小鼠神经功能评分

小鼠神经功能评分1．神经行为评分在梗死后24h,按照MasaoShmiizu-Sasamata的方法[3]对所有大鼠进行神经行为评分,评分标准包括:①自主活动的程度,②左前肢偏瘫,③提尾时左前肢伸不直,④抗侧推能力,⑤向左倾斜度,⑥向左环行度,⑦对触须的反应。以上指标无异常为0分,中等异常为1分,严重异常为2分,将各项评分相加,总分为0~14分。2．动物行为学评定①0分:无神经损伤症状;②1分:不能完全伸展对侧前爪;③2分:向瘫痪侧转圈;④3分:向对侧倾倒;⑤4分:不能自发行走,意识丧失。3．大鼠神经损伤严重缺损评分（NeurologicalSeverityScores,NSS）：0分:神经功能正常;1分:轻度神经功能缺损(提尾时左前肢屈曲);2分:中度神经功能缺损(行走时向左侧转圈);3分:中度神经功能缺损(向左侧倾斜);4分:无自发行走，意识减退;5分:与缺血有关的死亡。4.平衡木试验(BeamBalanceTest,BBT):把大鼠置于一宽1.5cm的木条上。木条一端悬空，另一端固定于一块40x40cm的平板中心，以防止大鼠从木条上爬到桌面上使实验失败。木条下备有软垫以防大鼠掉下时跌伤。根据2分钟内大鼠的平衡能力行神经学评分。正常大鼠的平衡能力在1-2分钟。平衡试验评分标准：1在木条上站稳，无摇晃，持续2分钟2在木条上站稳，左右摇晃，未滑下，持续2分钟3在木条上站立，下滑至一侧，未掉下，持续2分钟4在木条上站立不到2分钟即从木条上掉下5试图在木条上站稳、但在数秒钟即掉下6无任何站立能力5.抬高身体摇摆试验（ElevatedBodySwingTest,EBST）：用于测量运动不对称，EBST测量时首先用手提起大鼠的尾根部，大鼠头部悬垂距平面5cm左右，这时大鼠头部会向左侧或右侧旋转，向单测旋转的角度大于100时为计数的标准，记录旋转的方向和角度，一次试验后让大鼠休息1min，再进行下一次实验，重复试验20次，记录总的次数和方向。6.一次性被动回避平台试验(Step-downPassiveAvoidanceTest,SDPAT)是一种用于研究记忆的简单行为模型，主要适用于研究记忆的巩固(memoryconsolidation)和记忆的保持(memoryretention)。该模型含有一定的空间记忆成份，试验箱是一个长方形的封闭空间，高为60cm，箱内有一较小的平台9cmX9cm,高出底面约2cm，动物只能不十分舒服地坚持在平台上，如跑下平台(铜棒，通电，30V)即遭到电击。训练过程是这样的:首先把动物放在平台上，大鼠一般在平台上只能停留几分钟，就会跑下来，但由于底面的金属条是通电的，大鼠在寻找一段时间后，能够找回平台。这时第一次试验结束，24h后，再次把大鼠放在平台上，这时底面的金属条并不通电，记录大鼠在平台上滞留的时间，根据测试间隔时间的长短和在平台上滞留时间的多少来判定大鼠对上次电击的记忆保持能力。7.水迷宫试验(WaterMazeTest,WMT)：用于测量大鼠空间学习能力。每组于移植后的第7周进行。在相同室温（25±2）0C和象限条件下，将3组动物连续训练4d，2次/d，每次限定时间为120s，超过120s仍找不到平台者记为未找到平台，2次间隔为10min，第5天测试。Bederson评分四个功能等级：0分：无神经损伤症状1分：悬尾实验不能完全伸展对侧前爪2分：前肢抵抗对侧推力能力下降？3分：向对侧转圈小鼠脑缺血神经功能障碍行为学评价的研究进展缺血性脑卒中是一种高发病率、高致残率及高致死率的疾病。在脑缺血及脑缺血再灌注损伤的研究中，最常使用大鼠或者小鼠的可逆性大脑中动脉阻塞（ｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙｏｃｃｌｕｓｉｏｎ，ＭＣＡＯ），因此小鼠ＭＣＡＯ模型在研究脑缺血及再灌注损伤病理生理变化及基因表达方面有着更大的优势脑梗死体积与神经功能缺损的行为学评价是判定脑缺血严重程度的重要指标，许多研究报告对大鼠的行为学评价进行了阐述，而对小鼠的研究较少，其评价指标大多移植于大鼠的评价体系，至今为止，还没有对这一系列的综合性评价达成共识，不仅有许多不同的测试在使用，而且所应用测试的数量和频率也没有统一的标准。