ctDNA的认知

“我整天都惴惴不安。那天晚些时候我做了一个细胞切片检查,医生将内窥镜放进我的喉咙,经胃抵达肠道。他用针穿刺我的胰腺,从肿瘤上取下一些细胞……”早期诊断困难，错过最佳治疗时机易复发转移，预后差放化疗易产生耐受缺乏有效的治疗靶点早诊早治，实时监控、靶向用药及个体化诊疗是提高肿瘤远期生存率、降低死亡率的关键。肿瘤诊断方法血清标志物：蛋白类（CEA，糖类抗原，AFP等），核酸类（microRNA,LncRNA）影像学诊断:超声，CT，MRI，PET，PET-CT细胞学检查：EUS-FNA循环肿瘤细胞（circulatingtumorcell,CTC）循环肿瘤DNA（circulatingtumorDNA，ctDNA）ctDNA定义循环肿瘤DNA（ctDNA），是指肿瘤细胞体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统，其携带了肿瘤突变信息：包括突变，缺少，插入，重排，拷贝数异常，甲基化等异常DNA片段。发现简史1948年科学家已对人体血液中的循环DNA（circulatingfreeDAN,cfDNA）有所报道；1977年发现癌症患者的循环DNA，17年后研究显示循环DNA小部分自于肿瘤；1997年香港中文大学DennisLo成功展示了怀有男胎的孕妇血液中含有胎儿的Y染色体。这是产前诊断领域的一次革命。。。。。。ctDNA来源科学家给出了三种主要的解释：1、来自于坏死的肿瘤细胞；2、来自于凋亡的肿瘤细胞；3、来自于肿瘤细胞分泌的外排体。突变特异性探针结合/PCRSafeSeqSBEAMing外显子测序CAPP-Seq（深度测序肿瘤个体化建档法）。。。。。。ctDNA的检测近年来ctDNA的检测方法层出不穷，利用突变标志或者基因重排等来检测ctDNA都是近几年来的新突破，越来越多的学者致力于ctDNA检测的研究。ctDNA检查策略ctDNA突变频率ctDNA甲基化频率cfDNA含量cfDNA完整性微卫星杂合性StratageInconclusion,theplasmaDNAintegrityindexmaybeapromisingmoleculardiagnosticmarkerofmalignancyinbreastlesions.ThefractionalconcentrationofmitochondrialDNAinplasma胰腺癌组织样本中，KRAS基因G12V,G12D和G12R的突变率分别为37.3%（28/75）,29.3%(22/72)和8%（6/75），同时，在血清ctDNA中G12V,G12D和G12R的突变率分别为34.6%（26/75）,38.6%(29/75)和5.3%(4/75).分析组织和血清ctDNA中KRAS突变与胰腺癌预后的关系，他们发现在EUS-FNA肿瘤组织中KRAS的突变与胰腺癌的预后无关，而血清ctDNA样本中KRAS的突变与胰腺癌患者不良预后相关。a:ctDNA存在的患者，手术后生存率和生存时间明显下降；b:与CT发现肿瘤复发的时间相比，ctDNA对于预测肿瘤复发的时间要明显低于CT。血浆DNA甲基化发生情况及血浆DNA拷贝数异常情况，用于肿瘤的诊断及肿瘤负荷的监测；血浆DNA的甲基化程度在肝癌患者显著上升，可用于肝癌的诊断；灵敏度为81%，特异性为94%；血浆DNA拷贝数异常用于肝癌诊断，灵敏度为81%，特异性为88%。血浆DNA的甲基化程度在肝癌患者显著上升，可用于肝癌的诊断；灵敏度为81%，特异性为94%；血浆中短链DNA的cyclinD2基因（D12S1725）的微卫星杂合性缺失，患者的预后显著变差，可作为乳腺癌患者重要的预后标志物。ctDNA优势无创、无损、实时、多次；当不能获得肿瘤组织信息时，可以开展“液体活检”；假阳性率低，灵敏度高，准确度高，可用于肿瘤的早期诊断；能够对肿瘤的演化和适应性改变进行监控；能够对肿瘤病人的治疗效果进行实时监控（尤其在追踪肿瘤转归、转移和复发等方面），并进行个性化的治疗方案指导（如个性化靶向药物用药，个性化化疗等）。ctDNA的临床应用ctDNA临床应用面临的挑战发展适合临床应用的ctDNA检测技术(快速、精准、低成本)个体化的ctDNA标志物癌症的靶向性治疗还远远跟不上科学家们的癌症研究。如何将研究成果转化为医疗进步，这也是ctDNA研究中最现实的一个问题。谢谢各位的聆听！