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有限公司一次性使用无菌检查方法适用性试验1、样品信息样品名称一次性使用生产厂家有限公司规格型号批号2、培养基及试剂名称生产厂家批号硫乙醇酸盐流体培养基北京奥博星生物技术有限责任公司20190120胰酪大豆胨液体培养基青岛高科技工业园海博生物技术有限公司20180326胰酪大豆胨琼脂培养基北京奥博星生物技术有限责任公司201812100.9%无菌氯化钠溶液广东科伦药业有限公司H17030702沙氏葡萄糖液体培养基青岛高科技工业园海博生物技术有限公司20180619沙氏葡萄糖琼脂培养基青岛高科技工业园海博生物技术有限公司20181120冲洗液及稀释液0.9%无菌氯化钠溶液H170307023、菌种基本信息：菌种名称菌种来源菌种编号菌种代数金黄色葡萄球菌上海鲁微科技有限公司CMCC（B）26003第2代大肠埃希菌上海鲁微科技有限公司CMCC（B）44102第2代生孢梭菌上海鲁微科技有限公司CMCC（B）64941第2代枯草芽孢杆菌上海鲁微科技有限公司CMCC（B）63501第2代白色念珠菌上海鲁微科技有限公司CMCC（F）98001第2代黑曲霉上海鲁微科技有限公司CMCC（F）98003第2代4、菌液制备：2.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨y液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。2.2接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养18～24小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。2.3接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养24～48小时，培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。2.4接种黑曲霉菌的新鲜培养物接种至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌孢子悬液。5、菌落计数：菌种名称稀释级别菌落计数cfu/ml金黄色葡萄球菌6级35大肠埃希菌6级28枯草芽孢杆菌6级22生孢梭菌6级60白色念珠菌6级45黑曲霉6级386、无菌检查直接接种法方法适用性试验6.1供试品制备：取质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液为浸提介质，按管内表面积每10cm2流过内腔1ml,浸提介质，流量约为10mL/min。6.2试验组：取装量为15ml的硫乙醇酸盐流体培养基3管，各接种1ml供试液，并分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；取装量为10ml的胰酪大豆胨液体培养基3管，各接种1ml供试液，并分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。6.3对照组：取装量为15ml硫乙醇酸盐流体培养基3管，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌；取装量为10ml的胰酪大豆胨培养基3管，分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉。6.4上述培养基置规定的温度培养，培养时间不超过5天，逐日观察记录各管试验菌生长情况。6.5验证结果培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨培养基培养时间（d）1234512345金黄色葡萄球菌试验组+++++/////对照组+++++/////大肠埃希菌试验组+++++/////对照组+++++/////生孢梭菌试验组+++++/////对照组+++++/////枯草芽孢杆菌试验组/////+++++对照组/////+++++白色念珠菌试验组/////+++++对照组/////+++++黑曲霉试验组/////+++++对照组/////+++++“/”表示不适用；“-”表示试验菌生长微弱、缓慢或不生长；“+”表示试验菌生长良好与对照管相比，含供试品各容器中的试验菌均生长良好，表明一次性使用输液器带针产品的检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。6.6供试品无菌检查方法的确定：取供试品20个，以无菌操作拆开每个包装，取质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液为浸提介质，按管内表面积每10cm2流过内腔1ml,浸提介质，流量约为10mL/min。10个接种于装量为15ml的硫乙醇酸盐流体培养基中，10个接种于10ml的胰酪大豆胨液体培养基中。另取1个供试品以无菌操作拆开包装，取质量浓度为9g/L的无菌氯化钠溶液为浸提介质，按管内表面积每10cm2流过内腔1ml,浸提介质，流量约为10mL/min，接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，并接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌作为阳性对照。按《中华人民共和国药典》2015年版四部1101无菌检查法中规定的直接接种法进行试验。检验人：复核人：