本文对小鼠脑缺血神经功能损伤评价方法包括感觉功能、运动功能、学习能力以及综合性评价做一综述。1.感觉功能评价小鼠ＭＣＡＯ模型中，感觉功能的缺失是对其神经功能判定的一个可靠的指标目前最常用的是墙角试验（ｃｏｒｎｅｒｔｅｓｔ），最先由Ｓｃｈａｌｌｅｒｔ改良，具体操作是将两个尺寸为３０ｃｍ２０ｃｍｃｍ的纸板呈３０夹角放置，将小鼠置于夹角之间，进入夹角深部，双侧的触须受到刺激后会站立并转身面向夹角的开口端。正常小鼠从右面或左面转身的概率基本相等，而一侧脑损伤小鼠会优先向脑损伤侧转身。墙角试验可以准侧检测出感觉功能障碍，甚至９０后的轻度局灶性脑缺血，特别是在纹状体发生缺血时。此实验简单易行，应用广泛，但Ｌｉ认为墙角试验对感觉功能恢复程度的检测不敏感，可能是因为这项试验是对感觉和运动功能的综合评价，需要两种功能都较好的恢复后才能检测出来，而且不能准确反映单侧肢体的运动功能变化。粘签试验（ｓｔｉｃｋｙｄｏｔｔｅｓｔ又称感觉不对称试验，用来确定皮肤敏感性和感觉功能的整合性。缺血发生在大脑皮层的感觉区、皮质脊髓束和纹状体时，感觉功能发生明显缺失。具体方法是将直径ｍｍ的圆形背胶标签贴附在小鼠相对无毛的手腕处，当回到饲养笼时，一个正常的小鼠会用牙齿迅速除掉每个圆形标签，而发生脑缺血的小鼠首先除掉附着在正常前肢的标签，然后是病变的一侧，并需要花费更多的时间，缺血性病变导致了感觉功能的不对称性此外，时间的延迟还表明运动功能的缺失，嘴和前肢运动障碍导致去除粘性标签相对困难。后续的测试可以通过逐步增加患侧所粘标签的大小并减小健侧的标签大小，直到患侧肢体所受的的刺激变得比健侧的更突出，小鼠就开始首先从患侧的肢体消除刺激〔１０〕该方法主要用于对多种病因导致的前肢感觉、皮质运动区损伤后的功能评价，与人类顶叶受损后对侧肢体的忽视症状类似。圆筒试验（ｃｙｌｉｎｄｅｒｔｅｓｔ又称肢体不对称使用试验，最早应用于大鼠的行为学评价〔１１〕通过改良用来评估小鼠前肢使用和旋转的对称性，当小鼠一侧的感觉皮层、皮质脊髓束、纹状体受到缺血损害时前肢的使用发生不对称性，进一步观察会发现离散运动障碍和协调运动也相继发具体操作是将小鼠放置在一个直径９ｃｍ，高度１５ｃｍ的透明圆桶内。当小鼠后腿站立时，分别记录最初左前肢、右前肢及两侧前肢同时碰触筒壁的次数。当一侧前肢（如右侧）碰触筒壁后，另一侧前肢（左侧）在右侧未移开时也碰触到了筒壁，记录一次右侧和一次同时碰触。当两侧前肢交替碰触筒壁时，记录为同时碰触，共进行２０次重复试验。最终得分＝（右前肢的运动－左前肢运动）／（右前肢运动左前肢运动）１００％。得分越高说明两侧肢体的不对称程度越明显。这种评分方法即使对于没有经验的评价者也有较高的可信度。２运动功能评价运动功能的不协调性和伴随出现的的代偿反应是人类中风的突出特点。大部分脑缺血的动物模型都会在行走、转弯和游泳等运动中出现相应的功能障碍。Ｗｈｉｓｈａｗ〔１３〕在１９８６年建立了一种大鼠以前肢通过窄缝抓取食物的评价方法，称为伸爪试验（ｓｋｉｌｌｅｄｒｅａｃｈｉｎｇｔｅｓｔ该方法可评价单侧肢体的运动功能，区分肢体损伤与修复的细小差〔１４〕，还可以用来评估感觉运动皮层和皮质脊髓束的功能缺失〔１５，１６〕，对小鼠同样适用。伸爪实验盒用透明玻璃制成，长宽高分别为２０ｃｍ，６ｃｍ和２０ｃｍ，在盒的前壁正中央开一条宽度为０畅５ｃｍ狭长的缝隙，缝隙底部前壁的外侧有放置食物片的凹槽，迫使小鼠从缝隙处伸出患侧前肢抓取食物。正常小鼠可从缝隙处伸出前肢，抓取并吃到凹槽内的食物；而脑缺血后的动物不能完成。定的反映脑缺血慢性损伤变化，对动物伸爪、抓食及吃食过程可作细致的轨迹分析，进而发现更多的变化特征〔１７〕烟囱试验（ｃｈｉｍｎｅｙｔｅｓｔ最早由Ｂｏｉｓｓｉｅｒ〔１８〕改良，具体发方法是在一根长２５ｃｍ，直径３０ｍｍ的透明玻璃管的２０ｃｍ一个记号，水平放置，将小鼠放置于入口处，当其爬至管底时，将玻璃管垂直放置，使其头朝下，正常状态下小鼠会通过快速反应学会倒着走路，到达标记处所需的时间最长不会超过１２０ｓ，而发生脑缺血后所用时间会明显延长，此实验常用来测试小鼠的运动协调性。