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DNA重组技术的基本工具1、原理：2、操作水平：3、又称：4、优点：基因重组DNA分子水平DNA重组技术或基因拼接技术⑴定向改造生物性状⑵克服远缘杂交不亲和的障碍⑶育种周期短基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达基因重组一、基因工程的概念二、基因工程的基本工具看书，思考以下问题：1、基因工程中三种基本工具的作用分别是什么？2、工具酶的作用部位分别在哪？3、具备什么条件才能充当“分子运输车”？•解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？关键步骤一的工具：关键步骤二的工具：关键步骤三的工具：基因的剪刀——限制酶基因的针线——DNA连接酶基因的运载工具——运载体（一）“分子手术刀”——限制性核酸内切酶1、来源：主要来自原核生物2、特点：具有专一性（特异性）表现在两方面：(1)识别双链DNA中特定核苷酸序列(2)从特定部位的两个核苷酸之间切开3、作用：特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开4、结果：产生黏性末端或平末端SmaⅠ平末端平末端EcoRⅠ黏性末端黏性末端黏性末端和平末端限制酶所识别的序列有什么特点•限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。（二）“分子缝合针”——DNA连接酶1、种类：⑴E·coliDNA连接酶⑵T4DNA连接酶2、作用：可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，E·coliDNA连接酶或T4DNA连接酶即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？T4DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙“缝合”起来，但效率较低DNA连接酶DNA聚合酶连接DNA链双链单链连接部位在两DNA片段之间形成磷酸二酯键将单个核苷酸加到已存在的核酸片段上，形成磷酸二酯键常用的运载体：质粒、噬菌体和动、植物病毒等（三）“分子运输车”——运载体载体必须具备的条件如果载体对受体细胞有害将怎样？目的基因是否进入受体细胞，没有标记基因我们能否鉴定？假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？作为载体没有切割位点将怎样？作为载体的必要条件1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）4、对受体细胞无害（三）“分子运输车”——运载体2、种类：1、需要具备的条件：（1）在受体细胞中稳定存在，能自我复制（2）有一个或多个切割位点（3）有标记基因（4）对受体细胞无害质粒、噬菌体、动植物病毒等以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，试分析：①GC…②AATTC…③…GC④…CTTAACG…G……CG…G(1)其中①和是由一种限制酶切割形成的末端，（2）和是由另一种限制酶切割形成的末端，反馈练习：•在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶•基因工程常用的受体细胞有（）(1)大肠杆菌（2）枯草杆菌（3）支原体（4）动植物细胞A.（3）（4）B.（1）（2）（4）C.（2）（3）（4）D.（1）（2）（3）不属于质粒被选为基因运载体的理由是A、能复制(）B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD1、下列不适合用于基因工程的运载体是（）A、质粒B、噬菌体C、细菌D、病毒选我C2、下列说法正确的是：（）A、限制酶的切口一定是GAATTC碱基序列B、质粒是基因工程中唯一的运载体C、重组技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、运载体D、利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆”选我D审题3、下列黏性末端属于同种内切酶切割而成的是（）A、①②B、①③C、①④D、②③TCGAGCTTAAAGGTTCCAAGCTTCAGAATTCG③①②④4、下列哪一种酶是基因工程的工具酶（）A、DNA连接酶B、DNA酶C、RNA酶D、运载体选我AA记住了基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是（）A、人工合成目的基因B、目的基因与运载体结合C、将目的基因导入受体细胞D、目的基因的检测和表达C