中国药科大学药物分析课件第六章

芳酸及其酯类药物的分析典型药物鉴别试验含量测定体内药分返回主目录练习与思考杂质检查第六章基本要求基本要求一、掌握水扬酸类、苯甲酸类药物的鉴别和含量测定的基本原理与方法。二、熟悉其他方酸类药物鉴别和含量测定的基本原理与方法。。三、了解本类药物的体内分析方法。返回一、水扬酸类（一）典型药物结构第一节典型药物分类与理化性质OHCOOH水杨酸（salycylicacid）COOHOCOCH3阿司匹林（aspirin)COONaOHNH2对氨基水杨酸钠（sodiumaminosalicylate)OCOCOOHOH双水杨酯（salsalate)COONHCOCH3OCOCH3贝诺酯（benorilate)1.酸性SA(PKa2.95)、ASA(PKa3.49)、双水杨酯均有酸性。2.溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。3.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。4.芳伯氨基和酚羟基特性：5.水解特性：ASA、双水杨酯及其制剂应检查水杨酸,对氨基水杨酸钠和贝诺酯检查间氨基酚和对氨基酚。（二）主要理化性质（一）典型药物结构苯甲酸及其钠盐(benzoicacid）二、苯甲酸类COOH(Na)COOC2H5OH羟苯乙酯(ethylparoben)SO2COOHN(CH2CH2CH3)2丙磺舒(probenecid)NHCOOHCH3CH3甲芬那酸(mefenamicacid)（二）主要理化性质1.溶解性:均为固体，有一定溶点。除钠盐溶于水，其余不溶。2.UV和IR光谱特性：分子结构中具有苯环,有UV和IR特征吸收。3.具有酚羟基特性：4.分解反应特性：苯甲酸钠分解为苯甲酸；丙磺舒分解为SO25.酸性：苯甲酸、丙磺舒和甲芬那酸有游离的羧基，可用NaOH直接滴定测定其含量。三、其他芳酸类(一)典型药物结构ClOCCH3CH3COOC2H5氯贝丁酯（clofibrate）CHCH3COOHCHCH2CH3CH3布洛芬（ibuprofen）(二)主要理化性质1.溶解性：水中不溶，有机溶剂溶解，氯贝丁酯为液体；布洛芬为固体，有一定熔点。2.UV和IR特征吸收光谱：基于分子结构中具有苯环和特征基团。返回一、与三氯化铁反应含有酚羟基药物可与FeCl3反应；能与FeCl3反应不一定含酚羟基.第二节鉴别试验OHRAr-OH+FeCl3紫堇色铁配位化合物pH4~61.直接反应SA在中性或弱酸性条件下，与FeCl3生成紫堇色配位化合物赭色苯甲酸（中性或碱性水溶液）+FeCl3COOHCOOOHOFeFe+4FeCl3()23+12HCl6丙磺舒与NaOH成钠盐后，在pH5.0~6.0中与FeCl3生成米黄色布洛芬与高氯酸羟胺，N，N’-双环基己羧二亚胺及高氯酸铁反应，即显紫色[JP（14）方法]。基于分子中-COOH的结构。2.水解或分解后与三氯化铁反应ASA水解成SA后与FeCl3反应，成紫堇色二、重氮化-偶合反应凡是分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物均可反应。Ar-NH2Ar-NH-COCH3NaNO2+HClAr-N2ClH2OpH=7ˉpH7pH7ˉˉOHAr-N=N-Ar-N=N-Ar-N=N-SO3HSO3H-OH-OHNHCH2CH2NH21.直接反应对氨基水杨酸钠2.水解后反应贝诺酯具有潜在芳伯氨基3.甲芬那酸与对-硝基苯重氮盐在NaOH介质中偶合产生橙红色。CH3CH3NHCOOHCOOHNHCH3CH3NaOHNNO2NNN++NO2+K2Cr2O7深蓝色棕绿色甲芬那酸+H2SO4黄色绿色荧光[JP(14)△三、氧化反应1.ASA酸水解生成SA和CH3COOH：SA的mp为156℃～161℃。2.双水杨酯水解生成SA：SA的mp为158℃。3.氯贝丁酯碱水解后与盐酸羟胺生成异羟肟酸盐，在弱酸条件下再与三氯化铁反应生成紫色的异羟肟酸铁。四、水解反应1.苯甲酸盐加热分解生成苯甲酸升华物，可用于鉴别。2.丙磺舒与NaOH熔融分解成Na2SO3,经硝酸氧化成Na2SO4。3.