立柱试验（ｖｅｒｔｉｃａｌｐｏｌｅｔｅｓｔ）主要对前肢的力量，抓握能力和平衡性进行评估〔１９〕〔２０〕提出并改进了评分方法，将一根长１５英寸、直径０畅７５英寸的木棍用胶带缠绕，以增加摩擦力，水平放置后将小鼠放在木棍中央，将木棍慢慢抬起直至与地面垂直，记录小鼠在木棍上的时间，评分标之间；３ｍｉｎ，４０＜时间＜６０ｍｉｎ，＞６０〔２１〕提出的前肢踩空试验（ｆｏｏｔｆａｕｌｔｔｅｓｔ）也可用于前肢运动功能的评价，将小鼠放置在不同尺寸的６边行的铁丝网上，小鼠在铁丝上行走，在此过程中会出现踩空或踩滑现象，记录前肢总共行走的次数以及踩空的次数，踩空的次数越多表明小鼠脑损伤越大。爬板试验ｃｌｉｍｂｉｎｇｂｏａｒｄｔｅｓｔ〔２２〕是将小鼠置于一块包有铜丝网的有机玻璃平板上，先保持平板在水平位置，后逐渐将平板竖起，至小鼠不能攀爬而从平板上落下，记录此时平板轴线与水平面之间的角度，即爬板角度，重复三次取平均值。爬板试验用于评价整体协调功能，也是一种简便且可定量的指标，但是，该指标变化的恢复较快，仅能用于３内的急性功能损伤。为了提高神经功能行为评价的准确性及可信度，近年来各种发明及改良的装置、软件层出不穷。旋转加速试验（ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄｒｏｔａｒｏｄｔｅｓｔ首先用于研究神经系统功能的运作，后来才在脑损伤如脑缺血的研究中广泛应用〔２３〕，主要用来评估脑缺血动物运动的平衡和协调能力。Ａｈｍａｄ〔２４〕在研究中将其称为“旋转跑步机测试”，动物放置在直径３ｃｍ形转盘的中央，转盘与一个可调节速度的转轴连接，实验开始后转轴在１分钟内从０加速到２４记录小鼠在圆盘上的时间，最大分值为６０，脑缺血的严重程度与得分成反比。为了排除试验中可能出现的偶然情况，每只动物可做３次测试，取平均值作为最终得分。此法操作简单，可行性大，且灵敏度较高。旷场试验（ｏｐｅｎｆｉｅｌｄ）需要一旷场实验敞箱的装置〔２５〕，木质，周壁及底面涂黑，底面由面积相等（１０ｃｍ１０ｃｍ）的方格组成，将小鼠放入旷场正中格，用摄像系统记录动物５ｍｉｎ的行为变化，包括水平运动、垂直运动及粪便粒数，数据用相应的统计软件分析。该试验不仅可以用来评价小鼠的运动功能，也可用粪便粒数反应动物的焦虑状态〔２６〕挂试验（ｈａｎｇｉｎｇｔｅｓｔ最早开始于大鼠的行为学评价，后经Ｍｕｈａｍｍａｄ〔２７〕的改进成功应用于小鼠，该试验〔２８〕是将小鼠尾部１ｃｍ处用胶带粘贴悬挂于墙上，用摄像设备记录小鼠１ｍｉｎ内在墙上运动情况，输入计算机保存图像。用计算机软件处理平均角、优势角和转动次数等参数，并计算出相对转动悬挂试验可以反映小鼠的偏瘫症状、运动和平衡能力，与梗死面积有较好的相关性，可客观的反应脑缺血损伤及神经症状〔２９〕３学习与记忆能力评价人类脑卒中的发生经常伴随着认知与记忆功能障碍，因此在脑缺血的动物模型中也需要对认知、记忆功能进行检查。常用的评估方法包括水迷宫和跳台试验。水迷宫最初由Ｍｏｒｒｉｓ〔３０〕提出，最先应用于大鼠的认知功能评价，后来发现它对小〔３１〕和人类〔３２〕同样适用。将测试小鼠放置于直径的游泳池中，通过其视觉记忆找到隐藏于水下１ｃｍ的平台，如果找不到，表明其记忆受损，其损伤程度可用找到平台所需的时间进行量化，平台的位置也可每天变化。当小鼠的前额叶皮层、纹状体、小脑受损伤时测试结果明显，对海马损伤尤其敏感。水迷宫操作简单，可信度高，在国内外使用较多。旋臂迷宫试验（ｒａｄｉａｌａｒｍｍａｚｅ）可用于评估脑缺血动物的学习和记忆功能障碍，同样对海马的损伤尤为敏感〔３３〕其实验装置包括一个中央平台及由平台向四周突出的八个或十二个径向臂〔３４〕试验开始之前，将食物放置在某一径向臂的末端，动物需禁食一段时间，以保持一