传统化学方法的优点:结果显示快、清晰、成本低、结果可以半定量，但特异性差，受饮食影响等干扰因素大，假阳性率高，含亚铁离子的食物和药物对结果有干扰，敏感度低，出血量90μg/ml才能检出。胶体金法优点：特异性高，灵敏度高，不受其他药物及铁剂、动物血等干扰，不受饮食限制，简便、快速，是目前早期诊断消化道出血性疾病的一个首选的好方法。缺点:强阳性标本会产生假阴性结果，且单独免疫法对于血基质无特异性，对上消化道检出率不如化学法高。两种方法在方法学上互补，故本次实验选择胶体金法与化学法（采用邻甲苯胺法）同时进行粪便隐血试验。1.病人准备•检验前两天内建议应禁食动物血、脏器及含叶绿素类食物、铁剂、中药、维生素C等药品。2.标本采集处理保存要求•患者自行留取1-5g新鲜粪便标本于干燥、清洁、无吸水性的有盖且有明显标记的容器内。•粪便标本应选择其中脓血粘液等病理成分，若无，应多部位取材。•粪便标本收集后应尽快（2小时内）进行检测，以免因长时间放置导致隐血试验的敏感性降低。3.实验原理•胶体金法：大便或其他体液隐血的免疫一步检验法是一个高灵敏度的夹心式酶联免疫测定法。该法采用抗人血红蛋白的单克隆抗体和多克隆抗体，特异地针对粪便样品中的人血红蛋白。•邻甲苯胺法：血红蛋白中的亚铁血红素有类似过氧化物酶的活性，能催化过氧化氢生成新生态氧，将受体邻甲苯胺氧化成邻甲偶氮苯而显蓝色。4.试剂和器材•蒸馏水，一次性吸管数支，取样棒，稀释样杯，粪便隐血试纸条；邻甲苯胺溶液，3%H2O2溶液，普通玻片,消毒桶，普通、医疗垃圾桶。5.试验方法邻甲苯胺法：•1）以采样棒挑取少量大便涂于已滴加两滴生理盐水的玻片上；•2）显微镜下镜检查看有无红细胞；•3）有红细胞者慎出隐血试验隐血报告；•4）无红细胞者，滴加邻甲苯胺溶液2滴于此玻片上与样本混匀；•5）滴加上述新鲜过氧化氢溶液混匀；•6）2分钟内显棕蓝色为阳性；•7）此法阴性宜用金标法复查。胶体金法：•1)在稀释样杯中加入0.5ml的蒸馏水；•2）用采样棒在标本的6个最有可能阳性的部位取样；•3）取好样品后，将样品与蒸馏水充分混匀；•4）将金标纸条MAX线一端插入稀释样杯中，3-5分钟后观察结果。6.结果判断•邻甲苯胺法：滴加双氧水溶液后随即出现蓝色阳性反应，报告为++++；在10秒内出现阳性反应，报告为+++；在一分钟内出现阳性反应，报告为++；在1分钟后5分钟内出现阳性反应，报告为+；没有任何颜色反应则报告阴性。•胶体金法：检测区与质控区均出现红色线的为阳性，如仅质控区出现红色线为阴性，如质控线不出现红色线则表示试验无效应重做。•当免疫法与化学法结果同为阳性时，判定结果为阳性结果，化学法显色结果可作为出血程度的参考；•当免疫法结果为阳性而化学法结果为阴性时，判定结果为阳性，但可能其标本隐血的含量极微少；•当免疫法结果为阴性而化学法结果为阳性时，建议复查；•当两者均为阴性时，判定为阴性结果。7.临床意义•1）上消化道有出血：OB（大便隐血实验）呈阳性•2）消化性溃疡：阳性率40%~70%,呈间断性阳性，治疗粪便外观正常时，OB仍可持续5~7天阳性，此后若出血停止OB可转阴；只要消化道出血大于5ml，即可出现阳性，但不作为诊断的直接依据；若OB呈强阳性提示消化性溃疡合并出血•3）消化道癌症：阳性率95%，呈持续阳性，可OB可作为消化道癌筛选指标•4）流行性出血热：阳性率84%，OB为重要佐证•5）药物导致胃粘膜损伤（Eg阿司匹林、消炎痛、糖皮质激素等）肠结核、溃疡性结膜炎、结肠息肉、钩虫病等，OB显示阳性。8.质控•邻甲苯胺法：采用血标本作为阳性对照。•胶体金法：质控区所显示的紫红色带（质控区被事先固定上相应抗体）是判定层析反应过程是否正常，即作为试纸条的质控标准。9.注意事项•1）粪便标本不能混入肛门、直肠的出血，粪便应新鲜，为提高检出便中血液的几率，可多次采集大便样本。•2）在粪便标本的采集、运送过程中和使用试剂进行检测时，操作人员应注意做好个人防护，避免人体接触以防止可能产生的污染和自身感染。•3）试验前3天内不要食用动物血、肉、肝、铁剂（硫酸亚铁，枸缘酸亚铁、红色补丸、富马酸铁）、富含叶绿素的食物（菠菜、青菜），避免假阳性反应；亦不可大量服用Vc或其他有还原作用的物质，避免出现假阴性反应。•4）3%的双氧水必须有效，还应该做阳性对照试验（将双氧水涂在血片上，有泡沫则可用）。•5）牙龈出血，鼻出血、经血亦可导致化学法阳性反应。故化学法阳性者，应以胶体金法复查并参考问诊发出报告。•6）用具应杀菌处理的器材。•7）对无任何明显症状但却怀疑可能有少量出血的病人，建议应连续取3天粪便标本，每天从标本的不同部位取材做两次实验，3天之内共做6次隐血检查。•8）冬天室温过低时反应可能较迟缓，应适当延长观察时间。