丙磺舒加热分解，生成SO2气体，有臭味五、分解产物反应1.测定λmax；λmin。例如：布洛芬用0.4%NaOH溶液制备0.25mg/ml；λmax；265nm,273nm;λmin。245nm,271nm。2.在λmax处测定一定浓度供试液的吸收度A。例如：羟苯乙酯，5μg/mlλmax=295nm;A=0.483.在λmax处测定供试液的百分吸收系数。例如：贝诺酯在λmax=240nm;E1%1cm=730~760六、紫外吸收光谱法4.在规定的波长测定吸收度比值（即双波长吸收度比值法）例如：对氨基水杨酸钠10μg/ml;A265/A299=1.56~1.56再例如：甲芬那酸14μg/ml;A278~280/A348~352=1.15~1.30七、红外吸收光谱法水杨酸的红外吸收图谱3700~2900cm-1N-H、O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H返回3700~2900cm-1N-H、O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱第三节特殊杂质检查一、ASA中特殊杂质的检查1.溶液的澄清度主要检查Na2CO3中不溶物，有苯酚；醋酸苯酯；水杨酸苯酯；乙酰水杨酸苯酯。ASA溶解因此ASA溶液应澄清。2.游离水杨酸检查利用SA可与FeCl3呈色，用比色法检查。3.易炭化物检查主要检查ASA中能被硫酸炭化显色的低分子有机杂质。采用与标准比色液比色的方法检查。主要检查成品药物中可能残留的间氨基酚。间氨基酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要严格控制。双向滴定法：利用间氨基酚溶于乙醚，取3.0g样品用乙醚提取0.02mol/LHCl测定方法滴定V＜0.3ml。HPLC法：采用内标法，以磺胺作内标（USP）二、对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查三、羟苯乙酯中有关物质的检查BP收载的方法，由于杂质的结构不清，故采用TLC法中的供试品自身对照法：固定相：GF254C18化学键合硅胶展开剂：甲醇-水-冰醋酸反相TLC法甲芬那酸是以邻-氯苯甲酸和2，3-二甲基苯胺在Cu的催化下缩合而成，因此成品药物中要检查铜盐及有关物质。分光光度法：利用Cu2+与Na-DDC呈色后测定A1.铜盐检查法原子吸收分光光度法：BP（2000）2.有关物质的检查主要检查的是酰胺、二甲基苯胺和邻氯苯甲酸各国药典均采用TLC法中的自身高低浓度对照法。四、甲芬那酸中特殊杂质的检查五、氯贝丁酯中特殊杂质的检查主要检查成品药物中残留的对氯酚原料和挥发性杂质GC-FID法HPLC法：以对-羟乙基酚作内标，用正相HPLC2.挥发性杂质的检查方法GC法1.对氯酚检查返回一、酸碱滴定法（一）直接滴定法基于本类药物-COOH；可用碱直接滴定，如ASA的含量测定，其原理如下：第四节含量测定1.原理：2.条件：在中性乙醇中，以酚酞作指示剂；摩尔比为1:1。3.应用：多国药典用于双水杨酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬测定；USP和BP还用于甲芬那酸的测定。COOHOCOCH3+NaOHCOONaOCOCH3+H2O（二）水解后剩余滴定法1.ASA含量测定原理：条件：水溶液2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2OCOOHOCOCH3+2NaOHCOONaOH+CH3COONa具体试验：I份NaOHI份NaOHVVOVo-V相当于ASA消耗硫酸的ml数ASA%=(Vo–V)×F×T/W×100%2.羟苯乙酯的含量测定2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2OCOOC2H5HO+NaOHCOONaHO+C2H5OH（三）两步滴定法1.ASA片的含量测定第一步为中和ASA+NaOHASA-Na+H2O水解产物SA+NaOHSA-Na+H2O酸性稳定剂+NaOH中性盐第二步为水解与测定2.氯贝丁酯含量测定第一步：中和酸性杂质第二步：水解与测定ClOCH3CCOOC2H5CH3+NaOHClOCH3CCOONaCH3+C2H5OHNaOH+HClNaCl+H2O二、亚硝酸钠滴定法对氨基水杨酸钠有芳伯氨基,在HCl中与NaNO2发生重氮化反应Ar-NH2+NaNO2+2HClAr-N2Cl+NaCl+2H2O因此可用亚硝酸钠滴定法测定其含量，此法在下章重点讨论。三、双相滴定法是指在水相和有机相中的滴定。如苯甲酸钠的含量测定：生成的苯甲酸不溶于水，终点pH突跃不明显，不易观察。苯甲酸在乙醚中易溶，在水相中加入乙醚将滴定中产生的苯甲酸萃取入醚层。因此用双相滴定可使反应完全终点明显。COONa+HClCOOH+NaCl（一）直接紫外分光光度法丙磺舒片的测定：Ch.P(2000)在HCl中，采用百分吸收系数法。BP(1998)再盐酸-乙醇,采用百分吸收系数法.USP(24)用氯仿提取后，采用对照品比较法。四、紫外分光光度法（二）离子交换-紫外分光光度法氯贝丁酯及其制剂Ch.P(2000)采用酸碱滴定法；当含有酸性杂质对氯酚时，可采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，在甲醇溶液中，226nm波长处，采用对照品比较法。具体计算：W×1000×1/100×1/100=Cu(μg/ml)Au/As=Cu/CCu=C(Au/As)W(mg)=10×Cu=10×C(Au/As)（三）柱分配色谱-紫外分光光度法USP(24)采用此法同时测定ASA胶囊中ASA和SA。1.SA的限量测定色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。供试品液：CHCl3液洗脱液1：CHCl3洗脱液2：HAC-乙醚硅藻土，FeCl3-尿素玻璃棉硅藻土，Na2CO3供试品液：CHCl3-HCl液洗脱液1：HAC-CHCl3(1:10)10ml洗脱液2：HAC-CHCl3(1:100)85ml1-杂质先洗脱2-SA后洗脱max=306nmAu＜As1-杂质先洗脱2-ASA后洗脱max=280nmASA(mg)=C(Au/As)2.ASA的含量测定色谱柱的制备；对照品溶液的制备；供试品溶液的制备。Ch.P(2000)ASA的胶囊剂的含量测定采用此法。USP（24）ASA片、对氨基水杨酸钠、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制剂，采用此法。五、HPLC法（一）ASA栓剂的含量测定色谱条件：色谱柱ODSC18；流动相为甲醇：0.1%二乙胺：HAC(40:60:4);检测波长280nm；内标物为咖啡因。系统适用性试验：n＞2000;ASA与SA与内标物的R＞1.5具体计算：Cx=Rx/RR×CRW(g)×1/50×2/50=CxW测=1250×Cx标示量%=W测/W×W平/标示量×100%=Cx×1250×W平/W×标示量×100%色谱条件：色谱柱苯基硅胶柱；流动相为NaH2PO30.1%HAC液-0.1%HAC乙腈液(50:50);检测波长254nm。系统适用性试验：n＞3900;T＞2.3;重复性RSD＜1.5%具体计算：（二）丙磺舒原料的含量测定W×1/100=Cu(mg/ml);Cu=Au/As×C供试品中丙磺舒(Mg)=100C(Au/As)返回一、血清中ASA和SA浓度的HPLC法色谱条件：色谱柱为ODS-C18(150mm×4.6mm,5μm)流动相为甲醇-水-正丁醇(30:20:1)检测波长为237nm；内标物为苯甲酸。血清样品预处理血清100μl+HClO450μl+不同浓度ASA和SA+内标液涡旋混合2min离心5min取上清液20μl进样。第五节体内药物分析回归方程：以峰高比（H标/H内）对浓度回归ASA的回归方程：Y=5.8×10-3+5.29×10-2Xr=0.9996SA的回归方程：Y=6.0×10-3+8.33×10-2Xr=0.9981ASA和SA的线性范围分别为：1～20μg/ml;2～30μg/ml回收率：空白血清+五种不同浓度测定，ASA为96.0%～106.0%;SA为92.0%～119.5%;（五种不同浓度均应在线性范围内）色谱条件：色谱柱为Li